吡喹酮通过5-HT2B受体对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨吡喹酮(praziquantel,PZQ)对肝癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养Hep3B人肝癌细胞株和Hepa1-6小鼠肝癌细胞株,分为正常对照组、PZQ处理组、5-羟色胺2B(5-HT2B)受体抑制剂组(RS127445组)、5-HT2B受体抑制剂+PZQ处理组(RS127445+PZQ处理组)。采用实时荧光定量PCR(qRTPCR)检测Hep3B人肝癌细胞株和Hepa1-6小鼠肝癌细胞株中5-HT2B受体mRNA相对表达水平,CCK-8法检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,western blot法检测Bax、Bcl-2凋亡相关蛋白表达量。结果Hep3B人肝癌细胞株和Hepa1-6小鼠肝癌细胞株5-HT2B受体mRNA相对表达水平正常对照组为1.02±0.09和1.01±0.20,PZQ处理组为1.36±0.16和1.66±0.16,经PZQ处理后5-HT_(2B)受体mRNA相对表达水平均增加(t=3.22、5.07,P均<0.05)。PZQ处理组两种细胞株48 h细胞增殖率为(74.00±4.58)%和(77.00±5.29)%,低于正常对照组(t=9.88、7.47,P均<0.01);72 h细胞增殖率为(71.00±6.08)%和(67.33±7.57)%,低于正常对照组(t=7.87、6.00,P均<0.05)和RS127445+PZQ处理组(t=5.48、3.48,P均<0.05)。PZQ处理组两种细胞株48 h细胞迁移率为(52.91±3.15)%和(17.28±1.78)%,低于正常对照组(t=7.86、13.46,P均<0.01);72 h细胞迁移率为(58.79±3.25)%和(22.29±5.87)%,低于正常对照组(t=11.65、9.57,P均<0.05)和RS127445+PZQ处理组(t=3.13、6.97,P均<0.05)。PZQ处理组两种细胞株72 h细胞凋亡率为(16.13±0.66)%和(20.70±2.85)%,高于正常对照组和RS127445+PZQ处理组(t=27.82、5.65、9.54、4.10,P均<0.01);Bax相对蛋白表达水平分别为1.70±0.18和2.23±0.14,高于正常对照组(t=2.83、7.89,P均<0.05)和RS127445+PZQ处理组(t=9.40、5.25,P均<0.05);Bcl-2相对蛋白表达水平分别为0.52±0.17和0.53±0.02,低于正常对照组(t=3.57、8.39,P均<0.05)和RS127445+PZQ处理组(t=12.09、6.12,P均<0.05)。结论PZQ可通过5-HT2B受体对肝癌细胞的增殖、迁移和凋亡造成影响。

吡喹酮对脂多糖诱导脓毒症小鼠急性肝损伤的保护作用

目的 探讨吡喹酮(praziquantel, PZQ)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导脓毒症小鼠急性肝损伤的保护作用。方法 将56只6-8周龄C57BL/6雄鼠每组14只随机分成4组:正常对照组,PZQ对照组,LPS模型组(LPS组)和PZQ治疗组。以LPS(10 mg/kg)构建小鼠脓毒症模型,PZQ(300 mg/kg)灌胃治疗24 h。每组分别取8只小鼠,每12 h观察生存情况,直至PZQ治疗组小鼠全部死亡,绘制生存曲线;各组另取6只小鼠检测血清中谷草转氨酶(glutamicoxaloacetictransaminase, AST)和谷丙转氨酶(glutamic pyruvic transaminase, ALT)水平;qRT-PCR检测肝脏TNF-α、IL-1β、IL-6、NLRP3 mRNA相对表达水平。体外培养RAW264.7巨噬细胞,以1μg/ml浓度的LPS刺激RAW264.7巨噬细胞4 h后用30μg/ml PZQ处理24 h, qRT-PCR检测各组TNF-α、IL-1β、IL-6、NLRP3 mRNA相对表达水平;流式细胞术检测各组Ly-6C~(hi)亚群及Ly-6C~(lo)亚群巨噬细胞数量变化。结果 各组小鼠生存曲线显示,PZQ治疗组生存率高于LPS造模组。血清AST、ALT检测结果显示,PZQ灌胃治疗组ALT、AST水平均明显低于LPS模型组(P<0.05)。小鼠肝脏与体外RAW264.7巨噬细胞系中qRT-PCR检测结果显示,PZQ灌胃治疗组均低于LPS模型组(P<0.05),PZQ处理组均低于LPS刺激组(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,PZQ处理组Ly-6C^(hi)亚群巨噬细胞的百分率低于LPS刺激组(P<0.05);Ly-6C^(lo)亚群巨噬细胞的百分率高于LPS刺激组(P<0.05)。结论 PZQ通过促进Ly-6C^(hi)亚群巨噬细胞向Ly-6C^(lo)亚群巨噬细胞转化,减少促炎因子的表达,缓解脓毒症小鼠肝脏炎症反应,进而提高脓毒症小鼠生存率。