HPLC法检测兔胫骨及骨髓中的左氧氟沙星

目的:建立反相高效液相色谱仪(high performance liquid chromatography,HPLC)检测兔胫骨及骨髓中左氧氟沙星的方法,用于评价纳米微球载左氧氟沙星可控降解骨修复材料中的左氧氟沙星在兔局部骨组织及骨髓中的缓释特点。方法:分别将不同浓度左氧氟沙星加入空白胫骨、骨髓,以环丙沙星作为内标,采用Sepax BR-C18(250 mm×4.6 mm 5μm)色谱柱,流动相为:0.01 mol/L磷酸二氢钾—甲醇—0.5 mol/L四丁基溴化铵(75∶25∶4),流速:1.0 ml/min,柱温:40℃,紫外检测波长290 nm。评价指标为:专属性、检测线、定量线、回收率、稳定性、精密度。结果:当胫骨中的左氧氟沙星浓度在0.05μg/ml^300μg/ml范围内线性关系良好(r=0.999);低、中、高3个浓度的方法回收率分别为(108.81±1.14)%、(96.85±3.64)%、(114.38±0.27)%;提取回收率分别为(110.92±0.42)%、(110.48±0.97)%、(80.39±0.08)%;日内精密度的RSD分别为1.30%、0.23%、5.51%;日间精密度的RSD分别为:7.09%、3.71%、2.55%,样品稳定性良好。骨髓中的左氧氟沙星浓度在0.01μg/ml^300μg/ml范围内线性关系良好(r=0.999);低、中、高3个浓度的方法回收率分别为(91.67±3.73)%、(101.77±0.26)%、(87.72±0.72)%;提取回收率分别为(102.97±0.81)%、(87.00±0.62)%、(99.97±1.15)%;日内精密度的RSD分别为1.49%、1.06%、0.11%;日间精密度的RSD分别为:5.61%、2.56%、2.37%,样品稳定性良好。结论:本方法操作简便、灵敏、稳定、回收率高,适用于检测新型载药骨修复材料中的左氧氟沙星在兔局部骨组织中的分布。

抑制Runx2的表达增强BMP2诱导的干细胞成软骨分化

目的:利用腺病毒介导RNA干扰抑制成骨分化关键转录调控因子Runx2(Runt-related transcription factor 2)的表达,研究其对骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)诱导间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成软骨分化的影响,并初步探讨相关机制。方法:利用腺病毒Ad-GFP、Ad-BMP2、Ad-SiRunx2感染C3H10T1/2细胞;共分4组:GFP组、BMP2组、BMP2+SiRunx2组和SiRunx2组。Alcian blue染色检测各组软骨细胞基质糖胺聚糖分泌;RTPCR检测Runx2、早期成软骨标志物(Col2a1)、蛋白聚糖(Aggrecan)及晚期成软骨标志物(Col10a1)mRNA表达水平;Western blot检测目的蛋白BMP2、Ⅱ型胶原(Col2a1)及X型胶原(Col10a1)的蛋白表达。结果:在BMP2诱导C3H10T1/2细胞成软骨分化过程中,下调Runx2的表达可以增强Col2a1、Aggrecan及软骨细胞外基质糖胺聚糖的合成,抑制Col10a1的合成。结论:下调Runx2表达可以增强BMP2诱导间充质干细胞成软骨分化能力,并抑制软骨细胞的成熟和肥大。