抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的研制及其特性鉴定

以新生乳猪增殖猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ），通过蔗糖密度梯度离心将其纯化，获得较为完整的病毒颗粒。病毒ＥＬＩＳＡ效价为１∶３×１０５，蛋白含量为３．９６ｇ／Ｌ。将提纯的ＰＥＤＶ免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取免疫鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞进行融合，融合率为９５．６％。用间接ＥＬＩＳＡ进行筛选，共检出３８个阳性孔，阳性率为２８．８％。对其中１５个阳性值较高的孔进行３次再克隆，阳性率达１００％，最后获得１５株稳定分泌特异性抗ＰＥＤＶ单抗（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞。ＥＬＩＳＡ阻断试验与交叉试验证明，其分泌的抗体具有高度特异性。腹水和细胞培养上清的ＥＬＩＳＡ效价分别为１∶１０３～１∶１０６和１∶１２８～１∶５１２。经鉴定，１５株ＭｃＡｂ的分子类型均为ＩｇＧ，均无免疫沉淀特性。杂交瘤细胞的染色体数目为９０～１１０，平均９５。尤为重要的是，这些杂交瘤细胞所分泌的抗体，有的对ＰＥＤＶ具有中和作用，能够阻断病毒对猪只的侵害作用。

兔出血症病毒单克隆抗体的抗原识别位点分析

通过ＥＬＩＳＡ迭加试验对６株抗兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的抗原表位进行了分析。抗体反应增值结果表明，６株单抗分别针对３类不同的抗原决定簇。ＣＧ４－１、ＣＨ３－１和ＡＡ８－１针对病毒结构多肽上的同一决定簇，ＣＦ２－１和ＲＭ－１７针对另一决定簇，而ＲＭ－１４针对第３种决定簇；其识别表位可能与ＡＡ８－１非常接近。

抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的中和与被动保护试验

应用抗猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株诱生腹水ＭｃＡｂ，将３株单抗混合，用于实验室防治试验。结果表明，其对病毒具有中和作用，可使病猪耐过ＰＥＤＶ的侵袭；用于生产场的发病猪，初步证明疗效显著，保护率达９１％，而未注抗体的对照发病猪全部死亡。上述结果表明，抗猪流行性腹泻病毒ＭｃＡｂ混合制剂确能缓解发病症状，减少新生猪的死亡。

新颖抗猪流行性腹泻免疫制剂

以新生乳猪增殖猪流行性腹泻病毒（PEDV），通过蔗糖密度梯度离心纯化，获得结构较为完整的病毒颗粒，病毒ELISA效价为1：3×105，蛋白含量为3．96mg／mL．将提纯的PEDV免疫Balb／C小鼠，取其脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞进行融合．融合率为95．6％。用间接ELISA筛选并进行3次再克隆，阳性率达100％，共获用15株能稳定分泌特异性抗PEDV单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞．其染色体数平均为90～100．所分泌抗体具有高度特异性，腹水ELISA效价为1：103～1：106。用混合单抗对新生猪的保护试验证明，这些单抗不论在体内或体外．对PEDV均有中和作用．试验绪可以得到抗体的保护耐过不死，而病毒对照组的猪只全部死亡。将混合单抗用于PED的发病场，保护率达91％．建立了PPA－ELISA、McAb阻断ELISA及MCAb免疫荧光试验等快速诊断方法．

猪流行性腹泻抗体PPA-ELISA检测方法的建立及其应用

应用纯化猪流行性腹泻病毒抗原(PEDV)和酶标葡萄球菌A蛋白(PPA)建立的A-ELISA,通过对免疫猪血清PEDV抗体的动态测定及临床自然感染猪血清抗体水平的检测表明,该法敏感、特异、简便、快速,尤适于基层猪场大批血清样品抗体水平的普查与检测.

应用单克隆抗体夹心酶联免疫吸附试验检测兔出血症病毒

应用建立的单克隆抗体夹心酶联兔疫吸附试验（ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ），检测了人工感染兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）ＤＪＲＫ细胞毒、肝毒的兔以及自然感染ＲＨＤＶ的兔的组织样品。结果表明，感染死亡兔的肝、脾、肾、骨髓样品病毒抗原的检出率为１００％，淋巴结和肌肉的检出率分别为９７．５％和７９．５％。ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ能检出肌肉中血凝试验不能检出的ＲＨＤＶ抗原。此外，还用ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ检测了肝毒人工感染兔血中ＲＨＤＶ的动态，并对１０份兔出血症脏器灭活苗的效价作了滴定。

用单克隆抗体反向间接血凝检测兔出血症病毒

将抗兔出血症病毒(RHDV)的 AA8-1和 CG4-1两株单抗(McAb)分别致敏双醛化人红细胞,混合后建立单抗反向间接血凝(McAb-RPHA)方法。其敏感性较常规血凝试验(HA)高256倍,最小检出量为0.214 ng/ml。此法对感染兔的心、肝、脾、肺、骨髓、血液等检出率均为100%;脊髓、淋巴结、肌肉等组织的检出率分别为62.5%,58.3%和37.5%。HA 的检出率除肝为100%外,其余均低于 McAb—RPHA,不能检出脊髓、淋巴结和肌肉样品中的病毒抗原。

舒血宁联合依达拉奉注射液治疗急性脑梗塞58例

目的:观察舒血宁联合依达拉奉注射液治疗急性脑梗塞的临床疗效。方法:选择112例住院的急性脑梗塞患者随机分两组,治疗组58例采用舒血宁联合依达拉奉治疗,对照组54例采用丹参联合脑蛋白水解物注射液治疗。两组用药均14d为1个疗程。结果:治疗组疗效明显好于对照组(P<0.05)。结论:舒血宁联合达拉奉注射液治疗急性脑梗塞疗效好,副作用小,值得临床推广。

银杏达莫注射液联合西药治疗不稳定性心绞痛30例

[目的]观察银杏达莫注射液联合西药治疗不稳定性心绞痛的临床疗效。[方法]将56例不稳定性心绞痛患者随机分为两组,对照组26例给予常规西药治疗,治疗组30例在常规治疗的基础上加用银杏达莫注射液,疗程均为14d,观察两组治疗前后临床疗效和心电图变化情况。[结果]两组患者心绞痛发作疗效、心电图总有效率比较,治疗组优于对照组(P<0.05)。[结论]银杏达莫注射液联合西药治疗能有效减少不稳定性心绞痛患者的发作频率、持续时间和心肌耗氧量,疗效优于单纯西药常规治疗,值得临床推广和应用。

中医外治法治疗冠心病心绞痛研究进展

中医治法可概分为内治和外治两大类：用口服药物治疗疾病的方法为内治法，口服药物以外治疗疾病的方法统称为外治法。中医外治法是在长期的医疗实践中逐渐总结、丰富和发展起来的，是运用特定的手段对人体相应的体表位置及特定部位产生不同程度的刺激，来调整机体功能，恢复生理状态，祛除疾病的方法。近年来应用中医外治法治疗心绞痛越来越受到重视，也取得了较好疗效。现将对近年有关研究综述如下。

中西医结合治疗消化性溃疡42例

目的:探讨中西医结合方法治疗消化性溃疡的疗效。方法:消化性溃疡患者78例随机分成治疗组42例,对照组36例。两组患者均给予质子泵抑制剂+抗生素治疗,治疗组同时服用中药三合汤。结果:治疗组治愈33例、好转6例、无效3例、总有效率92.86%;对照组治愈14例、好转15例、无效7例、总有效率80.56%。治疗组治愈率、总有效率均高于对照组(P<0.01)。结论:中西医结合治疗消化性溃疡疗效优于单纯西药治疗。

应用单克隆抗体ELISA阻断试验 快速检测兔出血症病毒抗体的研究

利用抗兔出血症病毒(RHDV)的特异性单克隆抗体(McAb)建立了ELISA阻断试验用以检测血清抗体,并与血凝抑制(HI)和琼脂扩散试验(ID)进行了比较。结果ELISA阻断试验敏感性超过HI,更远胜于ID,具有灵敏、特异、准确等优点,适于大批血清样品的快速检测。

猪流行性腹泻病毒的分离培养与鉴定

上海市农业科学院畜牧兽医研究所在上海郊区分离到一株猪流行性腹泻病毒（PEDV）。以人工攻毒发病猪的小肠粘膜无菌处理后接种已长成单层的VERO（非洲绿猴肾）传代细胞，并在维持液中加入胰酶50μg／mL和2％的小牛血清。盲传第4代时，于接种后的第3天出现致细胞病变作用（CPE）。自第8代开始，CPE于接种后16h开始出现，以后就一直有规律地稳定出现。CPE的主要表现为细胞的折光度降低、细胞圆缩、颗粒变性、细胞融合而形成多核巨细胞。至40～48h，CPE明显，细胞部分脱落，收获。同时，将人工攻毒发病猪的小肠粘膜无菌处理后的病毒与经胰酶消化分散的VERO一起培养。并在生长液中加入胰酶50μg／mL，3～4d长成单层。如此经盲传若干代，可用荧光抗体检测到在细胞浆内有特异性的荧光颗粒出现。目前，该带毒的VERO细胞已传至102代。

《内经》心血管、神经系统同一体认识的研究——兼对比中、西医学在器官结构认识上的差异并探讨络的实体

目的:探讨《内经》对心血管系统与神经系统二者关系的认识,对比中医学与西(现代)医学在器官结构认识上的差异,认识络的实体。方法:通过认识《内经》心与心主的关系,结合有关对脏和三焦的微观结构认识。结论:在《内经》的五行学说理论中,心血管系统已经兼并了神经系统,二者在解剖结构和生理功能上同一体,此认识是《内经》对人体解剖学的伟大贡献。中医学与西医学对器官的组织结构认识上的关键性差异,在于是否强调认为毛细血管网和神经纤维网是器官的基本骨架性主体结构,此差异体现在哲学上而不是在解剖学上。"脉络—周围神经系"也具有同一性,"络"的实体主要是毛细血管网和神经纤维网,它们就是络病的主要病位。

鸡粪的营养成分分析

鸡粪作饲料的根据，是利用其含有较高的蛋白质营养成分。本文分析了用不同处理方法处理的上海地区的６～７个鸡粪饲料中的粗蛋白（以干物质计，下同）在１１．４％～３７．８％；１７种氨基酸的总量在６．１６％～１２．９６％，磷在０．９２％～４．２１％；钙在６．８６％～１６．５２％；铜、锌、锰、钠、钾等微量元素含量很高。以上这些营养成分的含量可以和常规饲料中的玉米、麦类、碎米等匹敌。但鸡粪中的矿物质过高，因此以鸡粪作饲料时，在配比上应取长补短。

猪瘟PPA-ELISA的免疫监测

应用纯化猪瘟病毒抗原(SFV)和酶标葡萄球菌A蛋白(PPA)建立PPA-ELISA,并通过对12份设定阴性血清和38头仔猪注苗前后不同时期164份系列血清的检测结果表明,免疫母猪所产未注苗仔猪在30日龄时母源抗体水平个体差异很大。光密度值(OD)为0.28～1.77((?)=0.98),有1/6的仔猪血清抗体水平在保护临界点以下;免疫母猪与其所生未注苗仔猪血清中抗体水平并不呈正相关;仔猪于30日龄时注苗,60日龄时ELISA抗体水平急剧上升,90日龄时达峰值,维持至120日龄,之后逐渐下降,到150日龄时降至注苗前水平。另外,对1头份、2头份、4头份等不同免疫剂量进行了比较,三者的免疫效果无显著差异。

《内经》心血管、神经系统同一体认识的研究(续)——探讨中医学对二系统实体的一系列传统认识错误

通过探讨《内经》心血管系统与神经系统同一体的认识,在五行学说的架构下,为二系统的各级实体,找到各自在中医学里的位置,使它们与中医学里的心、心主、脑髓、小肠、舌、心包、膻中、心包络、经脉、神脏、三焦等概念相对应。并由此发现了中医学对二系统实体的一系列传统认识错误。在五行的架构内,三焦的基本结构是整个人体的的毛细血管网(含毛细淋巴管网)与神经纤维网。五行架构内三焦的概念,与微神经-微血管-机体代谢的综合活动密切相关。

四株鸡毒霉形体菌株对SPF鸡胚的致病作用

将MG不同菌株的培养物，经卵黄囊接种SPF鸡胚，结果各菌株均能使鸡胚发生死亡，总死亡率在接种后3～13d内达82％，死胚经病变检查，菌检和分离物的血清学鉴定，证实系感染MG所致。测定了MGIc1菌株的不同接种量对鸡胚死亡的影响，发现它们之间没有很密切关系。在SPF源鸡体上致病力低下的二株MG菌株的鸡胚致死率为60％～90％，反映出同一菌株对鸡体和鸡胚的致病力有差异。从部分死胚的卵黄、卵黄囊、绒毛尿囊膜和尿囊液中分离到MG，并测定了这些部位MG的含量。根据实验结果，认为SPF鸡胚人工感染MG，具有比SPF源鸡体更敏感、所需试验条件简单、恒定、因果关系明确的优点，可以作为测试MG菌株某些性质的一种模型。

鸡粪饲料喂猪喂鱼试验

由于鸡的消化道比较短，饲料在其体内停留的时间也很短，因此，日粮中２０％～３０％的营养未经消化吸收即被随粪排出。在高度集约化的饲养条件下，利用这些粪便中的蛋白质，无疑将会有较大的经济效益，因此，也减少了部分鸡粪对环境的污染。本试验用膨化后的鸡粪饲料喂猪，每增一千克肉试验组比对照组节约精饲料４．８８％，平均每头上市猪的毛利，试验组比对照组增收３６．７％。用膨化后的鸡粪喂鱼，２．４７ｈｍ２鱼塘平均每公顷净产鱼９６６１．５ｋｇ，每增重一千克鱼需耗鸡粪饲料２．８ｋｇ左右，每公顷净利比对照多收６０００多元人民币。

应用PPA-ELISA检测系统控制猪瘟的持续感染

上海郊区某两猪场自１９９４年初起不断有少量仔猪死亡，经诊断为猪瘟持续感染（亚临床隐性感染）。对发病舍的母猪和仔猪应用ＰＰＡ-ＥＬＩＳＡ检测系统重点检测其血清猪瘟抗体水平，表明有８．３％的母猪和相当数量的仔猪抗体效价处于低水平状态。普查表明，在１１５８头母猪中ＯＤ值小于０．５的有５７头，占４．９２％。用４头份的猪瘟疫苗对抗体水平低的母猪进行强化免疫，一个月后检测其抗体效价；再用６头份的猪瘟疫苗对抗体效价水平仍然低的母猪进行强化免疫，一个月后再测抗体效价，此时仍有７头母猪的猪瘟抗体效价很低，于是，将其扑杀。经一段时间的观察，结果显示猪瘟已获得控制，再未见有仔猪死于猪瘟。