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一氧化氮合酶在自发性高血压大鼠脊髓中间带灰质的分布 被引量:2
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作者 孙成三 于恩华 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期34-37,T008,共5页
目的 探讨自发性高血压大鼠脊髓中间带灰质内一氧化氮合酶阳性细胞和纤维的分布及其与自发性高血压的关系。 方法 采用 NADPH- d组织化学方法 ,并以计算机图像分析系统对脊髓胸腰部中间外侧核本部区 NADPH- d染色强度 (A值 )进行半... 目的 探讨自发性高血压大鼠脊髓中间带灰质内一氧化氮合酶阳性细胞和纤维的分布及其与自发性高血压的关系。 方法 采用 NADPH- d组织化学方法 ,并以计算机图像分析系统对脊髓胸腰部中间外侧核本部区 NADPH- d染色强度 (A值 )进行半定量分析。 结果  1.在脊髓中间带灰质区 ,一氧化氮合酶阳性神经细胞和纤维主要见于胸腰部中间外侧核本部区和中央管周围 ,在中介核区也有少量分布。胸腰部中间外侧核本部区染色阳性细胞成群分布 ,细胞群的大小、间距随节段而稍有不同。一氧化氮合酶阳性细胞分布模式在自发性高血压大鼠和正常鼠两组之间未发现明显差异。 2 .在脊髓 T2 、T5 、T8、T1 1 、L1 各节段中间外侧核本部区 ,一氧化氮合酶阳性物质的 A值 ,自发性高血压大鼠比正常鼠低。统计结果显示 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 )。 结论 脊髓中间带灰质的交感神经节前神经细胞可能通过一氧化氮表达参与调控血压升高和维持。 展开更多
关键词 一氧化氮合酶 脊髓中间带灰质 组织化学 自发性高血压 大鼠
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人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)cDNA的克隆 被引量:1
2
作者 于凤山 段德义 +2 位作者 孙成三 秦丽华 徐群渊 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期131-134,共4页
为了研究人碱性成纤维细胞生长因子在治疗神经系统疾病中的作用 ,克隆其 c DN A序列 ,并添加 K ozak序列 ,以用于真核细胞表达。本实验提取我国自建的脑胶质瘤细胞系 BT32 5总 RN A,设计上、下游引物用逆转录 PCR法扩增 c DNA片段 ,然... 为了研究人碱性成纤维细胞生长因子在治疗神经系统疾病中的作用 ,克隆其 c DN A序列 ,并添加 K ozak序列 ,以用于真核细胞表达。本实验提取我国自建的脑胶质瘤细胞系 BT32 5总 RN A,设计上、下游引物用逆转录 PCR法扩增 c DNA片段 ,然后重组于 p GEM- 3zf( + )载体 ,酶切鉴定插入片段正确后测序。结果 :RT- PCR扩增到 4 73bp的带有 K ozak序列的 c DN A片段。显示 :克隆到碱性成纤维细胞生长因子 c DN A片段 。 展开更多
关键词 bGFG RT-PCR 序列分析 神经系统疾病 基因克隆
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大鼠Fas配体基因的克隆
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作者 孙成三 段德义 +2 位作者 于凤山 于恩华 徐群渊 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期177-179,共3页
目的 研究 Fas配体 (Fas ligand,Fas L )在移植免疫方面的作用 ,克隆其编码的全部 c DNA序列 ,并添加 Kozak序列 ,以便在真核细胞高效表达大鼠 Fas L。 方法 从大鼠的睾丸组织中提取总 RNA,设计上、下游引物以 RT- PCR的方法扩增出一... 目的 研究 Fas配体 (Fas ligand,Fas L )在移植免疫方面的作用 ,克隆其编码的全部 c DNA序列 ,并添加 Kozak序列 ,以便在真核细胞高效表达大鼠 Fas L。 方法 从大鼠的睾丸组织中提取总 RNA,设计上、下游引物以 RT- PCR的方法扩增出一 931bp的 DNA片段 ,将这一片段重组于 p BK - RSV载体中 ,酶切鉴定插入片段正确后进行全序列分析。 结果 证实该研究所克隆的 c DNA是编码正确的大鼠 Fas L基因 ,与发表于 Gene Bank上的序列相比 ,完全正确。已构建成用于真核表达的重组质粒 p BK- RSV/r Fas L。 结论 克隆到了编码正确的大鼠Fas L的 c DNA全序列 ,对移植免疫和帕金森病基因治疗的基础研究及临床应用具有重要意义。 展开更多
关键词 基因克隆 DNA FAS配体 大鼠 震颤性麻痹
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带6个组氨酸尾的可溶性GDNF第1受体的重组表达和活性分析
4
作者 陈立南 孙成三 +4 位作者 陈晴 段德义 杨慧 张进禄 徐群渊 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期157-160,共4页
目的 用DNA重组方法去除胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)受体 (GFRα 1)基因 3’ 端的与细胞膜糖基化磷脂酰肌醇 (GPI)相连的信号序列 ,使表达的GFRα 1以可溶性形式介导GDNF的作用。 方法 设计一对引物 ,其中下游引物含有 6个组氨... 目的 用DNA重组方法去除胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)受体 (GFRα 1)基因 3’ 端的与细胞膜糖基化磷脂酰肌醇 (GPI)相连的信号序列 ,使表达的GFRα 1以可溶性形式介导GDNF的作用。 方法 设计一对引物 ,其中下游引物含有 6个组氨酸密码子序列 ,以人GFRα 1全长cDNA为模板 ,PCR扩增编码可溶性GFRα 1序列并亚克隆于pBK RSV真核表达载体 ,转染COS 7细胞 ,收获培养上清 ,进行SDS PAGE及Western免疫印迹分析 ;使用钴离子金属螯合层析柱进行纯化 ;检测RET酪氨酸磷酸化以鉴定其生物学活性。 结果 Western免疫印迹证实培养上清液中有分子量为 6 0kD的特异阳性条带 ,与糖基化的GFRα 1分子量相符 ;金属螯合层析得到纯度达90 %以上的重组GFRα 1蛋白 ,每mlCOS 7培养上清中含有 0 5 μg。 结论 带 6个组氨酸尾的重组可溶性GFRα 1能够介导GDNF的作用 。 展开更多
关键词 蛋白纯化 真核表达 受体 表位标记 胶质细胞源性神经营养因子 受体酪氨酸激酶 重组表达
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GDNF在人脑胶质瘤细胞中表达的检测及其cDNA的克隆
5
作者 段德义 孙成三 +3 位作者 杨有文 于凤山 张进禄 徐群渊 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期6-10,共5页
为研究人脑胶质细胞源性神经营养因子在脑胶质瘤中的表达及其在治疗神经系统疾病中的作用 ,本研究克隆了其前体蛋白及其成熟多肽的 c DNA序列 ,将之用于真核及原核细胞表达。提取我国自建的脑胶质瘤细胞系 BT32 5总 RNA,设计两对引物用... 为研究人脑胶质细胞源性神经营养因子在脑胶质瘤中的表达及其在治疗神经系统疾病中的作用 ,本研究克隆了其前体蛋白及其成熟多肽的 c DNA序列 ,将之用于真核及原核细胞表达。提取我国自建的脑胶质瘤细胞系 BT32 5总 RNA,设计两对引物用逆转录 PCR法扩增上述两种长度的 c DNA片段 ,然后重组于 p GEM-T载体 ,酶切鉴定插入片段正确后测序。结果表明 ,脑胶质瘤细胞中只扩增出 5 5 8bp的胶质细胞源性神经营养因子全长 c DNA片段 ,未见 6 36 bp片段 ;且扩增效率较成熟多肽 c DNA甚低。提示 ,该细胞合成的胶质细胞源性神经营养因子可能还存在不含有信号肽而只能在细胞内潴留的成熟多肽形式。作为自泌性生长因子 ,它可能调节瘤细胞生长等生物学行为 ;同时克隆到的胶质细胞源性神经营养因子全长及其成熟多肽的 c DNA片段 。 展开更多
关键词 胶质细胞源性神经营养因子 基因克隆 RT-PCR DNA序列分析 胶质瘤细胞
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P物质在自发性高血压大鼠脊髓中间带灰质的分布
6
作者 孙成三 于恩华 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期377-380,共4页
为探讨自发性高血压的发病机理,本实验用免疫细胞化学方法结合体视学分析,研究了自发性高血压大鼠脊髓中间带灰质内P物质免疫反应阳性纤维和终末的分布。结果如下:(1)P物质免疫反应产物在自发性高血压大鼠和京都种正常血压大鼠... 为探讨自发性高血压的发病机理,本实验用免疫细胞化学方法结合体视学分析,研究了自发性高血压大鼠脊髓中间带灰质内P物质免疫反应阳性纤维和终末的分布。结果如下:(1)P物质免疫反应产物在自发性高血压大鼠和京都种正常血压大鼠脊髓中间带灰质分布的模式未见明显差异;(2)在脊髓T2、T5、T8、T11、L1 各节段的中间外侧核本部区的平均光密度值,自发性高血压大鼠高于京都种正常血压大鼠(P< 0.05)。这一结果提示,在自发性高血压大鼠,脊髓胸腰部中间外侧核本部区P物质免疫反应阳性产物表达增加。而该区P物质表达的增加意味着该区交感节前神经元机能状态的某种改变,这种改变可能与自发性高血压大鼠血压的升高和维持有关。 展开更多
关键词 P物质 高血压 脊髓中间带灰质 大鼠 自发性
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一氧化氮与高血压的关系
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作者 孙成三 于恩华 《滨州医学院学报》 2000年第3期305-305,共1页
关键词 一氧化氮 高血压 生理作用 病理
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携带酪氨酸羟化酶基因的质粒和逆转录病毒在大鼠成纤维细胞和脑胶质细胞中表达效率的比较 被引量:1
8
作者 陈晴 段德义 +3 位作者 杨慧 孙成三 陈立南 徐群渊 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期76-80,共5页
目的 为提高体外转基因 (exvivo)治疗帕金森病大鼠模型的疗效 ,本实验拟比较两种基因表达载体介导的外源基因在两种不同运载细胞的瞬时表达效率。 方法 分别将酪氨酸羟化酶 (TH)基因的重组表达质粒和重组逆转录病毒导入原代培养的大... 目的 为提高体外转基因 (exvivo)治疗帕金森病大鼠模型的疗效 ,本实验拟比较两种基因表达载体介导的外源基因在两种不同运载细胞的瞬时表达效率。 方法 分别将酪氨酸羟化酶 (TH)基因的重组表达质粒和重组逆转录病毒导入原代培养的大鼠成纤维细胞和脑胶质细胞 ,用免疫组织化学检测TH的表达效率 ;Westernblot法检测样品中TH特异性条带并转换成A值 ,以比较其在不同细胞中表达的相对含量。 结果 免疫组织化学检测表明 ,表达质粒的转染率为 5 %~ 7% ,逆转率病毒的感染率为 18%~ 2 0 % ;根据GDNF标准品蛋白条带含量与Westernblot结果的相应A值的标准曲线 ,推断出质粒转染和逆转率病毒感染的成纤维细胞中单个阳性细胞表达的TH相对平均含量分别为 4 76× 10 - 2 A和 4 35× 10 - 2 A ,质粒转染和逆转率病毒感染的脑胶质细胞分别是 5 4 5×10 - 2 A和 5 0 5× 10 - 2 A。 结论 不论是质粒载体还是逆转录病毒载体所携带的外源基因在两种细胞的单个阳性细胞中的表达无显著性差异。但由于逆转录病毒载体的感染率高于质粒载体 ,对于原代培养的成纤维细胞和脑胶质细胞 ,逆转率病毒载体是一种更好的表达载体。 展开更多
关键词 帕金森病 酪氨酸羟化酶 质粒载体 逆转录病毒载体 成纤维细胞 脑胶质细胞
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一氧化氮合酶阳性神经元在大鼠脊髓中间带的分布 被引量:1
9
作者 孙成三 季勇 +1 位作者 高华善 于恩华 《滨州医学院学报》 2000年第6期521-522,共2页
目的 :观察一氧化氮合酶阳性神经元在正常大鼠脊髓中间带的分布。方法 :用正常成年 Wistar大鼠脊髓 ,采用冰冻切片 ,以尼可酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸脱氢酶 (NADPH- d)免疫组织化学方法 ,观察一氧化氮合酶阳性神经元在脊髓中间带的分布。... 目的 :观察一氧化氮合酶阳性神经元在正常大鼠脊髓中间带的分布。方法 :用正常成年 Wistar大鼠脊髓 ,采用冰冻切片 ,以尼可酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸脱氢酶 (NADPH- d)免疫组织化学方法 ,观察一氧化氮合酶阳性神经元在脊髓中间带的分布。结果 :在正常 Wistar大鼠中 ,一氧化氮合酶阳性神经元主要分布在脊髓的中间外侧核本部区、中介核和中央管周围。结论 :了解一氧化氮合酶阳性神经元在中间带的分布 ,可能对进一步了解自发性高血压等病理情况下的变化有参考价值。 展开更多
关键词 一氧化氮合酶 脊髓 分布 神经元
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一氧化氮合酶在大鼠室旁核各亚核的分布 被引量:1
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作者 高华善 孙成三 +1 位作者 刘忠华 许鹿希 《滨州医学院学报》 1997年第6期532-533,共2页
用NADPH-d组织化学方法观察一氧化氮合酶阳性神经元在正常Wistar大鼠下丘脑室旁核各亚核的分布。结果显示,在正常Wistar大鼠中,一氧化氮合酶阳性神经元主要分布在室旁核内侧亚核。
关键词 一氧化氮合酶 大鼠 室旁核 解剖学
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室旁核内外侧亚核神经元细胞构筑的比较
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作者 高华善 刘忠华 +2 位作者 孙成三 韩玉贞 马云 《滨州医学院学报》 1998年第1期7-8,共2页
目的:为下丘脑室旁核内侧亚核和外侧亚核神经元是否存在形态上的差异提供解剖学依据。方法:用计算机图像分析系统,检测两亚核神经元的一些形态学指标。结果:外侧亚核神经元明显大于内侧亚核(P>0.05)。结论:下丘脑室旁核内... 目的:为下丘脑室旁核内侧亚核和外侧亚核神经元是否存在形态上的差异提供解剖学依据。方法:用计算机图像分析系统,检测两亚核神经元的一些形态学指标。结果:外侧亚核神经元明显大于内侧亚核(P>0.05)。结论:下丘脑室旁核内、外侧亚核神经元不但功能不同,而且形态也不同。 展开更多
关键词 内侧亚核 外侧亚核 形态检测
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