用B-超检测奶牛发情后第7天黄体大小与受胎率关系的研究

用B-超对16头1—5胎发情配种后第7天的荷斯坦奶牛卵巢上黄体的面积进行了测定，60d后经妊娠检查，有10头妊娠，6头未妊，其发情后第7天黄体的面积分别为（2．46±0．55）cm^2、（1．74±0．10）cm^2。经t检验两者差异显著（P〈0.05）。结果表明黄体的大小与受胎率之间存在相关性，这为胚胎移植时挑选适宜的受体牛提供了一定客观依据。

性控精液对奶牛人工授精情期受胎率及性比例的影响

本试验用经流式细胞分离仪分离的富含X精子的性控精液及常规精液对奶牛进行人工授精。结果表明：试验组(性控精液)与对照组(常规精液)情期受胎率分别为54.81%(74/135)和60.61%(40/66),两者之间差异不显著(P＞0.05)。试验组所产犊牛母犊率为97.14%(34/35)。试验表明,通过控制母牛输精部位及时间,可使性控精液的受胎率接近常规精液水平。用性控精液进行人工授精所产后代的母犊率远远高于常规精液。

肛瘘内口寻找的体会

目的:总结如何更好、更快地寻找肛瘘内口的最佳方法。方法:回顾性分析肛瘘100例的治疗资料。结果:术中找到内口一次性治愈100例(100%),术后随访1年无复发、肛门失禁、狭窄等后遗症。结论:肛瘘内口的原发位置约98%多在齿状线肛窦处。

X精液诱导奶牛双胎产双母犊试验

自20世纪30年代以来，国内外学者利用各种途径展开了人工诱导母牛双胎的研究，尤其是近年来随着人们对母牛繁殖机理研究的深入和胚胎生物技术的快速发展，人工诱导母牛双胎已成为可能。母牛怀双胎的最大不利影响是异性孪生不孕，据FujishiroA等报道，有92％的异性孪生母犊不孕，因此诱导双胎技术无法在奶牛上应用。随着性别控制技术的发展，用性控精液（X精液）对诱导排双卵的母牛输精，让其产双母犊，可解决异性孪生不孕的问题，从而能成倍提高奶牛的繁殖效率。为此开展此项研究，现报道如下。

产科照顾者角色困难原因分析及护理对策

照顾者角色能否胜任,直接关系到病人病情的好转与康复.在产科主要关系到产妇身体的康复和婴儿的健康成长,母乳喂养成功率等.现就一些照顾困难找出原因,主要有知识缺乏,躯体疾病,文化层次低接受能力差,环境陌生,与被照顾者关系不融洽等原因.本文对这些原因加以剖析,以便照顾者对症施护,帮助或促进照顾者胜任其角色.

肛周脓肿的手术方法

目的:探讨肛周脓肿的治疗方法。方法:回顾性分析我科2005-2010年150例肛周脓肿的手术治疗资料。结果:术中分别采取单纯切开引流及一期瘘管切开术,术后随访1年,有10例复发或形成肛瘘。未出现肛门失禁、狭窄等后遗症。结论:肛周脓肿的治疗应根据具体病情,采取单线切开引流及一期瘘管切开相结合的治疗方法。

膝关节骨性关节炎外科手术治疗体会

目的探讨与分析膝关节骨性关节炎外科手术的治疗方式。方法选取我院于2010年6月~2012年6月收治的膝关节骨性关节炎患者80例,随机分为观察组和对照组两组,每组40例,观察组采用外科手术中的关节镜下关节清理治疗法,对照组采用保守治疗法,观察两组的治疗效果。结果在总有效率上,观察组明显优于对照组(P<0.05)。结论在治疗膝关节骨性关节炎当中,外科手术治疗的效果明显,能够缩短治疗周期,使治疗效果得到提升,值得临床推广。

幼羔超早期繁殖技术研究

幼羔超早期繁殖技术是集幼羔超排、活体采卵、体外受精、胚胎移植等技术为一体的胚胎生物技术体系。诱导羔羊卵泡发育技术（简称“幼羔超排”）是根据性成熟前幼龄母羔（1～2月龄）卵巢对生殖激素敏感，卵泡发育很少发生闭锁的特殊生理特点而发明的一项高效率生产羊卵母细胞的新技术。作者从幼羔超早期利用的意义，幼羔超排、幼羔卵母细胞体外受精和胚胎移植等方面综述了目前幼羔超早期利用技术的现状及发展前景。

奶牛定时输精技术研究

本试验选择产后25~35 d的健康荷斯坦牛,使用促黄体素释放激素A3(LHRH-A3)和前列腺素(PGF2α)2种生殖激素,利用不同方案对参试牛进行定时输精处理,研究奶牛定时输精的技术效果及其影响因素。方案一为Ovsync程序处理(LHRH-A_3+PGF_(2α)+LHRH-A_3),方案二为Ovsync程序改进方案(2次PGF_(2α)处理)。结果表明:方案一与方案二的受胎率分别为21.21%和46.67%,方案二显著高于方案一(P<0.05)。方案二于最后一次注射药物之后的18.1~19.0 h和19.1~20.0 h进行定时输精,其受胎率分别为44.44%和50.00%,二者之间差异不显著(P>0.05);输精时采用B超检测卵泡直径,发现卵泡直径为≤14.7 mm、14.8~20.0 mm和20.1~25.2 mm时的受胎率分别为0.00%、75.00%和38.46%,卵泡直径为14.8~20.0 mm组的受胎率显著高于卵泡直径≤14.7 mm组(P<0.05);不同季节开展定时输精技术的受胎率,春季、夏季、秋季与冬季分别为30.21%、15.56%、40.00%和40.74%,秋季与冬季显著高于夏季(P<0.05);高产奶牛与低产奶牛开展定时输精技术,其受胎率分别为55.56%和33.33%,高产与低产组间无显著差异(P>0.05)。综上可知,改进后的Ovsync程序比Ovsync程序效果好。

冷冻保存能降低绵羊卵母细胞受精能力

本实验研究了体外成熟绵羊卵母细胞在含抗冻保护剂DMSO和EG的冷冻液中暴露和OPS法玻璃化冷冻保存后对体外受精卵裂率、精子入卵率、皮质颗粒分布、酶溶解透明带时间及雌原核形成的影响。将体外成熟24h的绵羊卵母细胞分为3组:(1)对照组,卵母细胞不进行处理;(2)毒性组,卵母细胞在冷冻液中进行暴露但不投入液氮中冷冻;(3)冷冻组,卵母细胞利用OPS法进行玻璃化冷冻。处理组卵母细胞在浓度递减的蔗糖溶液中脱除抗冻保护剂。结果,卵母细胞体外受精的卵裂率和单精子入卵率,毒性组(62.3%和29.3%)和冷冻组(67.6%和28.2%)显著低于对照组(78.4%和45.0%)(P<0.05),毒性组和冷冻组间无显著差异(P>0.05)。为了研究冷冻保存导致卵母细胞受精能力降低的机制,处理组及对照组一部份卵母细胞分别于处理后0h(IVM24h)、2h(IVM26h)和体外受精后12h(IVF12h)测定皮质颗粒分布和用0.1%链霉蛋白酶溶解透明带时间,另一部份卵母细胞则在不含有精子的受精液中孵育12h后测定雌原核形成率。结果,在IVM24h和IVM26h,皮质颗粒呈完全释放的比例,毒性组(41.2%和40.8%)和冷冻组(41.7%和51.8%)显著性高于对照组(7.1%和18.4%)(P<0.05);IVM26h酶溶解透明带时间,毒性组(435.6±16.6)s和冷冻组(422.3±14.6)s显著长于对照组(381.6±15.3)s(P<0.05);雌原核形成率,毒性组(58.7%)和冷冻组(63.9%)组显著高于对照组(8.2%)(P<0.05)。上述结果表明,含DMSO和EG的冷冻液对体外成熟绵羊卵母细胞具有孤雌激活作用,引起皮质颗粒的提前释放,导致透明带变硬,降低卵母细胞的受精能力。

影响山羊胚胎冷冻效果因素的研究

分别用浓度为1.5 mol/L的乙二醇(EG),1.5 mol/L 1,2-丙二醇(PROH)和1.5 mol/L甘油为冷冻保护液对山羊胚胎进行常规冷冻保存,结果三者对山羊胚胎的冷冻保护效果无显著差异,其中以1.5 mol/L EG的冷冻保护效果为佳。以EFS40为玻璃化液对山羊胚胎进行细管法和OPS法玻璃化冷冻,其结果与常规冷冻间差异不显著,表明常规冷冻法、玻璃化细管法和OPS法均可用于山羊胚胎的冷冻保存。采用25℃和37℃水浴对常规冷冻和玻璃化冷冻后的山羊胚胎进行解冻,从解冻后的发育效果看,二者间无显著差异,但37℃水浴解冻后的胚胎发育效果略好于25℃。还比较了玻璃化液EFS40中添加FCS和BSA后与不添加其他成分的EFS40对胚胎冷冻保护效果的影响,结果表明添加BSA的EFS40的冷冻保护效果显著地高于不添加其他成分的EFS40,但与添加FCS的EFS40间不存在统计学上的差异。

不同直径的绵羊卵泡中卵母细胞核相及皮质颗粒分布特征分析

为了探讨绵羊体内卵母细胞的核相及皮质颗粒的分布特征,本研究根据绵羊卵泡直径将绵羊有腔卵泡分为早期有腔卵泡（l mm≤直径≤2.5 mm）与中期有腔卵泡（2.5 mm＜直径≤7.5 mm）两组,用地衣红染色方法观察两组绵羊卵泡中卵母细胞的核相特征及所占比例,用FITC-PNA、Hoechst 33342双染方法观察两组绵羊卵泡中的不同核相时期的卵母细胞的皮质颗粒分布特征.结果表明,绵羊早期有腔卵泡中的卵母细胞大部分处于GV1期,其核膜边缘不整齐,染色体呈细丝状,紧贴于核膜下均匀分布或集中于核膜下某处分布,皮质颗粒在胞质中密集、均匀的分布.绵羊中期有腔卵泡中的卵母细胞,大部分处于GV3～GV4期,其核膜边缘清晰、着色较轻,染色体短而粗,在核质中均匀分布,核质明显脱颗粒化,皮质颗粒开始向细胞膜迁移,部分卵母细胞的皮质颗粒在细胞膜下形成一圈密集的带状区域.由此可见,绵羊早期与中期有腔卵泡中的卵母细胞大部分处于GV期的不同阶段,其胞质中皮质颗粒开始发生迁移的时间早于生发泡破裂（GVBD）期.

性控精液对奶牛情期受胎率的影响

研究了性控精液对奶牛情期受胎率及母犊率的影响。结果表明:经产(青年牛/成母牛)对性控精液的受胎率有显著影响(P<0.05),输精部位、季节对性控精液的受胎率无显著影响(P>0.05)。青年牛试验组与对照组的情期受胎率分别为80.00%和60.00%。成母牛试验组与对照组的情期受胎率分别为33.33%和57.14%,没有显著差异(P>0.05)。性控精液的母犊率(95.45%)极显著高于常规精液的母犊率(47.37%)(P<0.01)。性控精液的流产率与犊牛成活率与常规精液差异不显著(P>0.05)。

BCB和Zebularine对绵羊体细胞核移植胚胎发育效果的影响

为探究亮甲酚蓝(BCB)染色选择的卵母细胞是否有利于体细胞核移植胚胎的体外发育,本实验将卵丘-卵母细胞复合体(COCs)放入含有BCB的PBS中染色,根据细胞质颜色可将卵母细胞分成BCB^+组和BCB^-组,并以未经BCB处理的COCs作为对照组,然后将卵母细胞进行体外成熟,统计卵母细胞的成熟率。将成熟后的卵母细胞进行体细胞核移植,其中,部分BCB^+组卵母细胞所需的供体细胞利用Zebularine处理,统计体细胞核移植的卵裂率、桑椹胚率和囊胚率。结果表明:BCB^+组卵母细胞的成熟率显著高于对照组和BCB^-组(71.15%vs 65.38%,53.52%,P<0.05);BCB^+组核移植胚胎的卵裂率(87.91%vs 56.83%)、桑椹胚率(37.41%vs 21.73%)和囊胚率(21.48%vs6.82%)均显著高于BCB^-组(P<0.05);与对照组相比,BCB^+组卵裂率(87.91%vs 83.23%)和囊胚率(21.48%vs14.89%)也显著升高(P<0.05)。BCB^+组供体细胞经Zebularine处理后,胚胎发育能力进一步提高,其中囊胚率显著高于BCB^+组、对照组和BCB^-组(29.25%vs 21.48%,14.89%,6.82%,P<0.05)。

影响山羊体外胚胎生产的主要因素

研究了不同成熟培养时间(21、242、7 h)、FSH剂量(0、0.02、0.04、0.06 AU/mL)和激素组合(FSH+LH+E2、FSH+LH、LH+E2、FSH+E2)、氨基酸以及负压低氧条件(-300 mmHg2、%CO28、%～10%O2)对山羊卵母细胞体外成熟/体外受精(IVM/IVF)的影响。结果表明:山羊卵母细胞成熟培养以24～27 h较为适宜;添加FSH组的受精卵裂率显著高于未添加组(P<0.01),添加剂量以0.02～0.04 AU/mL效果为最佳;LH对山羊的IVM/IVF无显著影响;E2添加对山羊IVM/IVF有负面影响,使囊胚发育率显著降低(P<0.05)。在成熟液中添加必需氨基酸(EAA)和非必需氨基酸(NEAA)均能显著提高受精卵裂率(P<0.05)。负压低氧环境对山羊卵母细胞的体外成熟无显著影响,但是不利于山羊的体外受精,使受精卵裂率极显著降低(P<0.01);负压低氧环境对提高胚胎发育率的作用不明显。

冷冻方法和冷冻保护液对山羊卵母细胞发育的影响

比较了不同冷冻方法和冷冻保护液对山羊卵母细胞冷冻-解冻后体外受精和激活后的发育效果。结果表明,开放式拉长塑料细管(OPS)法的效果好于玻璃化细管法和常规冷冻法;在OPS法中,20% EG+20% DMSO对卵母细胞的冷冻保护效果好于EDFS40,而在玻璃化细管法冷冻中,则是EDFS40好于20% EG+20% DMSO。对于常规冷冻法而言,则是1.5mol/L EG的冷冻效果好于1.5mol/LPROH。

绵羊卵丘细胞细胞周期同步化对核移植胚胎发育的影响

供体细胞周期同步化是影响体细胞核移植成功率的重要因素之一。试验分别对绵羊卵丘细胞采用血清饥饿和接触抑制的方法进行细胞周期同步化处理,使用流式细胞仪检测各组细胞周期的分布。结果发现,与对照组相比,卵丘细胞经血清饥饿24~72h后,显著地增加了G0/G1期细胞的百分比（P〈0.05）;接触抑制24~72h,G0/G1期细胞所占比例与血清饥饿组无显著差异（P〉0.05）,但显著高于对照组（P〈0.05）;用经血清饥饿与接触抑制的供体细胞进行核移植后,重构胚卵裂率、桑椹胚率和囊胚率差异不显著（P〉0.05）,但二者囊胚率显著高于对照组（P〈0.05）。上述结果证实,血清饥饿和接触抑制均能使绵羊卵丘细胞周期同步化至G0/G1,均可用作绵羊体细胞核移植的供体细胞细胞周期同步化处理。

诱导荷斯坦犊牛卵泡发育及体外受精研究

从日龄、培养条件和供体个体差异3个方面对4～9周龄犊牛JIVET（juvenile in vitro embryo transfer）技术的影响进行了初步研究。试验结果如下：不同日龄的10头母犊激素诱导后，30～40d母犊平均获卵数为（31．8±9．75）枚，46～63d的母犊平均获卵数为（21．8±11．67）枚，二者差异不显著（P〉0．05）；犊牛胚胎在3气（5％ CO2，5％ O2，90％ N2）条件下和与颗粒细胞共培养条件（5％CO2，95％空气）下卵裂率分别为48．5％和54．1％，二者差异不显著（P〉0．05），但是桑葚胚率差异显著（0％，15．2％，P〈0．05）；供体间个体差异很大，70％（7／10）的个体对激素诱导反应良好。