五子衍宗丸通过抑制GRP78减轻EAE小鼠持续的内质网应激

目的观察五子衍宗丸对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠内质网应激的影响。方法 C57BL/6雌鼠随机分为正常组、模型组和五子衍宗丸组,免疫后第3天起,进行药物干预,持续25 d。每天记录神经功能评分。采集小鼠脊髓标本,进行苏木素-伊红染色和髓鞘染色观察五子衍宗丸的神经保护作用;Western blot检测脊髓GRP78、Caspase-12、CHOP的蛋白表达。结果与模型组相比,五子衍宗丸可延缓小鼠起病时间(P<0.01)并改善神经功能(P<0.01),抑制脊髓炎性细胞浸润和白质髓鞘脱失(P<0.05,P<0.01),降低脊髓组织GRP78、Caspase-12、CHOP的蛋白表达(P<0.05)。结论五子衍宗丸对EAE小鼠有一定的防治作用,可能与抑制GRP78来减轻持续的内质网应激有关。

多发性硬化发病机制研究进展

多发性硬化(MS)是一类自身免疫性疾病,目前全球发病人数不断增长,病理特点主要涉及中枢神经系统炎性浸润伴随的神经胶质细胞增生,髓鞘脱失和轴突损伤等。确切的发病机制尚不十分明确,目前研究结果认为不良生活方式和人体内环境的变化会导致外周免疫细胞的激活,分泌的炎性因子浸润中枢神经系统后引发神经胶质细胞增生,继而发生髓鞘脱失和继发性轴突损伤,临床上多表现为感觉障碍、自主神经功能紊乱、共济失调等。文章对近年来报道的有关外周免疫系统、中枢神经胶质细胞、人体内环境和生活方式在MS发病机制中的作用做一概述。

五子衍宗丸对脱髓鞘模型小鼠脑组织星形胶质细胞神经营养因子分泌的影响

目的探讨五子衍宗丸对脱髓鞘模型小鼠髓鞘的影响及可能分子机制。方法24只C57BL/6雄性小鼠随机分为空白组、模型组和五子衍宗丸组,每组8只。模型组和五子衍宗丸组小鼠采用含0.2%双环己酮草酰二腙的饲料饲喂6周,空白组给予正常饲料。饲喂第2周末,五子衍宗丸组给予五子衍宗丸药液16g/(kg·d)灌胃,空白组和模型组小鼠灌胃0.5ml生理盐水,共4周。卢卡斯快蓝染色观察各组小鼠脑组织髓鞘脱失情况并计算胼胝体区域平均积分光密度值;Western blot法检测脑组织中髓鞘碱性蛋白(MBP)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经胶质抗原2(NG2)、睫状神经营养因子(CNTF)蛋白表达水平。结果卢卡斯快蓝染色结果显示,模型组小鼠胼胝体区域蓝染颜色较正常组浅,且组织结构松散稀疏,呈现萎缩状态;而五子衍宗丸组蓝染颜色加深,组织结构较为致密,胼胝体结构较饱满。与空白组比较,模型组小鼠胼胝体区域平均积分光密度值明显减少,脑组织MBP、BDNF、GDNF、CNTF、NG2蛋白表达降低,GFAP蛋白升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,五子衍宗丸组小鼠胼胝体区域平均积分光密度值显著增加,脑组织MBP、BDNF、GDNF、CNTF、NG2蛋白表达升高,GFAP蛋白降低(P<0.05或P<0.01)。结论五子衍宗丸对脱髓鞘模型小鼠具有髓鞘保护作用,其作用机制可能与诱导星形胶质细胞分泌营养因子,进而促进少突胶质细胞增殖和分化有关。

五子衍宗丸对帕金森病小鼠的神经保护及抗炎作用

目的:探析五子衍宗丸对帕金森病(PD)小鼠的神经保护及抗炎作用。方法:24只C57BL/6雄性小鼠随机分为模型组和五子衍宗丸组,每组12只。腹腔注射MPTP建立小鼠PD模型,同时模型组灌胃0.9%氯化钠溶液,五子衍宗丸组灌胃五子衍宗丸溶液,持续2周。采用旷场和步态实验观察小鼠行为学表现;免疫组织化学染色观察中脑黑质TH阳性神经元;ELISA检测脑组织中细胞因子IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-10水平。结果:与模型组比较,五子衍宗丸组小鼠移动总距离及平均速度均显著增加(P<0.01),休息时间和脚步角度显著减少(P<0.05),自主活动量增多;形态学显示中脑黑质TH阳性细胞数显著增多(P<0.05);炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著降低(P<0.05,P<0.01),抗炎因子IL-10水平显著升高(P<0.01)。结论:五子衍宗丸可明显改善PD小鼠的行为学,保护黑质多巴胺能神经元,其作用机制可能与抑制脑内炎症反应有关。

五子衍宗丸对帕金森病小鼠行为学及氧化应激的影响

目的:观察五子衍宗丸对帕金森病(PD)小鼠行为学及氧化应激的影响。方法:C57BL/6雄鼠随机分为正常组、模型组和五子衍宗丸组,采用MPTP诱导建立小鼠PD模型(正常组除外),同时灌胃给予五子衍宗丸组药物干预,每天2次,持续14d。采用步态、爬杆及胶带移除实验评价小鼠运动功能。微量酶标法检测脑组织谷胱甘肽(GSH)含量;TBA法检测脑组织丙二醛(MDA)水平;Western Blot检测脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组步态脚掌接触面积显著增多(P<0.01),转头、爬杆及胶带移除时间均显著延长(P<0.01);脑组织GSH、CAT、SOD表达量均显著降低(P<0.01),MDA含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,五子衍宗丸组可显著减少步态脚掌接触面积(P<0.05),缩短转头、爬杆及胶带移除时间(P<0.05,P<0.01),显著增加GSH、CAT、SOD表达(P<0.01),降低MDA含量(P<0.01)。结论:五子衍宗丸可明显改善PD小鼠的运动功能,这可能与抑制氧化应激反应有关。

五子衍宗丸对神经管畸形细胞模型凋亡途径的影响

目的探讨五子衍宗丸防治神经管畸形(NTDs)的可能作用机制。方法 PC12细胞随机分为空白组、模型组及五子衍宗丸低、中、高剂量组。除空白组外,其余各组采用全反式维甲酸(atRA)干预PC12细胞构建NTDs模型。五子衍宗丸低、中、高剂量组分别给予含五子衍宗丸的RPMI-1640培养基并使其最终浓度分别为125、250、500μg/ml进行预处理,模型组和空白组加入RPMI-1640培养基。测定各组PC12细胞活力及细胞凋亡率,并提取空白组、模型组及经细胞活力、细胞凋亡率实验确定的最佳剂量五子衍宗丸组细胞总RNA测序,筛选差异表达基因,运用维恩图得到目的差异表达基因集,并进行GO功能和KEGG通路显著性富集分析,对与细胞凋亡相关的差异基因进行共表达网络分析。结果模型组PC12细胞活力显著下降,细胞凋亡率显著增加,五子衍宗丸各剂量组细胞活力增强、细胞凋亡率降低,且以五子衍宗丸低剂量组效果最佳(P<0.05或P<0.01)。目的差异表达基因集GO功能分析显著富集到内质网应激介导细胞凋亡相关和细胞增殖生长相关的GO条目,KEGG通路分析显著富集到细胞生长和死亡相关的信号通路。与模型组比较,五子衍宗丸低剂量组内质网应激相关基因Em1、Casp12、Creb3l1下调,抗凋亡基因Birc5上调,与模型组较空白组这些基因上下调方向正好相反。结论五子衍宗丸可抑制细胞凋亡,保护神经元样细胞,其机制与调控内质网应激相关的基因表达,与染色体分离、细胞核分裂、细胞周期等细胞增殖、生长和死亡等生物过程或信号通路相关。

补肾方药防治常见中枢神经系统炎性变性疾病研究进展

基于中医"肾脑相关"理论,补肾方药对中枢神经系统炎性变性疾病具有一定的治疗作用。近年来大量相关报道显示,补肾方药在对常见的中枢神经系统炎性变性疾病如阿尔茨海默病、帕金森病及多发性硬化的治疗中,以其毒小效长和标本兼治的独特优势,引起了广泛的关注。文章主要从复方、中药及其有效成分方面,梳理近年来补肾方药对这3种疾病的防治研究进展,为进一步开展系统而深入的实验研究,寻求潜在治疗靶点,为临床治疗提供实验依据。

补阳还五汤对双环己酮草酰二腙诱导脱髓鞘小鼠氧化应激的影响

目的:研究补阳还五汤对双环己酮草酰二腙(CPZ)诱导脱髓鞘小鼠氧化应激的影响。方法:C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组和补阳还五汤组。模型组和补阳还五汤组饲喂含0.2%CPZ的饲料造模,补阳还五汤组在造模2周后予以补阳还五汤灌胃,其他2组给予0.9%氯化钠溶液灌胃,共灌胃4周。采用高架十字迷宫实验观察各组小鼠行为学表现;MBP免疫荧光染色及LFB染色观察小鼠胼胝体髓鞘脱失情况;检测小鼠脑组织中SOD活性、GSH和MDA含量;Western Blot检测Nrf2和HO-1表达情况。结果:与正常组比较,模型组小鼠进入闭合臂的次数显著增多(P<0.05),在闭合臂的运动距离显著增加(P<0.01),胼胝体髓鞘脱失明显(P<0.01),脑组织中SOD活性和GSH含量显著降低(P<0.01)、MDA含量显著升高(P<0.01),Nrf2和HO-1表达显著下降(P<0.01);与模型组比较,补阳还五汤干预可显著减少小鼠进入闭合臂的次数及在闭合臂的运动距离(P<0.05),能够有效改善胼胝体髓鞘脱失(P<0.01,P<0.05),显著增加SOD活性和GSH含量(P<0.05),降低MDA含量(P<0.01),并上调Nrf2和HO-1表达(P<0.01)。结论:补阳还五汤对CPZ诱导的脱髓鞘小鼠具有神经保护作用,这可能与其激活Nrf2/HO-1通路发挥抗氧化作用有关。

五子衍宗丸对脱髓鞘模型炎症反应的抑制作用

目的:探究五子衍宗丸(WYP)对双环己酮草酰二腙(CPZ)诱导的脱髓鞘模型炎症反应的抑制作用。方法:27只SPF级C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组和WYP组,每组9只。模型组和WYP组饲喂含有0.2%CPZ的饲料,空白组饲喂正常饲料,共6周。于第2周末,WYP组给予WYP药液(16g·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,空白组和模型组灌胃等量0.9%氯化钠溶液,每日2次,共4周。卢卡斯快蓝染色观察各组脑组织脱髓鞘程度并计算平均积分光密度值。实时荧光定量PCR法检测脑组织白细胞介素(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子(TNF-α)的基因表达量。ELISA法检测脑组织IL-4的含量。结果:与空白组比较,模型组胼胝体蓝染着色浅,组织结构不致密。与模型组比较,WYP组胼胝体蓝染着色加深,组织结构相对紧密。与空白组比较,模型组平均积分光密度值显著降低(P<0.01),IL-6、IL-1β和TNF-α的基因表达量显著升高(P<0.01,P<0.05),IL-4的含量呈降低趋势。与模型组比较,WYP组平均积分光密度值显著升高(P<0.01),IL-6、TNF-α的基因表达量显著降低(P<0.01,P<0.05),IL-1β的基因表达量呈降低趋势,IL-4的含量呈升高趋势。结论:WYP对脱髓鞘模型小鼠有促进再髓鞘化的作用,其机制可能与降低炎症因子分泌进而改善炎性环境有关。