油菜BnJAZ7通过调控抗氧化途径促进核盘菌侵染

【目的】由核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)引起的油菜菌核病是危害油菜生产的第一大病害。通过分子克隆获得甘蓝型油菜BnJAZ7,利用生物信息学、细胞生物学以及分子生物学手段,明确甘蓝型油菜BnJAZ7的表达特征及其在核盘菌侵染过程中的作用,为油菜抗菌核病分子育种打下理论基础。【方法】利用分子克隆技术扩增BnJAZ7全长,并分析其生物信息学特征,利用MEGA X构建BnJAZ7的亲缘关系树。利用实时荧光定量PCR技术测定BnJAZ7在油菜中的组织表达以及核盘菌侵染过程中的表达特征;构建BnJAZ7与GFP的融合表达载体,在激光共聚焦显微镜下观察融合蛋白的亚细胞定位。在本氏烟叶片中瞬时表达融合蛋白,并接种核盘菌,分析BnJAZ7的表达对核盘菌侵染的影响。构建BnJAZ7-OE过表达转基因油菜,在其T2代叶片上接种核盘菌,观察其对核盘菌侵染的影响。利用生化技术检测核盘菌侵染BnJAZ7-OE后抗氧化酶SOD、POD、CAT以及PAL活性;通过实时荧光定量PCR技术分析核盘菌侵染BnJAZ7-OE油菜后相关基因BnSOD、BnPOD、BnPAL和BnCAT的转录水平。【结果】BnJAZ7全长801 bp,编码266个氨基酸,由TIFY和CCT_2两个结构域组成,分子式为C_(1244)H_(2000)N_(358)O_(384)S_(13),等电点为9.57,理论分子量为28.53 kDa,不具跨膜结构域。BnJAZ7与油菜TIFY 7的亲缘关系最近,在油菜茎中表达量最高,并且核盘菌侵染后6、12、24、48 h其表达量持续上升。亚细胞定位显示eGFP:BnJAZ7定位于细胞膜和细胞核。在本氏烟叶片中异源瞬时表达eGFP:BnJAZ7促进核盘菌侵染;BnJAZ7过表达的BnJAZ7-OE转基因油菜也促进核盘菌侵染。核盘菌在BnJAZ7-OE植株中侵染后显著降低了BnPOD、BnSOD和BnPAL的转录水平,显著增加了BnCAT的转录水平,从而降低POD、SOD和PAL活性,增加CAT活性。【结论】甘蓝型油菜BnJAZ7的表达受到核盘菌侵染诱导,且BnJAZ7过表达显著加快了核盘菌的侵染速度。核盘菌通过诱导BnJAZ7上升后降低抗氧化酶编码基因BnPOD、BnSOD和BnPAL转录水平、增加BnCAT转录水平,从而调控抗氧化酶活性来进一步加快侵染。

基于SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术检测烟草靶斑病发病菌量

本研究根据烟草靶斑病菌(Rhizoctonia solani)与烟草赤星病菌(Alternaria alternata)、烟草棒孢霉叶斑病菌(Corynespora cassiicola)等田间常见烟草叶部病害病原菌的rDNA-ITS(ribosomal DNA Internal Transcribed Spacers,rDNA-ITS)序列差异位点,设计一对特异性检测引物RSW1F/RSW2R,建立烟草靶斑病菌实时荧光定量PCR(Real time fluorescence quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-qPCR)快速准确检测体系,并分析烟草靶斑病最低发病菌量.结果表明,设计的引物特异性良好,灵敏度达到1×10^(-3) ng/μL.利用已获得的实时荧光定量PCR体系计算得出引起烟草靶斑病发病的最低菌量为12.03 pg/μL.此外,对重庆龚滩地区烟叶中烟草靶斑病菌含量进行计算,发现土壤以及周边杂草可能为该地区烟草靶斑病菌的侵染来源,并进一步确定该地区预防烟草靶斑病的最佳时期为5月15日至6月15日,为烟草靶斑病菌的田间预警预报及流行提供理论依据.

植物保护专业实践教学体系的创新与实践

该文分析了植物保护专业实践教学体系在新形势下改革创新的必要性,总结了植物保护专业实践教学体系改革创新的主要措施及其效果.

不同叶面免疫诱抗剂对烟草生长和抗性的影响

为明确施用不同叶面免疫诱抗药剂对烟草抗性和生长的影响,在重庆市奉节县基地开展田间小区试验,探究在烟草生长期施用不同叶面免疫诱抗药剂对烟草生长和抗性的影响.结果表明:在烟草生长中期,喷施生物诱抗药剂智能聪(ZNC)和化学诱抗剂氯吲哚酰肼(CHI),会显著降低烟草病毒病、烟草野火病和烟草赤星病的发病率,而且ZNC和CHI对生长有一定的促进作用,同时CHI还可显著提高烟叶的质量与产值.当喷施济农有机肥时,能显著促进株高和叶面积对烟株有明显的促生长作用,并且显著提高了烟叶的产量与收益.

柑橘碎叶病毒研究进展

起源于我国的柑橘碎叶病是严重危害柑橘的一种重要柑橘病毒病,国内外关于柑橘碎叶病毒的研究对于控制该病害起到了重要的作用。概述了国内外关于柑橘碎叶病毒的生物学、分子生物学、病毒的株系和控制方面的研究进展,尤其是对近些年用分子生物学方法研究病毒的基因组和株系序列差异方面的情况作了详细的介绍。并对柑橘碎叶病毒研究仍未解决的问题和进一步深入研究的内容进行了分析探讨。

大麦条纹花叶病毒北京分离物的鉴定

采集北京田间的大麦感病叶片,室内分离病原,血清学检测能够与BSMV新疆株抗血清反应,室内汁液摩擦接种可侵染大麦、小麦、本明烟和苋色藜,能够种子传毒,电镜观察病毒粒子为杆状,同时,国内首次利用RT-PCR扩增出597bp的BSMV外壳蛋白基因.根据以上结果确定分离到的病毒为大麦条纹花叶病毒,其寄主范围和种子带毒率与新疆株系有差别,可能属于不同株系.

3.85%病毒必克防治辣椒病毒病

室内生物测定表明 :3 85 %病毒必克水乳剂对黄瓜花叶病毒接种前施药的预防效果为 79 97% ,接种后施药的防治效果为 74 93% ,均明显高于对照药剂 1 5 %植病灵和 2 0 %病毒A。小区药剂对比试验 ,3 85 %病毒必克 5 0 0倍液喷药 ,对辣椒病毒病的防治效果达 78 1%。

中国华北地区黄顶菊杂草上的3种新病害及病原菌鉴定

黄顶菊(Flanueria bidentis)是近年来入侵我国的一种恶性杂草.该研究对我国华北地区黄顶菊上的病害进行了调查,分离鉴定了黄顶菊3种主要真菌病害的病原,并通过致病性测定分析了它们在黄顶菊生物控制中的应用潜力.调查表明在黄顶菊不同生育期都有病害发生,但多数病害种类主要集中在成株期以后.按照柯赫氏证病律接种测试及分离纯化获得的真菌形态特征观察鉴定,黄顶菊褐斑病的病原菌为细极链格孢(Alternaria tenuissima),炭疽病病原菌为一种刺盘孢(Colletotrichum sp.),而白粉病的病原菌为瓜单丝壳(Podosphaera xanthii).田间观察发现有的病害在适宜的生境中发病较重,可显著抑制黄顶菊植株生长发育;温室致病性试验结果表明,这3种病原菌真菌对黄顶菊都有较强的致病性,其中白粉菌的致病性最强.研究结果显示,这些病原菌在黄顶菊的生物防治中可能具有较好的应用潜力,今后需要分别对它们作进一步系统的研究.

大麦条纹花叶病毒中国株CP基因克隆分析、原核表达及抗血清制备

首次用PCR方法，自大麦条纹花叶病毒中国株（BSMV-CH）的RNA2（GenBank登录号为：AY789694，未报道）中扩增出外壳蛋白（coat protein，CP）基因，并亚克隆到pMD18-T载体上进行测序分析。结果表明BSMV—CH的CP全长597bp，它与BSMV其它株系CP的核苷酸同源性和氨基酸同源性分别为93．1％～93．8％和91．4％-92．4％；与同属的早熟禾半潜病毒（PSLV）和剪秋罗环斑病毒（LRSV）的核苷酸同源性分别为53．0％和41．8％，氨基酸同源性分别为48．1％和40．0％。根据大麦病毒属病毒已经报道的CP氨基酸序列绘制系统发育树，分析表明分离的各毒株在进化上存在明显地理位置的相关性。把CP基因亚克隆到GST融合表达载体pEGX-6p-1上，优化IFFG诱导终浓度后，在37℃ IFFG终浓度为1．0mmol/L时，融合蛋白GST-CP在大肠杆菌BL21中得到了特异表达。12％SDS—PAGE表明，表达产物大小为48．5kDa，主要以包含体形式存在。对蛋白进行定量后，用冰冷的KCl显色，分离表达的蛋白质特异条带制备抗原，免疫家兔得到抗血清，酶联法（enzyme-linked immunosorbant assay，ELISA）测定的抗血清效价为1／6400。用抗血清对感病大麦和健康大麦进行检测，结果表明抗血清有很高特异性。

应用3.85%病毒必克防治番茄病毒病

室内生物学测定表明 ,3 85 %病毒必克可湿性粉剂接种前施药 ,对黄瓜花叶病毒的抑制作用明显高于对照药剂 ,防效达 86 7% ,接种后施药抑制效果依然显著 ,达到 78 5 7%。小区药剂对比试验 ,3 85 %病毒必克可湿性粉剂 5 0 0倍液喷雾 ,对番茄病毒病的防治效果达 76 5 %。

不同剪叶次数对“K326”烟株生长及抗性的影响

为了探究重庆市烟区不同烟苗剪叶次数对移栽前烟苗的影响,以及移栽后对烟株生长和抗性的影响,本研究以烤烟品种“K326”为材料,开展了不同剪叶次数对烟叶后期生长和抗性的影响分析.室内及田间试验结果表明,剪叶处理能够激活烟苗的植物超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性,使抗性相关基因ERF,GST,Oxidea和Pr1上调表达,并且在苗期能够促进根长、干物质的积累和减少烟草赤星病、烟草野火病的发生,当剪叶次数为2次时,效果最为显著,因此在生产上剪叶2次,其经济效益最佳.

大麦条纹花叶病毒诱导大麦cDNA文库的构建

构建病毒诱导的寄主植物cDNA文库是利用酵母双杂交方法筛选与病毒相互作用寄主因子的前提条件.该文以大麦条纹花叶病毒接种大麦,在ELISA跟踪检测的病毒复制和运动初期,采集大麦叶片,用TRIZOL法提取总RNA,利用SMART原理进行反转录PCR获得dscDNA,SfiⅠ/XhoⅠ共切后1.1%琼脂糖凝胶检测并分段回收dscDNA,分别与SfiⅠ/XhoⅠ共切的载体连接后,共同转化X-blue感受态细胞构建文库.文库的容量和质量检测结果表明:文库的容量为1.27×106,插入片段大于500 bp,集中在1.2 kb左右,符合酵母双杂交筛选文库的要求.

《植物检疫》课程教学改革对学生专业素质拓展的探索

专业素质是大学生素质结构中的核心素质元素。教学过程中拓展学生的专业素质是专业课的重要内容。根据《植物检疫》课程的特点,在教学过程中尝试运用新的教学模式,让学生参与课程建设、课堂教学、教学实践和课程考核,从不同方面扩大学生的专业知识,提高专业能力,拓展学生的专业素质,达到专业课传授知识、培养能力、提高素质的教学目的。

普通烟草铁氧还蛋白Ⅰ的原核表达、抗体制备及在ToMV侵染烟草体内表达分析

【目的】构建普通烟草铁氧还蛋白I(ferredoxin I,Fdn-Ⅰ)原核表达载体,表达可溶性Fdn-Ⅰ蛋白,并制备其多克隆抗体,分析Fdn-Ⅰ在ToMV侵染烟草叶片内的表达情况。【方法】以Fdn-Ⅰ全长cDNA为模板,用PCR扩增Fdn-Ⅰ,克隆至原核表达载体pEGX-6p-1,构建Fdn-Ⅰ与GST融合表达载体pEGX-Fdn-Ⅰ,重组质粒转化原核表达菌株BL21,优化GST-Fdn-Ⅰ可溶性表达条件后大量表达蛋白,用GST亲和层析法纯化获得可溶性GST-Fdn-Ⅰ蛋白,免疫家兔制备多克隆抗体。ELISA测定抗体效价,Western印迹法检测抗体的特异性和ToMV侵染前后烟草叶片内Fdn-Ⅰ的表达情况。【结果】在温度为28℃,IPTG诱导浓度为0.3mmol·L-1条件下表达出大小为41.3kD的可溶性融合蛋白。纯化获得约4mg可溶性蛋白,免疫家兔制备了效价为1/6400的多克隆抗体。Western印迹结果表明,该抗体可以与Fdn-Ⅰ的原核和酵母表达产物特异性结合。分析表明Fdn-Ⅰ在ToMV侵染后烟草叶片内含量明显低于其在健康烟草叶片内的含量。【结论】通过Fdn-Ⅰ大肠杆菌中的可溶性表达,制备获得了其高效价特异性多克隆抗体,利用该抗体检测表明ToMV侵染烟草降低了Fdn-Ⅰ的表达。

烟草角斑病的发生及防治研究

烟草角斑病是一种常见于烟田中的细菌性病害,一旦发生,严重影响烟草产量.本研究介绍了烟草角斑病的病原菌的生物学特征和侵染规律,探究控制病害的有效方法.通过研究该病在田间发病因素以及发病规律的影响因素,更好地了解其传播方式和危害程度,从而制订相应高效的防治措施.最终提出预测发病趋势并提前做好防病准备是预防该病的最佳策略之一,可以结合气候变化、流行规律以及病害历史数据等,开展综合分析与研究,从而有效地控制该病的发生.

西南大学学生对重庆柑橘非疫区认识程度调查

针对重庆市政府对柑橘非疫区的宣传效果,了解西南大学(以下简称"我校")学生对柑橘非疫区了解程度,为柑橘非疫区建设采取措施提供初步依据和建设性意见,并在调查的同时做进一步宣传。采用问卷调查,经统计分析,得出在我校被调查的571名学生中,只有21.37%的人曾听说过柑橘非疫区,而听说过的人当中有55.83%的同学认为政府对柑橘非疫区的宣传力度不够,但大部分表示如果条件允许愿意加入柑橘非疫区的宣传中。调查显示我校学生对柑橘非疫区了解甚少,政府需采取措施加大对大学生的宣传力度,促进重庆柑橘非疫区的建设。

大麦条纹花叶病毒中国株基因组RNA1的全长序列分析

【目的】获得大麦条纹花叶病毒中国株(BSMV-CH)基因组RNA1的全长cDNA,进行序列分析,明确与国外报道株系间的亲缘关系和分类地位【。方法】以自然侵染BSMV-CH的大麦叶片中提取的总RNA为模板,用RT-PCR方法获得BSMV-CH RNA1的全长cDNA,克隆到载体pMD18并测序,用DNAstar软件将获得的序列与GenBank登录的BSMVRNA1序列进行对比,分析各株系序列RNA1之间的同源性,构建系统发育树分析BSMV-CH与国外株系间的亲缘关系。【结果】BSMV-CH的RNA1全长为3795bp(GenBank注册号:AY789693),基因组RNA15′端有一个甲基化的帽子结构,3′端有一个PolyA结构和一段239bp长的类似tRNA的保守序列,BSMV-CH基因组RNA1含有一个长度为3417bp的ORF,推测可编码一个1138个氨基酸的复制酶基因。BSMV-CH的基因组RNA1与国外报道其它株系核苷酸的同源性为95.4%～95.6%。复制酶基因同其它株系核苷酸和氨基酸的同源性分别为94.9%～95.2%和96.5%～96.8%,PolyA的长度比其它株系明显要长。【结论】BSMV-CH和CV42与CV17、ND18、TSE及TSG间的亲缘关系明显低于CV17、ND18、TSG和TSE间的亲缘关系;BSMV-CH与CV42表现相对较近的亲缘关系,但BSMB-CH是不同于CV42的一个BSMV新株系。

大四学生课堂教学中出现的问题与对策

随着当今社会大学生就业压力的不断加大,大学四年级学生在就业阶段呈现出了许多不利于课堂教学的问题。本文对大学四年级课堂教学过程出现的问题进行了分析,根据大四学生的不同特点,划分为不同的群体。并提出了如何提高大四学生课堂教学效果的措施。

温州蜜柑萎缩病毒大外壳蛋白基因克隆分析

利用RT-PCR技术从感染温州蜜柑萎缩病毒的叶片中扩增出SDV大外壳蛋白(Large coat protein,CPL),将CPL克隆到pGEM-T载体后进行测序分析。DNA序列分析表明,SDV FJ的CPL基因cDNA序列全长为1329bp,编码443个氨基酸。与同属其他病毒序列对比分析结果显示,所得序列与日本报道的SDV S-58株系核苷酸和氨基酸同源性最高,分别为98.1%和98.6%。核苷酸序列与S-58相比25处发生了替换突变,其中T和C之间的替换频率最高,占绝对优势。

四川番茄黄化曲叶病病原分子鉴定及变异分析

【目的】明确引起四川番茄黄化曲叶病(Tomato yellow leaf curl disease,TYLCD)的病原。【方法】对采自四川攀枝花市田间表现矮化、黄化和曲叶症状的番茄植株SC64-67,通过PCR、克隆及测序等技术获得病毒及卫星DNA的全基因组序列,并对序列进行变异分析。【结果】利用双生病毒简并引物PA/PB从4个样品中均扩增得到约500 bp的片段,随机选择SC65进行DNA-A全基因组扩增和序列测定,该DNA分子全长为2 732 nts,系统进化分析表明,其与已报道的中国番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl China virus,TYLCCNV)来自云南元谋的菜豆分离物(TYLCCNV-Bean-YM)的核苷酸序列相似性最高,为96.0%。检测发现,所有分离物均伴随有卫星DNAβ分子。全序列测定表明SC65 DNAβ全长1 338 nts,与分离自云南楚雄番茄上的TYLCCNV-Y25伴随的卫星DNAβ亲缘关系最近,核苷酸序列相似性为77.5%。【结论】研究表明四川番茄黄化曲叶病样品均受到TYLCCNV/DNAβ病害复合体的侵染,但其病毒DNA-A和卫星DNAβ分子来源于TYLCCNV的不同分离物。