细胞遗传学技术在儿童急性白血病诊断中的应用价值

急性白血病(acute leukemia,AL)是造血干细胞恶性克隆性疾病,为发病率占首位的小儿临床恶性血液肿瘤疾病。AL可以分为两大类:急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)和急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)。主要临床症状为贫血、出血、器官浸润和感染等,严重威胁患儿生命安全[1]。国际上一般通过MICM[综合形态学(morphology)、免疫学(immunology)、细胞遗传学(cytogenetics)、分子生物学(molecule biology)]分型对初诊恶性血液病患者进行准确诊断与规范治疗,以提高患者生存率[2-4]。因此,及时、有效的诊断对于AL患儿的预后和治疗具有十分重要的意义。本研究采用常规染色体核型分析和荧光原位杂交技术对140例AL患儿进行检测,探讨联合检测对提高白血病染色体异常检出率的价值。

1489例外周血染色体核型分析

采用人体外周血液进行染色体的核型分析并发现其与先天愚型、流产、死产、原发性闭经、性腺发育异常有着密切关系。本文对各种患者的异常核型的发生基础做了一些阐述。

使用经固定细胞的DNA检测Prader-Willi综合征

目的探讨以外周血染色体检查或荧光原位杂交(FISH)检查剩余的固定细胞作为DNA来源,采用甲基化特异性(MS)聚合酶链反应(PCR)与甲基化特异性多重连接探针扩增(MS-MLPA)方法进行Prader-Willi综合征(PWS)分子检测的可行性,为采用少量全血液样本同时开展染色体、FISH和分子检测奠定基础。方法将13例受试样本分为正常对照组(3例)、确诊组(2例)和疑似组(8例)3个组。将所有的冻存固定细胞进行离心,弃固定液,采用基因组DNA提取试剂盒进行DNA提取,13例PWS样本同时采用MS-PCR与MS-MLPA进行检测。结果 13例DNA样本的A260/A280比值平均为1.94±0.1、浓度平均为(64.0±10)ng/μL、片段大小均在10 kb以上;MS-PCR检测发现正常对照组父源与母源条带均存在,确诊组仅存在母源条带、父源条带缺失,疑似组父源与母源条带均存在;MS-MLPA结果表明除确诊组2例提示为父源缺失型PWS外,其余2个组结果都提示为正常。结论来源于固定细胞的基因组DNA在纯度、浓度及完整性方面均可满足MS-PCR以及MS-MLPA检测的实验要求,可用于PWS临床分子检测及其相关实验。

骨髓细胞固定液DNA提取与质量评价的实验研究

目的利用骨髓染色体核型分析后剩余骨髓细胞固定液标本提取基因组DNA并评价DNA质量。方法将60例骨髓细胞固定液标本按保存时间的不同分为3组，同时另取新鲜骨髓标本（冻存于-80℃）20例，利用天根公司DNA提取试剂盒（离心柱型）提取基因组DNA，通过紫外分光光度仪检测DNA浓度与纯度、DNA凝胶电泳观察DNA条带、聚合酶链反应检测有无不同片段大小的目的基因的扩增以评价DNA质量。结果骨髓细胞固定液标本及新鲜骨髓（冻存）标本所提取的基因组DNA的A260／A280比值分别为1．93±0．03、1．92±0．04；两者纯度比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；不同保存时间（〈3年、3～5年、〉5年）的骨髓细胞固定液标本所提取DNA的A260／A280比值分别为1．94±0．03、1．91±0．03、1．93±0．04，其纯度差异无统计学意义（P〉0．05）。上述实验标本均能通过PCR反应扩增出不同片段大小的目的条带。结论利用染色体核型分析后剩余的骨髓细胞固定液标本可以提取出质量合格的基因组DNA，其可作为分子生物学相关研究的标本来源。

1例伴MLL-AF10幼儿急性巨核细胞白血病生物学特征分析

急性巨核细胞白血病（AMKL）是一种罕见的急性髓系白血病，常见于婴幼儿，该病具有发病急，病程短，病情凶险，复发率高等特点。因其缺乏典型的临床表现并具有复杂的生物学特征，临床误诊率较高。现将上海市儿童医院收治的l例AMKL患儿报道如下，以提高对AMKL的认识。患儿，女，l岁8个月，因“发现帆小板下降1月余”就诊。患儿起初因无明显诱因出现发热，伴咳嗽，至当地医院就诊，查血常规“白细胞（WBC）6．9×10^9／L,血红蛋白（Hb）92g／L，血小板（PLT）26×10^9／L，C反应蛋白（CRP）7．18mg／L”，遂于当地住院治疗，给予抗感染治疗后，患儿PLT上升至52×10^9／L，半月后门诊复查“PLT47×10^9／L”，外院随访PLT未见明显好转，后至上海市儿童医院就诊，查血常规“WBC3．26×10^9／L，中性粒细胞（NE）9％，淋巴细胞（LY）87％，Hb93g／L，PLT27×l0^9／L，CRP2mg／L”，遂以“PLT减少症”收治人院。

细胞遗传学检测方法对MLL基因异常儿童急性白血病的诊断意义

目的探讨常规细胞遗传学(CC)方法和荧光原位杂交(FISH)技术诊断混合谱系白血病(MLL)基因异常、染色体11q23异常儿童急性白血病(AL)的价值。方法选取2016年6月—2021年6月上海市儿童医院收治的初发AL患儿404例,分别采用CC法和FISH技术进行细胞遗传学分析,比较2种方法MLL基因异常检出率差异。结果404例患儿中,采用FISH技术检测出57例(14.1%)MLL基因异常,包括急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿40例,其中MLL基因探针信号数目异常23例、MLL基因重排17例;急性髓系白血病(AML)患儿17例,其中MLL基因探针信号数目异常2例,MLL基因重排15例。CC法检出MLL基因异常27例(6.7%),包括ALL患儿15例,其中明确MLL基因重排伙伴基因13例;AML患儿12例,其中明确MLL基因重排伙伴基因11例。2种方法MLL基因异常检出率差异有统计学意义(P<0.001)。结论FISH技术MLL基因异常检出率高于CC法,CC法染色体核型分析可直观呈现MLL基因重排异常类型并明确其伙伴基因;2种方法可优势互补,对MLL基因异常AL的诊断均有较大意义。

非语言方式心理护理干预在ICU气管插管清醒患者中的影响分析

研究非语言方式心理护理干预对重症监护病房(ICU)气管插管清醒患者的影响。方法:将50例2020年4月-2021年4月ICU气管插管清醒患者纳入研究,随机划分观察组(常规护理)、对照组(非语言方式心理护理)。结果:护理前SDS、SAS、RCSQ无差异(P>0.05);护理后观察组SDS、SAS更低,RCSQ更高(P<0.05);护理满意度观察组更高(P<0.05)。结论:非语言方式心理护理对ICU气管插管清醒患者,可以帮助患者消减不良情绪,提升睡眠质量,且获得了较高的护理满意度。

47，XY，t（2；21）（q21；q22．3），＋21一例

患儿男，5个月。因感冒检查发现心脏杂音人院。入院心脏超声检查示先天性心脏病：动脉导管未闭、卵圆孔未闭、有室肥大、轻度肺高压。同时发现患儿眼裂小、眼角外侧上翘、眼间距宽等特殊面容。细胞遗传学检查：取外周血常规淋巴细胞培养、制片、G显带。

儿童急性淋巴细胞白血病细胞遗传学特征分析

目的分析儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）细胞遗传学变化的特点。方法以2009年1月至2011年11月确诊的90例初发ALL患儿为研究对象，采用染色体核型分析及荧光原位杂交（FISH）技术检测患者骨髓白血病细胞的细胞遗传学和分子生物学变化。结果①染色体核型分析：有分裂象者66例，其中异常者35例（53．0％）；无分裂象者24例。@FISH检测：对31例染色体核型正常和24例无分裂象的患者进行FISH检测，异常者分别为7例（占22．6％）和14例（58．3％），其中无分裂象患者异常检出率与有分裂象者核型分析异常检出率差异无统计学意义（P=0．655）；55例患儿中TEL—AML1融合基因阳性16例（29．1％），MLL重排3例（5．5％），bcr-abl融合基因阳性2例（3．6％）。（3）90例患儿通过两种检则方法共检出细胞遗传学异常56例（占62．2％）。结论儿童ALL易出现细胞遗传学改变；对于有足够分裂象的患者，常规染色体核型分析仍是可靠的方法，对分裂象质量低或无分裂象的儿童ALL患者，FISH检测异常克隆能提高细胞遗传学异常检出率。

儿童急性淋巴细胞白血病单中心分子细胞遗传学与临床特征分析

目的分析儿童初发急性淋巴细胞白血病(ALL)分子细胞遗传学异常及其与临床特征的关系。方法以2009年1月至2018年12月上海市儿童医院血液科确诊的初发ALL患儿403例为研究对象,完善骨髓涂片细胞学、免疫分型、染色体核型分析、荧光原位杂交(FISH)等。结果 1.403例患儿中,男240例(59.6%),女163例(40.4%);年龄(5.31±3.46)岁;急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)374例(92.8%),急性T淋巴细胞白血病(T-ALL) 29例(7.2%)。2.细胞遗传学:染色体核型分析有分裂相者311例(77.2%),异常者126例,异常检出率40.5%,其中高超二倍体和超二倍体占15.4%(48/311例)。3.融合基因:融合基因阳性者110例(27.3%),其中TEL/AML1 70例(17.4%)、BCR/ABL 13例(3.2%)、MLL 19例(4.7%),2015年至2018年检出PBX1/TCF3 8例(4.0%),EBF1-PDGFRB 1例(0.5%),SIL/TAL1 6例,占T-ALL的33.3%(6/18例),提高了T-ALL分子异常检出率;BCR/ABL阳性患儿年龄大于MLL、TEL/AML1阳性患儿[(8.01±3.11)岁比(3.89±1.84)岁、(1.56±1.25)岁,P<0.001];PBX1/TCF3阳性患儿年龄[(6.58±4.83)岁]大于TEL/AML1、MLL阳性患儿(均P<0.05);MLL阳性患儿年龄小于TEL/AML1阳性患儿[(1.56±1.25)岁比(3.89±1.84)岁,P=0.001];MLL阳性患儿初发时的白细胞数高于TEL/AML1、BCR/ABL阳性患儿[(76.97±19.87)×109/L比(16.94±2.28)×109/L、(20.53±6.49)×109/L,P<0.05];PBX1/TCF3阳性患儿初发时的白细胞数高于TEL/AML1阳性患儿[(85.75±30.32)×109/L比(16.94±2.28)×109/L,P=0.002];MLL阳性患儿免疫分型以早前B-ALL为主(14/19例),TEL/AML1阳性、BCR/ABL阳性患儿均以普通B-ALL为主(57/70例、11/15例)。4.染色体核型分析、FISH、PCR3种方法对初发ALL患儿分子遗传学异常检出率分别为40.5%(126/403例)、69.2%(279/403例)、29.7%(60/202例),差异有统计学意义(P<0.001);染色体核型分析与PCR异常检测率差异无统计学意义(P=0.71)。5.不同性别及年龄组分子细胞遗传学异常检出率差异均无统计学意义(P=0.651、0.721),而初发时的白细胞数≥50×109/L组与<50×109/L组异常检出率比较差异有统计学意义(37/51例比107/352例,P<0.001),B-ALL遗传学异常检出率高于T-ALL(275/374例比14/29例,P=0.005)。结论儿童ALL染色体核型以超二倍体比例较高;融合基因分布与年龄、初发白细胞数和免疫分型有关;3种检测方法互相补充大大提高了遗传学异常检出率;T-ALL遗传学异常检出率低,可能需要新的检测方法。

重症监护室中以胸腹水首发的儿童非霍奇金淋巴瘤流式诊断及临床特点分析

目的评估流式细胞术行胸腹水免疫分型在儿童非霍奇金淋巴瘤（non-hodgkin’slym-phoma，NHL）诊断中的应用特点。方法2011年2月_2013年11月上海市儿童医院重症监护室（ICU）中12例诊断NHL患儿，男11例，女1例，年龄1～13岁，对病程中首发出现胸水或腹水的患儿，均应用流式进行免疫分型分析。免疫分型抗体包括CD45、CD10、CD33、CD7、CD1a、MPO、cCD3、CD79a、CD22、CD19、CD20、CD5、CD3、κ、λ、αβ、γδ和CD56等常见的T、B和NK标记，必要时加做CD30标记。结果12例伴有胸腹水的患儿最终均确诊为NHL，其病情危重，进展迅速。流式细胞术免疫分型诊断为NHL-B系6例，其中5例为腹水，1例为胸水，B系中CD20都出现高表达；诊断为NHL-T系4例，胸水3例，胸腹水混合1例，T系中αβ或γδ出现单克隆表达；另2例出现CD30的表达，确诊为间变大细胞淋巴瘤，2例均为胸水，其细胞形态学具有异质性。结论胸腹水流式细胞术免疫分型在儿童淋巴瘤辅助诊断中具有早期、快速和准确的特点，为早期化疗及抢救争取了时间，并为化疗中联合应用美罗华等靶向药物提供依据。

43种融合基因筛选在儿童血液系统肿瘤诊断中的意义

目的通过对43种融合基因在儿童白血病中的结果分析，结合形态、免疫分型和细胞遗传学，评估其对白血病诊断及预后判断的意义。方法2015年5月—2017年4月上海市儿童医院176例初发或复发白血病肿瘤患儿，男99例，女77例，年龄4个月～15岁，应用实时荧光探针PCR法进行融合基因检测，融合基因包括ALL和AML常见的如BCR－ABL，AML1－ETO，CBFβ－MYH11，MLL和RaRa相关等43种融合基因。结果176例患儿中最后诊断为ALL－B 110例、ALL－T 11例、AML 46例，其他9例，包括神经母细胞瘤1例、NHL－B 2例、NHL－T 1例、CML转AML1例，MDS 2例，CML 1例，贫血1例。43种融合基因筛选总阳性率为28.4%（50/176），包括：ALL－B （27/110，阳性率24.5%）：TEL－AML1 14例，E2A－PBX1 6例，MLL－A F10 2例，MLL－AF4 2例，MLL－ENL 1例，MLL－AF9 1例，BCR/ABL 1例；ALL－T （3/11，阳性率27.3%）：MLL－ENL 1例，SIL－TAL1 2例；AML（17/46，阳性率37%）：AML－ETO 7例，MLL－AF10 1例，MLL－AF9 1例，PML－RaRa 4例，DCK－CAN 3例，CBFB－MYH11 1例；其他中包括BCR－ABL 2例，E2A－PBX1 1例共3例。结论43种融合基因检测有效补充了白血病的诊断、有助于鉴别诊断，与危险分层和预后评估密切相关。

舒适护理在行气管切开机械通气清醒患者中的应用

近年来，我科对行气管切开机械通气的清醒患者开展了舒适护理服务，本文探讨舒适护理在行气管切开机械通气的清醒患者的临床应用意义。

多发畸形患儿t（3;12;15）复杂易位核型分析一例

染色体畸变是导致自然流产、死胎和畸形儿的重要病因之一[1].细胞遗传学检查发现,最常见的染色体结构变异包括缺失（deletion）、重复（duplication）、倒位（inversion）和易位（translocation）.本研究报道1例多发畸形患儿复杂易位核型分析.