基于炎症反应探讨活血化瘀法防治动脉粥样硬化的策略

炎症反应是目前已知的动脉粥样硬化主要发病机制之一。中医基础理论认为血瘀是动脉粥样硬化的基本病机,活血化瘀法贯穿动脉粥样硬化治疗始终。综述动脉粥样硬化的发病机制、炎症反应与动脉粥样硬化的关系、现代医学对动脉粥样硬化的防治策略、中医学对动脉粥样硬化的认识、活血化瘀法防治动脉粥样硬化的研究进展,以期为动脉粥样硬化的临床防治提供新的研究思路。

基于“内皮损伤学说”探讨动脉粥样硬化的中医药防治策略

基于“动脉粥样硬化内皮损伤学说”,探讨在动脉粥样硬化(AS)疾病发生发展过程中,血管内皮功能障碍与血管内皮损伤的联系及区别。阐述血管内皮功能障碍与血管内皮损伤的概念,从血管内皮细胞分泌的一氧化氮/内皮素(NO/ET)稳态,诱发的炎症反应及氧化应激的角度和激活的VECF、MAKP、JAK/STAT、PI3K-AKT通路出发,探讨动脉粥样硬化疾病进程中二者的联系与区别。通过检索Genecards数据库,筛选血管内皮功能障碍、血管内皮损伤及AS的相关靶点,从分子角度进一步论证。阐明中药对血管内皮功能障碍及血管内皮损伤的保护及修复作用。

基于整合药理学与时空效应的防治动脉粥样硬化中药筛选研究

目的整合多数据库资源,结合动脉粥样硬化(AS)疾病时空效应的特点,针对性筛选有效中药,以更好地指导临床合理用药。方法通过TCMIP、GeneCards、OMIM数据库获取AS及时空效应表型的相关靶点;基于上述靶点,通过TCMIP数据库“整合药理学分析工具集合”的“反向查找中药”功能,筛选血管内皮功能障碍(VED)、血管内皮损伤(VEI)、粥样斑块形成(PF)3个时间阶段及骨髓微环境(BMM)空间过程的防治中药;通过String、WebGestalt数据库对AS时空效应防治中药进行蛋白互作及GO、KEGG富集分析;通过R语言构建弦图与热图,对有效中药-时空效应进行关联性、差异性及最佳用药配伍聚焦。结果收集AS-VED、AS-VEI、AS-PF、AS-BMM共同靶点分别为924、935、885、1024个;反向查找中药结果显示,高良姜、漏芦、葛根、降香等可预防早期VED,牡荆叶、茜草、高良姜、漏芦等可治疗中期VEI,吴茱萸、急性子、葛根、降香等可消退晚期PF,皂角刺、香加皮、益母草、三棱、瓜蒌等在BMM中发挥作用,其作用机制可能与激活Rap1、Hippo、MAPK、Toll-like、TNF、AMPK、PI3K-AKT、NF-κB等多信号通路,调控AKT1、IL-6、INS、TNF、NR3C1、PPARG、PTGS2等多靶点,以“多药物-多靶点-多通路”模式在防治AS进程中发挥作用有关。结论本研究筛选出针对特异时间阶段与空间过程的中药,实现了微观层次上的辨证论治,为中医药防治AS提供了针对性的中药及靶点和通路的可能,为中医药辅助干细胞疗法提供思路。

补阳还五汤苷类组分介导NF-κB通路抗动脉粥样硬化炎症反应的机制研究

探讨补阳还五汤苷类组分调节核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路对载脂蛋白E^(-/-)(apolipoprotein E^(-/-),ApoE^(-/-))小鼠及RAW264.7细胞炎症反应的影响。体内实验,采用高脂饲料连续喂养ApoE^(-/-)小鼠12周,建立动脉粥样硬化动物模型,75μg·mL-1氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein, Ox-LDL)孵育RAW264.7细胞24 h建立动脉粥样硬化细胞模型,利用全自动生化分析仪、苏木素-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色、酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)、Western blot及droplets digital PCR方法,检测血脂水平、主动脉内膜厚度、炎症因子含量及NF-κB通路相关蛋白及mRNA表达水平,评价动脉粥样硬化病变情况、药物抗动脉粥样硬化作用机制。结果表明,ApoE^(-/-)小鼠高脂饲料连续喂养12周后成功建立动脉粥样硬化模型。与对照组比较,模型组小鼠血浆中总胆固醇(total cholesterol, TC)、甘油三酯(triglyceride, TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol, LDL-C)含量显著升高,血管内膜增厚,炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)含量增加,NF-κB及IκBα蛋白及mRNA表达显著增加;与模型组相比,补阳还五汤苷类组分高剂量组显著降低小鼠血浆中TC、TG、LDL-C含量,减轻斑块面积和厚度,减少炎症因子TNF-α的含量,抑制NF-κB、IκBα蛋白及mRNA表达,且作用与补阳还五汤一致。体外实验,采用75μg·mL^(-1)Ox-LDL刺激RAW264.7细胞24 h成功建立泡沫细胞模型。与对照组相比,模型组细胞NF-κB的入核量、IκBα蛋白及相关mRNA的表达增加;与模型组比较,补阳还五汤苷类组分中、高剂量组减少NF-κB的入核量、IκBα蛋白及相关mRNA的表达。以上结果表明,苷类组分是补阳还五汤抗动脉粥样硬化的主要有效成分,可抑制NF-κB通路,减轻炎症反应,发挥母方补阳还五汤同效的抗动脉粥样硬化炎症反应的作用。

补阳还五汤苷类组分调控动脉粥样硬化炎性反应及脂质代谢的作用机制

目的采用网络药理学结合体外实验验证的方法,探讨补阳还五汤苷类组分治疗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的作用机制。方法采用网络药理学方法对补阳还五汤苷类组分与阿托伐他汀治疗AS的靶点和通路进行预测;SD大鼠随机分为对照组、补阳还五汤(10.8 g/kg)组、苷类组分(0.64 g/kg)组和阿托伐他汀(0.9 mg/kg)组,各给药组ig相应药物,2次/d,连续7次,制备空白血清、补阳还五汤血清、苷类组分血清及阿托伐他汀血清。采用试剂盒考察含药血清对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7脂质含量的影响;采用油红O染色考察含药血清对ox-LDL诱导的RAW264.7细胞泡沫细胞形成率的影响;采用ELISA试剂盒观察含药血清对ox-LDL诱导的RAW264.7细胞上清液肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平的影响;采用Western blotting考察含药血清对ox-LDL诱导的RAW264.7细胞Janus蛋白酪氨酸激酶2(Janus kinase-2,JAK2)、磷酸化JAK2(p-JAK2)、信号转导和转录激活因子3(signaltransducer and activator of transcription 3,STAT3)和p-STAT3蛋白表达的影响;采用qRT-PCR考察含药血清对ox-LDL诱导的RAW264.7细胞JAK2和STAT3 mRNA表达的影响。结果与模型组比较,各给药组细胞内脂质沉积减少,RAW264.7细胞吞噬脂质受到抑制,泡沫化细胞数量减少,上清液中TNF-α和IL-6水平显著降低(P<0.01),细胞内总胆固醇(total cholesterol,TC)、游离胆固醇(free cholesterol,FC)和胆固醇酯(cholesteryl ester,CE)含量显著减少(P<0.01),JAK2/STAT3通路相关蛋白及m RNA表达水平显著降低(P<0.01)。结论补阳还五汤苷类组分是治疗AS的主要药效物质,其作用机制可能与降低细胞内脂质沉积、抑制JAK2/STAT3信号通路、抑制炎性因子分泌有关。