疥螨Sar s 14.3过敏原蛋白原核表达及间接ELISA方法的建立

目的预测疥螨猪变种转录组中过敏原蛋白,对Sar s 14.3过敏原蛋白进行生物特性分析、原核表达并建立间接ELISA诊断方法。方法利用转录组测序(RNA-Seq)及BLAST、ProtParam、I-TASSER和COMPARE等软件和数据库对疥螨猪变种转录组中的过敏原组分进行预测并对疥螨Sar s 14.3过敏原蛋白序列进行理化性质分析、结构分析、同源性分析和间接ELISA诊断方法的建立。结果在疥螨猪变种的18980个转录本中共预测出390条过敏原序列,且随机匹配可能性值(E-value)为0的序列有28条。Sar s 14.3过敏原蛋白的理论相对分子质量为38 kDa,蛋白较稳定,为亲水性蛋白;二级结构以无规卷曲和β-折叠为主,其氨基酸序列与疥螨其他变种主要过敏原组分14蛋白序列相似性不低于99.76%,而与尘螨属螨虫的相似性最高为73.08%,与现行的形态学分类系统一致。所建立的间接ELISA诊断方法的最佳包被抗原浓度为2μg/mL,血清最佳稀释倍数是1∶400。结论本试验成功预测了疥螨猪变种转录组中的过敏原序列并克隆、表达了疥螨猪变种Sar s 14.3蛋白,初步预测了其分子特征,并以该过敏原蛋白为基础成功建立了一种快速的间接ELISA检测方法,可用于疥螨病的初步诊断和流行病学调查。

多房棘球蚴欧洲株与中国宁夏株在蒙古沙鼠肝组织内发育及病理损伤的比较

为观察多房棘球蚴不同地理株在蒙古沙鼠肝组织的发育状况及其对肝组织损伤情况的差异,本试验将欧洲株和中国宁夏株多房棘球蚴分别腹腔注射蒙古沙鼠,饲养并观察2个月,直至腹部出现明显肿大,然后对试验组和空白对照组蒙古沙鼠进行安乐死,剖检分离肝脏然后进行肝组织切片染色观察,并将不同地理株试验组和空白对照组进行比对分析。结果显示:2株不同地理株多房棘球蚴均能造成肝组织窦间隙增宽、新生血管增多并表现出不同程度的肝细胞损伤,但欧洲株多房棘球蚴肝组织窦间隙增宽较宁夏株明显,而宁夏株肝组织新生血管较欧洲株多;中国宁夏株棘球蚴生发层中有大量的原头蚴,欧洲株未见清晰的原头蚴。结果表明腹腔注射多房棘球蚴后,蒙古沙鼠肝组织受到破坏,不同地理株棘球蚴在感染后一定时期内对肝组织损害程度有差异,且中国宁夏株和欧洲株在蒙古沙鼠肝脏内的发育速度和原头蚴增殖能力有所不同。

基于线粒体ND1基因和核糖体ITS2基因对猪疥螨的分子鉴定

本研究为了探究广东省疥螨猪变种(Sarcoptes.scabiei var.suis)的基因型及与其他疥螨变种的进化关系,通过提取疥螨基因组DNA,利用PCR扩增、Sanger测序获取线粒体的ND1基因和核糖体DNA的ITS2基因,对两个目标基因核苷酸应用生物信息学分析工具BLAST和MEGA-X进行同源性分析并构建系统进化树。结果表明,所扩增广东猪疥螨的线粒体ND1基因序列大小为211 bp,1TS2 r DNA基因片段大小均为417 bp。在nt数据库疥螨亚目的所有序列中,本试验扩增的广东猪疥螨ND1基因序列与疥螨属ND1基因相似性最高(Identity>99%,E-value<6.20E-106),其次是户尘螨(Identity=80%,E-value=1.37E-44)、兔痒螨Psoroptes cuniculi(Identity=74%,E-value=9.84E-34)和粉尘螨Dermatophagoides farina(Identity=74%,E-value=4.18E-32)。本试验扩增的ITS2+序列与疥螨属ITS2基因序列相似性高(Identity为97.3%~99.3%,E-value=0),其次为背肛螨属(Identity为95.50%~97.80%,E-value为7.16E-35~4.83E-37)。通过序列比对与进化分析发现,在疥螨属内核糖体ITS2基因变异较小,线粒体ND1基因在疥螨属内有一定程度的变异。广东所采疥螨猪变种的ND1基因和ITS2基因与其他动物或人体内采集的疥螨相似程度高,疥螨ITS2基因在不同地域、不同宿主条件下的变异程度很小,在进行疥螨属内的遗传变异分析时不宜做目标分子,而通过对疥螨线粒体ND1基因分析发现其在疥螨属内存在一定的变异,可以作为疥螨属内遗传变异分析的候选分子。本研究可为今后疥螨的分类、鉴定及遗传变异分析提供一定依据。