PRRSV CH-1R疫苗株N蛋白的克隆及原核表达

为了区分猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原是来自疫苗株还是野毒株,试验采用RTPCR和PCR方法从PRRSV CH-1R株中扩增出ORF7基因,通过T4连接酶将ORF7基因与p ET-28a(+)载体连接,导入E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,并以20%IPTG进行诱导表达。结果表明:重组菌可表达分子质量为16.0 ku的融合蛋白,且20%IPTG诱导3 h的表达效果最好;表达产物纯化后可得到纯度较高的目的蛋白,经Western-bolt分析可确认该蛋白为PRRSV CH-1R株N蛋白。说明在原核表达系统中可表达出PRRSV CH-1R株N蛋白,并且能够使其携带上多聚组氨酸(6×His-tag)标签,形成N-His融合蛋白,使该蛋白与其他PRRSV经典株的N蛋白形成差异化。