无色杆菌Am77绿色荧光蛋白标记菌株的构建及其菌丝际定殖和迁移特性研究

黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum,Foc)是黄瓜枯萎病的病原菌,该病害可导致黄瓜严重减产甚至绝收。无色杆菌(Achromobacter sp.)Am77由黄瓜枯萎病菌菌丝诱集获得,推测其在Foc菌丝际具有强定殖能力。为明确菌株Am77在Foc菌丝际的定殖及迁移能力,采用CaCl_(2)法将pRK415-EGFP质粒转化进入菌株Am77感受态细胞,从20株转化子中筛选出一株荧光表达强烈的GFP标记菌株,命名为GFP-77;对GFP-77菌株生长曲线的测定结果表明GFP-77与原始菌株Am77生长特性一致;连续传代遗传稳定性检验结果表明,连续传代10次的GFP-77菌株发光率均在99%以上;为明确GFP-77菌株是否与Foc存在特异互作,选取了Foc、与其同属的茄病镰刀菌(Fs)以及生防真菌哈茨木霉(Tr),测定了GFP-77菌株在3种真菌菌丝际的定殖和迁移能力,结果表明,GFP-77菌株在3种真菌菌丝际的定殖和迁移能力不同,在Foc菌丝际定殖能力最强,随菌丝迁移距离最远,培养3 d的平均迁移距离达21.5 mm。研究表明菌株Am77与Foc关系密切,研究结果为探究无色杆菌Am77与枯萎病菌Foc的互作提供了依据。