HPLC法测定坎格雷洛原料药中的有关物质

目的:建立坎格雷洛原料药有关物质的HPLC测定方法。方法:采用Waters Symmetry C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以15 mmol·L^(-1)磷酸氢二铵高氯酸钠溶液(用磷酸调节pH至7.0)-乙腈为流动相,梯度洗脱;流速1.0 mL·min^(-1),检测波长242 nm;柱温30℃。结果:研究确定了坎格雷洛4个主要已知杂质,分别为A,B,C,D,其相对主成分的响应因子依次为0.590,0.510,2.27,0.660,并据此选择了杂质对照品外标法对4个已知杂质进行定量分析,对未知杂质则采用面积归一化法进行限度控制。杂质A,B,C和D均能与主成分良好分离,检测限满足控制要求,定量限浓度分别为1.00,0.048 0,0.025 0,0.075 0μg·mL^(-1),并分别在1.00~8.50,0.048 0~1.50,0.030 0~1.50,0.075 0~7.50μg·mL^(-1)范围内线性关系良好。加样平均回收率(n=9)均在90%~110%之间,RSD均小于5.0%。结论:经方法学验证,本方法既可用于坎格雷洛原料药主要工艺杂质和降解杂质A,B,C,D的准确定量,也可以对其未知杂质进行限度控制。