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CRISPR/Cas9介导的基因组定点编辑技术
被引量:
76
1
作者
方锐
畅飞
+2 位作者
孙照霖
李宁
孟庆勇
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2013年第8期691-702,共12页
Clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)/CRISPR-associated(Cas)9系统成功被改造为第三代人工核酸内切酶,与锌指核酸内切酶(zinc finger endonuclease,ZFN)和类转录激活因子效应物核酸酶(transcription ac...
Clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)/CRISPR-associated(Cas)9系统成功被改造为第三代人工核酸内切酶,与锌指核酸内切酶(zinc finger endonuclease,ZFN)和类转录激活因子效应物核酸酶(transcription activator-likeeffector nuclease,TALEN)一样可用于各种复杂基因组的编辑.目前该技术成功应用于人类细胞、斑马鱼和小鼠以及细菌的基因组精确修饰,修饰类型包括基因定点InDel突变、基因定点敲入、两位点同时突变和小片段的缺失.由于其突变效率高、制作简单及成本低的特点,被认为是一种具有广阔应用前景的基因组定点改造分子工具.本文从CRISPR/Cas的研究历史、分类、作用机理以及基因定点修饰应用等方面进行简单介绍,希望能够为在这一领域的科研工作者提供参考.
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关键词
人工核酸内切酶
基因编辑
CRISPR
基因打靶
CRISPR
CAS
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职称材料
牛的基因编辑技术研究进展
被引量:
2
2
作者
汤波
孙照霖
戴蕴平
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第5期41-47,共7页
基因编辑技术是对基因组进行定点修饰的一种新兴生物技术,主要包括锌指核酸酶(ZFNs)技术、转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)技术以及最新的CRISPR/Cas9技术,正在动植物育种、生物制药、基因治疗等方面发挥前所未有的影响力。本文总...
基因编辑技术是对基因组进行定点修饰的一种新兴生物技术,主要包括锌指核酸酶(ZFNs)技术、转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)技术以及最新的CRISPR/Cas9技术,正在动植物育种、生物制药、基因治疗等方面发挥前所未有的影响力。本文总结了基因打靶技术及各种基因编辑技术的发展简史,重点介绍了基因编辑技术在抗病、改善奶品质、提高瘦肉率和去角等牛新品种培育领域的研究进展。最后提出建立基因编辑农业动物监管体系的建议,以期加快我国基因工程动物产业化。
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关键词
基因编辑技术
ZFNs
TALENs
Cas9
牛品质改良
基因编辑生物的监管政策
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职称材料
靶向DNA连接酶Ⅳ小分子抑制剂SCR7提升CHO-K1细胞定点整合效率研究
被引量:
1
3
作者
王传杰
孙照霖
+2 位作者
沈倍奋
王晶
冯健男
《军事医学》
CAS
CSCD
2023年第3期175-181,195,共8页
目的应用DNA连接酶Ⅳ(Lig4)的小分子抑制剂SCR7处理中华仓鼠卵巢(CHO)-K1细胞,验证其能否提高CHO-K1细胞中由CRISPR/Cas9介导的外源基因在ROSA26安全位点的定点整合效率。方法构建靶向CHO-K1细胞ROSA26位点的特异性pX330-sgRNA-ROSA26...
目的应用DNA连接酶Ⅳ(Lig4)的小分子抑制剂SCR7处理中华仓鼠卵巢(CHO)-K1细胞,验证其能否提高CHO-K1细胞中由CRISPR/Cas9介导的外源基因在ROSA26安全位点的定点整合效率。方法构建靶向CHO-K1细胞ROSA26位点的特异性pX330-sgRNA-ROSA26质粒以及带启动子失活的GFP报告基因同源打靶载体,摸索并确定SCR7在CHO-K1细胞内作用的适宜浓度及处理时间,通过流式细胞术检测SCR7对CHO-K1细胞定点整合效率,同时评价剂量范围内SCR7对细胞凋亡的影响。结果在CHO-K1细胞中成功构建靶向ROSA26位点的GFP报告系统,该系统可用于验证CRISPR/Cas9介导的定点整合效率;确定了SCR7对CHO-K1细胞作用的合适剂量和处理时间,在该条件下SCR7对CHO-K1细胞无明显细胞毒性;证实了SCR7在剂量范围内能有效提升外源基因在CHO-K1细胞ROSA26位点的整合效率,且对细胞凋亡无明显影响。结论SCR7能提升CHO-K1细胞定点整合效率,该发现为应用Lig4小分子抑制剂构建具备高效表达外源基因的重组CHO细胞系奠定了基础。
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关键词
中华仓鼠卵巢细胞
DNA连接酶Ⅳ
SCR7
同源重组
CRISPR/Cas9
定点整合
原文传递
题名
CRISPR/Cas9介导的基因组定点编辑技术
被引量:
76
1
作者
方锐
畅飞
孙照霖
李宁
孟庆勇
机构
中国农业大学农业生物技术国家重点
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2013年第8期691-702,共12页
基金
现代农业产业技术体系建设专项资助项目(CARS-37)~~
文摘
Clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)/CRISPR-associated(Cas)9系统成功被改造为第三代人工核酸内切酶,与锌指核酸内切酶(zinc finger endonuclease,ZFN)和类转录激活因子效应物核酸酶(transcription activator-likeeffector nuclease,TALEN)一样可用于各种复杂基因组的编辑.目前该技术成功应用于人类细胞、斑马鱼和小鼠以及细菌的基因组精确修饰,修饰类型包括基因定点InDel突变、基因定点敲入、两位点同时突变和小片段的缺失.由于其突变效率高、制作简单及成本低的特点,被认为是一种具有广阔应用前景的基因组定点改造分子工具.本文从CRISPR/Cas的研究历史、分类、作用机理以及基因定点修饰应用等方面进行简单介绍,希望能够为在这一领域的科研工作者提供参考.
关键词
人工核酸内切酶
基因编辑
CRISPR
基因打靶
CRISPR
CAS
Keywords
CRISPR/Cas9, gene targeting, genome editing technology, engineered endonuclease
分类号
Q7 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
牛的基因编辑技术研究进展
被引量:
2
2
作者
汤波
孙照霖
戴蕴平
机构
中国农业大学生物学院
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第5期41-47,共7页
基金
国家转基因生物新品种培育重大专项(2018ZX08007-001)
文摘
基因编辑技术是对基因组进行定点修饰的一种新兴生物技术,主要包括锌指核酸酶(ZFNs)技术、转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)技术以及最新的CRISPR/Cas9技术,正在动植物育种、生物制药、基因治疗等方面发挥前所未有的影响力。本文总结了基因打靶技术及各种基因编辑技术的发展简史,重点介绍了基因编辑技术在抗病、改善奶品质、提高瘦肉率和去角等牛新品种培育领域的研究进展。最后提出建立基因编辑农业动物监管体系的建议,以期加快我国基因工程动物产业化。
关键词
基因编辑技术
ZFNs
TALENs
Cas9
牛品质改良
基因编辑生物的监管政策
Keywords
gene editing technology
ZFNs
TALENs
Cas9
cow genetic improvement
gene editing biology regulatory policy
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
靶向DNA连接酶Ⅳ小分子抑制剂SCR7提升CHO-K1细胞定点整合效率研究
被引量:
1
3
作者
王传杰
孙照霖
沈倍奋
王晶
冯健男
机构
军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所
出处
《军事医学》
CAS
CSCD
2023年第3期175-181,195,共8页
基金
北京市自然科学基金(7222262)
国家自然科学基金(31900676)。
文摘
目的应用DNA连接酶Ⅳ(Lig4)的小分子抑制剂SCR7处理中华仓鼠卵巢(CHO)-K1细胞,验证其能否提高CHO-K1细胞中由CRISPR/Cas9介导的外源基因在ROSA26安全位点的定点整合效率。方法构建靶向CHO-K1细胞ROSA26位点的特异性pX330-sgRNA-ROSA26质粒以及带启动子失活的GFP报告基因同源打靶载体,摸索并确定SCR7在CHO-K1细胞内作用的适宜浓度及处理时间,通过流式细胞术检测SCR7对CHO-K1细胞定点整合效率,同时评价剂量范围内SCR7对细胞凋亡的影响。结果在CHO-K1细胞中成功构建靶向ROSA26位点的GFP报告系统,该系统可用于验证CRISPR/Cas9介导的定点整合效率;确定了SCR7对CHO-K1细胞作用的合适剂量和处理时间,在该条件下SCR7对CHO-K1细胞无明显细胞毒性;证实了SCR7在剂量范围内能有效提升外源基因在CHO-K1细胞ROSA26位点的整合效率,且对细胞凋亡无明显影响。结论SCR7能提升CHO-K1细胞定点整合效率,该发现为应用Lig4小分子抑制剂构建具备高效表达外源基因的重组CHO细胞系奠定了基础。
关键词
中华仓鼠卵巢细胞
DNA连接酶Ⅳ
SCR7
同源重组
CRISPR/Cas9
定点整合
Keywords
Chinese hamster ovary cells
DNA ligaseⅣ
SCR7
homologous recombination
CRISPR/Cas9
site specific integration
分类号
Q523 [生物学—生物化学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
CRISPR/Cas9介导的基因组定点编辑技术
方锐
畅飞
孙照霖
李宁
孟庆勇
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2013
76
下载PDF
职称材料
2
牛的基因编辑技术研究进展
汤波
孙照霖
戴蕴平
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
2
下载PDF
职称材料
3
靶向DNA连接酶Ⅳ小分子抑制剂SCR7提升CHO-K1细胞定点整合效率研究
王传杰
孙照霖
沈倍奋
王晶
冯健男
《军事医学》
CAS
CSCD
2023
1
原文传递
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