甲硫脑啡肽对脂多糖作用下奶牛子宫内膜上皮细胞增殖的影响

为探究甲硫脑啡肽(methionine enkephalin,MENK)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞(BEEC)增殖的影响,利用CCK-8检测细胞增殖活性变化,荧光定量PCR检测细胞增殖相关基因(EGFR、VEGF、TGF-β3、FGF-2)表达,蛋白免疫印迹法检测Wnt/β-catenin通路关键因子、c-Myc和Cyclin D1表达。结果显示,LPS单独作用时,细胞活性增强(P<0.05),细胞增殖相关基因表达升高(P<0.05),β-catenin、c-Myc、Cyclin D1表达升高(P<0.05)。MENK能显著抑制LPS诱导的细胞活性(P<0.05)、细胞增殖相关因子及Wnt/β-catenin通路关键蛋白的表达(P<0.05);非选择性阿片受体拮抗剂纳洛酮可阻断MENK对细胞活性、细胞增殖相关因子和通路的抑制效应。MENK可抑制LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞的增殖作用,该机制很可能由阿片受体介导。

皮质醇对LPS损伤的奶牛子宫内膜上皮细胞修复机制的影响

为了探索在奶牛子宫内膜上皮细胞(bovine endometrial epithelial cells,BEECs)发生炎性损伤时皮质醇对其修复方面的影响,本研究通过不同质量浓度的皮质醇(5,15,30μg/L)与脂多糖(LPS)共处理原代奶牛子宫内膜上皮细胞,利用荧光定量PCR法检测生长因子TGF-β1、TGF-β3、VEGF和CTGF mRNA的表达情况,用Western blot法检测Wnt/β-catenin和PI3K/AKT信号通路关键蛋白的表达变化。结果显示,皮质醇能够抑制BEECs由LPS诱导引起的TGF-β1、TGF-β3和CTGF mRNA表达水平的上升,同时对其VEGF mRNA的表达有一定的促进作用(P<0.05)。皮质醇降低LPS诱导的β-catenin、C-Myc和CyclinD1蛋白表达水平的上升,同时也抑制LPS导致的PI3K和AKT蛋白磷酸化水平的上升(P<0.05)。结果表明,皮质醇能够抑制LPS激活的Wnt/β-catenin和PI3K/AKT通路,以及LPS诱导的生长因子TGF-β1、TGF-β3和CTGF的转录,这对了解皮质醇对LPS所致奶牛子宫内膜上皮细胞损伤的修复机制奠定了理论基础。