耳垂逆转位在低位耳垂型小耳畸形外耳再造中的应用

目的探讨耳垂逆行转位法在低位耳垂型小耳畸形外耳再造中的应用。方法 2014年1月至2015年12月,对20例残耳位置较健侧明显低下的单侧小耳畸形患者,以扩张器法进行外耳再造,一期于残耳后乳突区植入50 m L肾形扩张器,术后1周拆线,并以每周3次的频率进行注水扩张,注水期约1个月。注水完成约1个月后,行二期耳再造术。于二期术中将残耳下缘切开,以残耳上部为蒂,逆行旋转,形成再造耳耳垂,切取残耳的创面直接缝合。结果 20例耳再造术后,再造耳耳垂血运良好。术后随访6~24个月,再造耳外形自然饱满,耳垂位置与健侧基本对称。结论对于一些严重半侧颜面短小症的患者,残耳位置较健侧明显低下,耳垂逆行转位法可有效矫正再造耳垂位置,使再造耳与健侧耳位置基本对称,形成良好的耳垂形态。

CD61阳性人脂肪来源细胞体外软骨分化潜能的初步研究

目的利用流式细胞仪分选人脂肪来源细胞(adipose derived cells,ADCs)软骨潜能亚群并初步检测其体外成软骨能力。方法采用酶消化法分离ADCs,以CD61为表面标志,通过流式细胞仪分选纯化,所得CD61+和CD61-两群细胞进行体外成软骨诱导,3周后进行软骨特异性细胞外基质二型胶原免疫荧光染色和软骨特异性基因SOX9和COL II定量PCR检测。结果采用CD61作为分选标志可通过流式细胞仪分选纯化获得两群细胞亚群。免疫荧光染色结果显示两群细胞经软骨诱导后均表达二型胶原。定量PCR结果表明CD61+组SOX9和COL II表达高于CD61-组(p<0.05)。结论 CD61+ADCs具有较强体外软骨分化能力,CD61有望成为ADCs软骨潜能亚群体外分选标志。

CD204阴性人脂肪来源细胞体外成软骨潜能的初步研究

目的比较CD204+和CD204-两种人脂肪来源细胞的干细胞特性和体外诱导成软骨的能力。方法分离培养人脂肪来源细胞并进行流式细胞分选,分别获得CD204+和CD204-两种细胞。将这两种细胞培养扩增至第2代,观察其形态学特点;成脂、成骨定向诱导分化,油红O染色、茜素红染色定性;同时将两种细胞进行pellet成软骨诱导分化,比较体外诱导成软骨的能力,并以HE、Safranin O和Ⅱ型胶原免疫组化染色等进行鉴定。结果经流式细胞分选,脂肪来源细胞中CD204表达阳性率约为10%。分选后的CD204+和CD204-细胞均呈成纤维细胞样贴壁生长,但CD204-细胞具有更强的增殖能力。成脂诱导10 d后,两组细胞油红O染色均可见胞浆内有大量红染脂滴,但CD204+细胞具有更强的成脂潜能。成骨诱导2周后,两组细胞茜素红染色均可见钙结节红染,而CD204-细胞具有更强的成骨潜能。同时,细胞pellet成软骨诱导4周后,大体观可见CD204-细胞组pellet形成白色透明样软骨成分,而CD204+细胞组pellet外观微黄。HE和Ⅱ型胶原免疫组化染色均显示CD204-组pellet可见成熟软骨陷窝形成,Safranin O染色显示CD204-组软骨特异性细胞外基质沉积;而CD204+细胞组pellet则呈纤维化改变。结论脂肪组织来源的CD204-细胞具有干细胞的生物学特点,且有良好的成软骨潜能,可以成为软骨组织工程良好的种子细胞来源。

流式细胞仪分选纯化人脂肪干细胞体外成骨活性的实验研究

目的利用流式细胞仪分选人脂肪干细胞(Human adipose-derived stem cells,hADSCs)并检测其体外成骨活性。方法分离hADSCs,通过流式细胞仪以CD105作为表面标志进行分选,所得细胞成骨诱导培养,以CD105-细胞、未分选细胞作为对照。2周后进行碱性磷酸酶(AKP)和骨钙蛋白(OCN)定量PCR和Western-blot检测。结果流式细胞分选所得CD105+hADSCs细胞约占单核细胞的50%。定量PCR和Western-blot检测均显示分选hADSCs成骨诱导后,AKP和OCN的表达均显著高于CD105-细胞组及未分选细胞组(P<0.05)。结论诱导分选纯化后的hADSCs有较好的成骨活性,可作为骨组织工程的种子细胞。

肋软骨支架耳廓再造术后感染的治疗和预后分析

目的探讨肋软骨耳廓再造术后软骨支架感染的处理方法及预后。方法回顾性分析肋软骨支架耳廓再造术后软骨支架感染的12例病例，细菌培养结果：金黄色葡萄球菌5例，凝固酶阴性葡萄球菌3例，肺炎克雷伯杆菌2例，嗜水气单胞菌l例，普通培养无细菌生长1例。采用局部加强换药结合静脉滴注抗生素治疗，抗生素盐水冲洗、通畅引流，并结合临床具体情况治疗。结果12例患者换药时间12～67d，平均35d，其中6例感染控制愈合，软骨支架变形不明显或轻度变形；1例感染持续存在，软骨完全液化，软骨支架取出后清创换药控制感染，需半年后再行耳再造手术修复；5例感染早期取出软骨支架，彻底切除软化的软骨后埋人患者胸部皮下，耳后皮瓣及耳后筋膜瓣舒平，半年后取出支架，修整后再次植入。结论肋软骨耳廓再造术后感染早期可通过外科换药、冲洗和通畅引流控制感染，保留耳廓三维形态；对于渐进发展的严重感染病例，需尽早取出软骨支架，彻底清除易感染的软骨组织，待感染完全控制后再次植入。

脂肪干细胞在软骨组织工程中的应用

软骨是最早应用组织工程技术成功构建的组织之一，但由于缺乏合适的软骨构建种子细胞，因此其发展相对落后。随着干细胞研究的兴起，脂肪干细胞（ASC）因其具有分布广泛、可利用细胞量大、取材容易等优点，为ASC作为种子细胞应用于组织工程研究提供了可能；但是ASC构建软骨组织的效果却不如骨髓间充质干细胞（BMSC）理想。因此ASC在软骨组织工程中的应用仍面临着诸多问题与挑战，其中最核心的问题是如何提高ASC成软骨的效率。为此从如何纯化脂肪来源细胞、尽可能保持其中干细胞的生物学特性并优化软骨诱导方案3个方面予以综述，为提高ASC成软骨的效率提供参考。

一种大量快速分离脐带间充质干细胞的新方法

目的：探讨体外快速大量分离脐带间充质千细胞的新方法。方法：采用复合胶原NB4、dispasell、透明质酸酶三种酶消化3h，加入PBSA溶液稀释，离心获得脐带间充质干细胞，培养；用流式细胞仪对P3代细胞进行表面标记的鉴定，用化学诱导的方法使第3代细胞向脂肪、骨、软骨细胞分化，2～4周后，分别行oil red、Safranin’O和茜素红染色，倒置显微镜下观察诱导结果。结果：经3种酶消化和PBSA稀释，短时间内从脐带中获得了大量间充质干细胞；伴随着细胞的传代，形态逐渐均一，传至第3代，细胞的形态已基本相似；流式细胞仪鉴定，细胞强表达间充质细胞的特异性标记CD90，CD73，CD105，而不表达造血系或内皮系细胞的标记CD45、CD14、CD11、CD34、CD19，也不表达主要组织相容性抗原HLA—DR；向脂肪细胞诱导后第4周，oilred染色见细胞内大量红染的脂滴；向软骨细胞诱导后第4周，Safranin’O染色见多数切片呈阳性，细胞团块中存在大量软骨特异性的陷窝样结构；向骨细胞诱导后第4周，茜素红染色发现肉眼可见的广泛散在的红色阳性钙结节．结论：本研究所采用的3种酶消化结合PBSA稀释的方法可以快速获得脐带间充质干细胞：

重组hTGF-β1基因转染人脂肪干细胞对其向软骨分化的影响

目的研究重组hTGF-β1腺病毒(AdhTGF-β1)转染人脂肪干细胞(ADSCs)对其向软骨分化的作用。方法重组AdhTGF-β1转染人ADSCs,对照组转染AdLacZ,腺病毒的量以200pfu/细胞计算,体外细胞团聚集连续诱导培养21d,酶联免疫吸附定量检测(ELISA)hTGF-β1蛋白的表达,然后分别从大体观察、组织学和II型胶原蛋白免疫组化的检测对形成组织进行评价。结果 hTGF-β1蛋白量在14d时达最高峰,随后逐渐降低。连续细胞团聚集诱导培养21d,细胞团收缩成近似小球形的组织块,外观成乳白色。HE染色可见细胞团外周为由数层扁平状成纤维样细胞组成的纤维软骨膜,下部区域有巢状软骨样细胞组成,有些区域可见软骨样细胞包埋在软骨陷窝内。Safranin'O染色显示,形成的软骨组织区域有被染成桔红色蛋白多糖类基质分泌。而对照组苏木素-伊红染色观察见无软骨样组织形成或有向软骨分化现象。Ⅱ型胶原免疫组化染色检测显示实验组细胞团出现较明显的阳性染色区域,可见棕黄色的颗粒分布于胞浆内。对照组Ⅱ型胶原免疫组化染色检测显示无明显的阳性染色区。结论重组hTGF-β1腺病毒转染人ADSCs诱导人ADSCs向软骨细胞表型分化形成软骨样组织,为hTGF-β1基因转染的人ADSCs在软骨组织工程应用中奠定了基础。

HTGF-β1基因转染脂肪干细胞及其表达

目的探讨携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(adeno-hTGF-β1)转染人脂肪干细胞(ADSCs)及其表达的可行性。方法重组adeno-hTGF-β1经293细胞包装、扩增后,转染人ADSCs。转染72h后,RT-PCR检测重组腺病毒转染后ADSCs的hTGF-β1 mRNA表达,免疫细胞化学染色定性和酶联免疫吸附(ELASA)定量测定hTGF-β1蛋白的表达。结果转染后72h,ADSCs能有效表达hTGF-β1 mRNA,免疫细胞化学证实重组腺病毒转染后ADSCs胞浆内有大量棕黄色的hTGF-β1蛋白表达,ELISA结果提示其hTGF-βl表达量是转染Adeno-lacZ的3.85倍(<0.05)。结论重组腺病毒adeno-hTGF-β1能够被导入ADSCs并表达hTGF-β1蛋白,为hTGF-β1基因转染的ADSCs在软骨组织工程应用中奠定了基础。

上唇红唇缺损畸形修复手术方法的选择

目的探讨口轮匝肌/颊肌黏膜瓣在一期修复上唇红唇缺损畸形中的应用效果。方法根据红唇缺损部位及面积,在颊部设计蒂在口角内侧的颊肌黏膜瓣,或在下唇红唇设计蒂在口角内侧的红唇口轮匝肌黏膜瓣,深达肌肉浅层,通过局部旋转的方法一期修复上唇红唇缺损,供区直接缝合,重建红唇正常形态和功能。结果本组共16例患者,术后随访6~24个月。术后红唇形态饱满对称,口角无破坏,无开闭口功能障碍,供区瘢痕不明显。结论采用颊肌/红唇口轮匝肌黏膜瓣修复红唇缺损,血运可靠、操作简单、治疗周期短,可以根据患者具体特点选择适合的手术方式。

小耳畸形八大处法耳廓再造术——团队10年经验

目的 回顾近几年本团队采用八大处法进行小耳畸形耳廓再造的经验,总结八大处法耳廓再造的手术方法和手术要点.方法 通常情况下八大处法耳廓再造的方法分为三期.第一期:乳突区皮肤扩张器置入、皮肤扩张;第二期:耳廓再造:扩张器取出、耳垂转位、扩张皮瓣转移、颞筋膜软组织瓣形成、自体肋软骨采集、分根利用法耳支架制作、耳支架移植及创面封闭;第三期:耳屏形成、耳甲腔形成、再造耳形态调整.结果 从2006年1月1日到2015年12月31日我科应用八大处法治疗5267例先天性小耳畸形患者,再造耳廓5628只.随访时间1～10年.一期皮肤扩张手术术后并发症有血肿、感染、扩张器外露,经处理后不影响二期手术.二期5202只耳术后恢复良好(92.4％),具备耳廓的标志性结构;236只耳术后伤口有创面(4.2％),经换药后愈合,耳廓形态未受明显影响;108只小面积支架外露(1.9％),简单缝合伤口后愈合,再造耳外形轻度受损,三期手术时予以弥补;61(1.1％)只耳重度支架外露,采用轴形筋膜瓣修补,再造耳形态得以保全;21只耳支架感染(0.3％),再造耳形态大部丧失,进行了翻修手术.三期手术并发症罕见,主要为伤口延期愈合,经换药后痊愈.结论 八大处法耳廓再造在小耳畸形治疗中适应力强,针对小耳畸形合并的各种复杂畸形及颅面结构异常便于调整手术技巧;本组病例92.4％顺利获得标志性的耳廓结构;皮肤扩张手术及扩张过程需要花费2个月时间,期间医护人员和患者/监护人必须耐心细致的观察、治疗,以确保皮肤的顺利扩张.

小耳畸形的序列化治疗体系

小耳畸形的治疗现状是,针对耳廓大部分或者完全缺失的Ⅲ、Ⅳ型小耳畸形患者,治疗方法相对统一——自体肋软骨移植耳廓再造术,且随着技术进步,效果逐渐提升;而针对残耳较大的Ⅰ、Ⅱ型,选择什么方法进行治疗尚缺乏依据;佩戴矫治器的非手术疗法在小耳畸形治疗中有望发挥辅助作用,值得进一步研究。该文基于作者团队的临床实践并结合文献资料,提出了小耳畸形序列化的治疗体系,以期对该病的治疗有所助益。

脂肪干细胞免疫调节效应的应用研究进展

脂肪干细胞(ASC)具有良好的免疫调节作用,在血管化同种异体复合组织移植、自体脂肪移植、创面愈合等修复重建领域中有潜在免疫调节应用价值。该文通过回顾相关文献,讨论了ASC的静脉注射、腹腔注射、局部注射以及外泌体注射等不同给药方式的特点及应用条件,为ASC免疫调节进一步应用提供参考。

赖氨酰氧化酶家族调节软骨细胞外基质代谢和转归的研究进展

软骨再生和软骨组织工程技术为软骨组织再造和软骨缺损修复提供了新策略。构建与天然组织生物力学性能相近的工程组织,使其在组织工程支架降解后提供合适的机械强度,并维持构建软骨组织在体内的长期稳定性,是组织工程技术发展的瓶颈之一。软骨细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的交联在维持软骨组织结构完整性和生物力学强度方面发挥重要作用。赖氨酰氧化酶家族(lysyl oxidases,LOXs)是ECM交联和重塑过程中的关键因子,有望成为调节软骨ECM力学强度和结构完整的重要因素。现就LOXs在软骨ECM代谢和转归中的研究进展作一综述。