KP对早期胎盘滋养层细胞迁移及细胞内ERK、MMP-9、VEGF表达的影响

目的探讨黑色素转移抑制基因(KP)对早期胎盘滋养层细胞迁移及细胞内细胞外调节蛋白激酶(ERK)、MMP-9、VEGF表达的影响。方法取自愿终止妊娠者胎盘,剪取胎盘绒毛膜组织,分离并培养滋养层细胞。将滋养层细胞随机分为三组,对照组常规培养,KP组加入终浓度为100 nmol/L KP蛋白进行培养,KP+P234组加入终浓度为100 nmol/L KP蛋白及其抑制剂P234(终浓度5μmol/L)进行培养,均培养30 min。用细胞划痕实验检测各组滋养层细胞迁移率;荧光定量PCR法检测细胞内KP、GPR54、MMP-9、VEGF mRNA表达;Western blotting法检测细胞内ERK蛋白表达。结果与对照组比较,KP组、KP+P234组细胞迁移率低(P均<0.05),KP组最低(P<0.05)。KP组KP mRNA相对表达量较KP+234组高(P<0.05),与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);三组GPR54 mRNA相对表达量比较,P均>0.05;与对照组比较,KP组、KP±P234组MMP-9、VEGF mRNA相对表达量低(P均<0.05),KP组最低(P均<0.05)。与对照组比较,KP组、KP±P234组ERK蛋白相对表达量低(P均<0.05),KP组最低(P<0.05)。结论 KP可抑制早期胎盘滋养层细胞迁移,抑制细胞内ERK、MMP-9及VEGF表达。

DHPLC和PCR-RFLP技术筛查下肢静脉血栓患者EPCR多态基因

目的探讨下肢静脉血栓患者内皮细胞蛋白C受体基因(EPCR)多态性分布状态。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆s EPCR水平;采用变性高效液相色谱技术(d HPLC)和限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术检测内皮细胞蛋白C受体基因6936位点单核苷酸(SNP)多态性。结果在下肢静脉血栓组,G等位基因的频率(24.0%)和血浆s EPCR平均水平(141.6+30.1 ng/ml),显著高于对照组G等位基因频率(9.4%)和s EPCR平均水平(110.2+26.4 ng/ml)。结论 EPCR6936的基因多态性与下肢静脉血栓风险相关。

人乳头瘤病毒6b型重组减毒沙门菌的构建及表达

目的：构建ＨＰＶ６ｂ Ｌ１Ｅ７嵌合基因重组减毒沙门菌，为进一步粘膜免疫奠定基础。方法：用ＰＣＲ方法扩增获得ＨＰＶ６ｂ 的 Ｌ１Ｅ７ 嵌合基因片段，ＴＡ 克隆后，再将Ｌ１－Ｅ７ 基因克隆入ｐＴＥＴｎｉｒ１５ 沙门菌表达质粒。用电转化法将重组表达质粒导入鼠伤寒减毒沙门菌Ｓ．ＢＲＤ５０９（△ａｒｏＡ，△ａｒｏＣ）中，厌氧诱导其表达，蛋白样品做ＳＤＳ－ＰＡＧＥ 凝胶电泳 和ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析。结果：用ＢａｍＨＩ和ＳａｌＩ双酶切重组表达质粒ｐＴＥＴｎｉｒ１５６ｂＬ１Ｅ７可释放２３８９ｂｐ和１５５４ｂｐ两片段，结果与预计相符。ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ结果显示，重组沙门菌在约５６ＫＤ处有明显特异蛋白条带，而对照菌则无。结论：该重组沙门菌能特异地表达ＨＰＶ６ｂ Ｌ１－Ｅ７ 融合蛋白，人乳头瘤病毒ＨＰＶ６ｂ Ｌ１－Ｅ７重组减毒沙门菌构建成功。

sHLA-G检测及胚胎植前筛选

目的探讨胚胎植前筛选以提高胚胎移植成功率。方法单胚培养体外受精胚胎,ELISA方法检测移植成功组与失败组胚胎培养上清液sHLA-G水平,并比较培养上清中sHLA-G与胚胎HLA-G mRNA表达的相关性。结果胚胎移植成功组sHLA-G水平显著高于未成功受孕组;sHLA-G>10 ng/ml移植组受孕成功率60.9%,sHLA-G<5 ng/ml成功率11.5%。结论sHLA-G是植前筛选良好指标,能提高胚胎移植成功率。

白血病基因诊断及其信息系统建立

目的用基因诊断技术对白血病分型诊断及微小残留病(MRD)监控,同时对所检测数据建立信息系统。方法巢式RT-PCR扩增急髓性白血病融合基因,PCR扩增急性淋巴细胞白血病基因重排,用Delphi程序设计信息系统。结果M2b型白血病能扩增出AML1/ETO融合基因;M3型白血病能检测出L型和S型融合基因;慢粒白血病可检测出b3a2和b2a3融合基因;急淋白血病可检测出IgH、TCRγ、TCRδ基因重排。结论基因诊断能有效进行白血病分型及MRD监控,信息系统的建立方便了检测信息的管理及查询。

Kisspeptin对早期胎盘滋养层细胞的调节作用

目的探讨黑色素转移抑制基因(Kisspeptin,KP)基因在早期胚胎中对滋养层细胞的调节作用。方法免疫细胞化学法检测滋养层细胞KP和KP受体GPR54表达,实时定量RT-PCR检测Kisspeptin基因表达,SDS-PAGE和western-blot检测Kisspeptin蛋白表达,细胞划痕实验检测滋养层细胞侵袭性。结果 90%以上培养的细胞均表达KP和其受体GPR54;KP抑制滋养层细胞迁移率为44.1%,KP抑制MMP-9和VEGF表达。结论 KP抑制早期胎盘滋养层细胞迁移,抑制ERK和血管活化相关因子。

血浆Kisspetin-10评估先兆子痫及胎儿发育状况

目的评估kisspeptin-10在先兆子痫发病中的作用,探讨血浆kisspeptin-10水平与胎儿发育状态的关系。方法45例先兆子痫孕妇和40例正常对照孕妇,在妊娠25周检测血浆Kisspeptin-10水平,彩超检测胎儿脐动脉血运。结果先兆子痫组血浆kisspeptin-10水平较低,与病情严重程度呈负相关;kisspeptin-10水平与重度先兆子痫患者胎儿体重正相关;Kisspeptin-10水平与重度先兆子痫患者抵抗指数呈正相关;与先兆子痫患者收缩/舒张比值呈负相关。结论血浆Kisspeptin-10水平与先兆子痫发生相关,可用于评估胎儿发育状况的监控指标。

小鼠骨髓树突状细胞的诱导培养及抗CT-26肿瘤细胞的研究

目的:研究小鼠骨髓树突状细胞的诱导培养及其抗肿瘤特性。方法:用重组的鼠粒-巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)及白细胞介素4(IL-4)从小鼠骨髓干细胞中诱导培养树突状细胞(DC),用流式细胞仪检测DC表型。肿瘤细胞CT-26冻融液负载DC后,治疗荷瘤BALB/c小鼠,测定DC抑瘤、消瘤作用及小鼠的生存期变化。结果:诱导的DC形态典型,表面高表达CD80、CD86、I-Ad等免疫分子。抗原负载的DC能明显抑制早期肿瘤的生长,治疗组与非治疗组生存期差异有统计学意义。结论:树突状细胞早期应用具有明显抗CT-26肿瘤细胞作用,可延长荷瘤小鼠的生存期。

幽门螺杆菌感染者IL-8-251多态性及胃液相关细胞因子分泌

目的探讨幽门螺杆菌感染者IL-8-251各基因型与胃液中血管生成相关的细胞因子分泌之间的相关性。方法摘取正常人和胃癌患者胃黏膜组织以PCR-RFLP技术对IL-8-251进行基因分型;ELISA法检测胃分泌液中IL-8、VEGF和MMP-9细胞因子浓度。结果 HP(-)正常对照组中,AA型:IL-8(14.4±1.2)μmol/l,VEGF(2.31±0.48)μmol/l,MMP-9(20.4±5.3)μmol/l;TT型:IL-8(8.7±2.6)μmol/l,VEGF(1.28±0.33)μmol/l,MMP-9(8.9±3.5)μmol/l。HP(+)对照组:AA型:IL-8(22.6±5.3)μmol/l,VEGF(3.22±0.62)μmol/l,MMP-9(27.2±6.7)μmol/l;TT型:IL-8(14.2±3.6)μmol/l,VEGF(1.44±0.38)μmol/l,MMP-9(10.6±4.4)μmol/l。HP(-)胃癌组:AA型:IL-8(32.8±6.6)μmol/l,VEGF(3.81±0.72)μmol/l,MMP-9(46.2±8.3)μmol/l;TT型:IL-8(22.3±4.5)μmol/l,VEGF(1.83±0.42)μmol/l,MMP(20.2±4.6)μmol/l。HP(+)胃癌组:AA型:IL-8(38.2±5.6)μmol/l,VEGF(4.62±0.76)μmol/l,MMP-9(62.6±13.2)μmol/l;TT型:IL-8(28.6±3.8)μmol/l,VEGF(2.54±0.45)μmol/l,MMP-9(32.1±6.8)μmol/l。结论伴随HP感染者IL-8-251 AA型胃液中血管生成相关细胞因子IL-8、VEGF和MMP-9分泌增强,提示IL-8-251 AA型且HP感染者可能更易促使胃癌的发生发展。

外周血CK-19评价乳腺癌术后化疗及监控血液微转移

目的以外周血CK-19为指标评价术后化疗作用及其监控血液微转移意义。方法以120例乳腺癌术后患者为研究对象,巢式RT-PCR检测外周血CK-19 mRNA,比较化疗前后表达差异及CK-19表达与乳腺癌远处转移关系。结果化疗前血液微转移阳性率为23.33%,化疗后为3.33%,差异有统计学意义(P<0.01);CK-19阳性组肿瘤转移率为76.9%,阴性组肿瘤转移率为8.6%,两组差异有统计学意义(P<0.01)。结论术后辅助化疗能降低乳腺癌血液微转移;外周血CK-19能监控乳腺癌血液微转移。

先兆子痫患者胎盘滋养细胞MMP-9表达及侵袭性研究

目的研究基质金属蛋白酶-9在胎盘中的表达及与先兆子痫发生的相关性。方法 RT-PCR扩增胎盘绒毛膜组织MMP-9,同时ELISA法测定外周血MMP-9蛋白浓度,结果先兆子痫发生病例中,胎盘组织MMP-9相对于β-actin表达为0.23+0.06,而正常孕妇表达率为0.52+0.12;外周血中MMP-9蛋白相应为102.4+27.2 ng/ml和287.4+46.2 ng/ml,两者差异显著。结论 MMP-9表达与先兆子痫发生相关。

Access快速开发医学检验报告系统

原因检验科常需要开展新的检验项目,如何使信息系统化,方便信息输入、查询及输出检验报告,是医学检验技师们面临的新问题。本文使用Office套件中Access2000软件演示如何开发医学检验报告系统。

小鼠树突状细胞介导CT-26实体肿瘤凋亡研究

目的研究负载树突状细胞诱导实体肿瘤凋亡作用,为其用于临床生物治疗提供依据。方法从小鼠骨髓诱导培养树突状细胞,以CT-26肿瘤细胞冻融液为DC负载抗原,测定此负载的DC体内诱导CT-26实体肿瘤凋亡效果。结果诱导的树突状细胞形态典型;CT-26细胞冻融液负载的DC诱导实体瘤外周细胞凋亡明显,而内部细胞罕见凋亡。结论负载DC治疗体积较大的实体瘤作用有限,可能更适合微瘤治疗。

泰山地区回民糖耐量异常群体VDR受体基因多态性分析

目的探讨泰山地区回民群体糖耐量异常与维生素D受体基因多态性相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性长度多态性技术,对回民糖耐量异常者和糖耐量正常回民检测VDR基因(Apa-I和Fok-I)多态性及等位基因分布频率,并检测VDR蛋白血液含量。结果糖耐量异常组Apal-I多态性AA、Aa和aa基因型分布率为10%、34.6%和55.4%,正常对照组相应为13.8%、42.5%和43.7%:糖耐量异常组Fok-I酶切多态性FF、Ff和ff基因型分布率为23.2%、41.1%和35.7%,正常对照组相应为13.8%、42.5%和43.7%;结论泰山地区回民群体糖耐量异常与维生素D受体基因多态性相关;VDR蛋白血液浓度和胰岛素抵抗在各型间显示差异性。

TGF‑β‑ERK/MAPK信号通路调控子宫内膜异位症发生的机制

目的探讨TGF-β-ERK/MAPK信号通路在子宫内膜异位症中的作用。方法检测子宫内膜异位症患者子宫内膜组织中TGF-β的表达及其对ERK/MAPK信号通路的激活效应。结果与正常对照组相比,子宫内膜异位症患者子宫内膜间质细胞TGF-β的表达显著升高;TGF-β的过度表达增加了子宫内膜间质细胞的增殖、上调增殖细胞核抗原和细胞周期蛋白D1表达;TGF-β激活了ERK/MAPK信号通路。结论TGF-β通过ERK/MAPK信号通路促进子宫内膜异位症发生。

乳腺癌LAT1表达及micro-PET示踪检测

目的探讨乳腺癌L-型氨基酸转运蛋白1(LAT1)基因的表达及小动物正电子断层扫描仪(micro-PET)示踪检测乳腺癌的价值。方法检测乳腺癌细胞LAT1 mRNA和蛋白表达水平,以^(18)F-氟环丁烷羧酸(^(18)F-FACBC)为显像剂的micro-PET示踪检测裸鼠种植的乳腺癌。结果非致瘤乳腺细胞系MCF-10A表达低水平的LAT1 mRNA和蛋白,而恶性的癌细胞系MCF-7表达高水平的LAT1 mRNA和蛋白;抑制LAT1可抑制乳腺癌细胞增殖;以^(18)F-FACBC为显像剂的micro-PET能有效检测裸鼠种植的乳腺癌。结论乳腺癌高表达LAT1,LAT1可作为诊断乳腺癌的生物标志物,^(18)F-FACBC与LAT1可用于micro-PET示踪检测乳腺癌。

牙周炎患者口腔中的幽门螺杆菌

目的初步探讨牙周炎患者口腔中的幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)与牙周炎的关系。方法依据Hp特异的尿素酶C和cagA基因设计引物,建立PCR方法。检测37例牙周炎患者口腔中的Hp,同时设立牙周健康对照组,比较两组的检测结果。结果尿素酶C基因在牙周炎组的阳性率为64.8%,健康组为38.5%;尿素酶C基因和cagA基因共同阳性率在牙周炎组为32.4%,健康组为7.7%;两组差异有统计学意义;且轻型牙周炎患者口腔Hp阳性率低于中、重型患者。龈下菌班Hp阳性率高于龈上菌班。结论口腔是Hp的一个重要聚积地,Hp与牙周炎有相关性。

妊娠期糖尿病MIF表达及相关影响因素分析

目的研究巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在妊娠期糖尿病中的表达及影响因素。方法半定量RT-PCR扩增妊娠期糖尿病患者和正常孕妇腹部皮下脂肪细胞MIF基因;ELISA法检测外周血清MIF因子浓度;分析MIF与BMI、TC、TG、LDL、HLDL相关性。结果妊娠期糖尿病患者MIF mRNA表达率(0.625+0.17)和血清MIF(3.86+0.52ng/ml)均显著高于正常孕妇。结论 MIF是妊娠期糖尿病显著影响因子,MIF与BMI、TC、TG、LDL正相关,与HLDL负相关。

表达HPV6b L1-E7嵌合蛋白的减毒沙门菌诱导小鼠免疫应答

目的 探讨表达人乳头状瘤病毒 6b型 (HPV6b)L1 E7嵌合蛋白的减毒沙门菌诱导小鼠粘膜及系统免疫反应的可行性。方法 对重组减毒沙门菌S .BRD5 0 9 pTETnir15 6bL1E7体外厌氧诱导其表达 ,Westernblot方法鉴定表达的L1 E7蛋白。此重组沙门菌经滴鼻和口服联合粘膜免疫BALB c小鼠 ,采用ELISA方法及足垫肿胀试验分别检测免疫小鼠血清及阴道冲洗液中特异性抗体和DTH反应。结果 Westernblot分析显示 ,重组沙门菌在预计相对分子质量 (Mr) 5 6× 10 3 处有特异染色带 ,提示此重组沙门菌能表达特异的HPV6bL1 E7蛋白。ELISA检测结果表明实验组小鼠阴道冲洗液中HPV6bL1特异性sIgA显著升高 ,和对照组比较两者差异有显著性 (P <0 .0 1) ,但小鼠血清中HPV6bL1IgG抗体无明显变化 ,实验组和对照组两者差异无显著性。DTH结果显示 :与对照组比较 ,实验组小鼠接受HPV6bL1 E7抗原刺激后产生明显阳性反应 ,提示重组沙门菌免疫小鼠产生了针对HPV6bL1 E7抗原的特异性细胞免疫反应。结论 构建的重组减毒沙门菌S .BRD5 0 9 pTETnir15 6bL1E7可激发有效的粘膜免疫及细胞免疫反应 ,为进一步研制新型HPV粘膜疫苗奠定了实验基础。

重组减毒沙门菌粘膜免疫的研究进展

文章介绍以减毒沙门菌为载体进行粘膜免疫的机制 ,讨论沙门菌的不同减毒类型 ,所用的启动子 ,可呈递的抗原 。