抗坏血酸联合维生素D_3对豚鼠体内1,25-(OH)_2D_3水平和溃疡性结肠炎影响

目的探讨抗坏血酸(AA)联合维生素D_3(VD_3)对豚鼠体内1,25-(OH)_2D_3水平和溃疡性结肠炎(UC)的影响。方法随机将32只豚鼠按体重分为4组,每组8只,对照组(120 mg AA+2.8μg VD_3/kg)、模型组(120 mg AA+2.8μg VD_3/kg)、高、低剂量AA组(240 mg AA+2.8μg VD_3/kg、8 mg AA+2.8μg VD_3/kg);每组豚鼠均进食不含AA和VD的特殊饲料,7W后,对照组豚鼠继续饮用蒸馏水,其他3组豚鼠自由饮用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液,3 d后处死豚鼠,检测相关指标。结果与对照组比较,模型组豚鼠结肠DAI评分、大体形态评分和组织病理学评分升高,血清25-(OH)D_3、1,25-(OH)_2D_3水平降低,肝脏CYP2R1和肾脏CYP27B1表达下降,血清IL-6和TNF-α水平[分别为(80.21±6.22)、(174.08±11.04)ng/m L]升高;与模型组比较,低剂量AA组结肠DAI评分和大体形态评分升高,血清25-(OH)D_3水平降低,血清IL-6和TNF-α水平[分别为(93.23±4.76)、(208.46±14.15)ng/m L]升高;与低剂量AA组比较,高剂量AA组结肠DAI评分和大体形态评分下降,血清25-(OH)D_3、1,25-(OH)_2D_3水平升高,肝脏CYP2R1和肾脏CYP27B1表达升高,血清IL-6和TNF-α水平[分别为(75.20±3.85)、(167.83±11.85)ng/m L]降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 AA在适宜范围内能够促进VD_3更充分地羟化为活性形式1,25-(OH)_2D_3,AA联合VD_3对DSS诱导的豚鼠UC具有一定干预作用。

1,25-(OH)_2D_3对DSS诱导的慢性结肠炎小鼠炎症反应的影响

目的探究不同剂量1,25-(OH)_2D_3对慢性溃疡性结肠炎小鼠炎症反应TLR4信号通路中相关因子的影响。方法 9w龄雌性C57BL/6小鼠50只,适应性喂养1w后,随机分为正常组、模型组、低、中、高剂量干预组。正常组小鼠在整个实验期间自由饮用蒸馏水,其余四组在第1~7 d、15~21 d自由饮3%的DSS溶液,其余时间自由饮用蒸馏水。在实验的第15~28日,低、中、高剂量干预组小鼠每天分别灌胃含10、50、100 ng 1,25-(OH)_2D_3 0.1ml的橄榄油,正常组和模型组小鼠则只灌胃0.1ml的橄榄油。于第29日处死全部小鼠。根据小鼠的一般情况,结合结肠大体形态评分以及结肠组织病理学评分对小鼠结肠严重程度进行评估。酶联免疫吸附法检测小鼠血清TNF-α、IL-10含量,免疫组化法检测小鼠结肠组织中VDR、TLR4、TRAF6及NF-κB1蛋白含量。结果与模型组小鼠相比,低、中、高剂量1,25-(OH)_2D_3干预组小鼠结肠大体形态和组织病理学评分均低于模型组,结肠长度均长于模型组。干预后,血清TNF-α含量降低,IL-10含量有所升高,结肠组织TLR4、NF-κB1、TRAF6表达减少,VDR蛋白表达增加。结论补充1,25-(OH)_2D_3可降低结肠组织TLR4、TRAF6、NF-κB1的表达,改善慢性溃疡性结肠炎,这可能与TLR4信号通路有关。

维生素D_3联合抗坏血酸对豚鼠结肠炎的改善作用

目的探讨维生素D_3(VD_3)联合抗坏血酸(VC)对豚鼠溃疡性结肠炎的作用。方法将40只雄性豚鼠按体质量随机分为5组,每组8只:正常组[N,120mg VC+2.8μg VD_3/(kg·d)]、模型组[M,120mg VC+2.8μg VD_3/(kg·d)]、高VC低VD组[HCLD,240mg VC+1.4μg VD_3/(kg·d)]、中VC低VD组[MCLD,120mg VC+1.4μg VD_3/(kg·d)]和低VC低VD组[LCLD,8mg VC+1.4μg VD_3/(kg·d)]。每组均进食缺乏VD和VC的特殊饲料,采用改良的豚鼠灌胃方法给予各组相应剂量的VD_3和VC。灌胃7w后,N组继续饮用蒸馏水,其他4组饮用3%葡聚糖硫酸钠溶液3d,造模期间,灌胃情况同前。结果 N组体质量、粪便和精神状态正常,评分明显低于其他4组,血清中25-(OH)D_3、1,25-(OH)_2D_3显著升高,C反应蛋白(CRP)、白介素-6(IL-6)和核转录因子κB(NF-κB)明显降低;与LCLD组相比,HCLD组大体形态改善,组织学损伤较轻,疾病活动指数评分较低,血清中25-(OH)D_3、1,25-(OH)_2D_3显著升高,CRP、IL-6和NF-κB明显降低;M组评分显著低于LCLD组,其25-(OH)D_3、1,25-(OH)_2D_3显著高于LCLD组,CRP、IL-6和NF-κB较HCLD、MCLD和LCLD组明显降低,且均有统计学意义(P<0.05)。结论维生素D_3缺乏时,较高剂量的VC对豚鼠溃疡性结肠炎的防治效果更明显。

维生素C联合低剂量维生素D_3对溃疡性结肠炎豚鼠氧化应激的影响

目的探讨不同剂量维生素C(vitamin C,VC)联合低剂量维生素D_3(vitamin D_3,VD_3)对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)豚鼠的氧化应激水平的影响。方法 30只雄性Dunkin-Hartley豚鼠适应性喂养7d后,按体质量随机分为5组,每组6只:正常组(normal)[200IU/(kg·d)VD_3+100mg/(kg·d)VC]、模型组(model)[(200IU/(kg·d)VD_3+100mg/(kg·d)VC]、低D高C组(LDHC)[10IU/(kg·d)VD_3+200mg/(kg·d)VC]、低D中C组(LDMC)[10IU/(kg·d)VD_3+100mg/(kg·d)VC]、低D低C组(LDLC)[10IU/(kg·d)VD_3+10mg/(kg·d)VC],各组豚鼠采用改良灌胃法分别给予相应剂量的VD_3和VC。干预5w后,除正常组外,其余各组豚鼠自由饮用2%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液4d,建立UC模型,正常组自由饮用蒸馏水,各组灌胃干预不变,造模结束后,麻醉豚鼠,心脏采血,血清离心处理后于-80℃冻存待测。结果正常组豚鼠一般情况较好;与正常组相比,DSS造模后,除模型组外,其余三组豚鼠血清中1,25-(OH)_2D_3的水平升高,且LDMC组,LDLC组与模型组有显著性差别(P<0.05);与正常组相比,模型组豚鼠血清中MDA含量增高,但差异无统计学意义;VC干预组GSH-Px水平虽无统计学差异,但有降低趋势;各VC干预组的SOD水平明显降低(P<0.05)。结论 VC联合应用低剂量VD可能提高溃疡性结肠炎豚鼠血清的抗氧化水平。[营养学报,2019,41(1):53-57]

维生素D3对溃疡性结肠炎豚鼠结肠组织凋亡作用的研究

目的探究补充VD3是否可以抑制结肠组织的凋亡作用,进而改善豚鼠溃疡性结肠炎。方法将18只雄性豚鼠根据体质量随机分为3组,每组6只:对照组[VD35μg/(kg·d)]、正常剂量VD3组[VD35μg/(kg·d)]和低剂量VD3组[VD30.25μg/(kg·d)]。试验期间用不含VD3配方的饲料喂养,采用改良豚鼠灌胃法给予每组相应剂量的VD3进行干预。干预5w后,正常剂量VD3组和低剂量VD3组豚鼠自由饮用2%的葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)进行造模,对照组自由饮用蒸馏水。造模期间进行疾病活动指数评分(disease activity index,DAI);4d后处死,进行结肠大体形态学评分;经苏木素-伊红(HE)染色进行组织病理学评分;采用实时定量PCR(RT-PCR)检测结肠组织中细胞凋亡相关分子Caspase-3、Bax、Bcl-2的mRNA表达水平;透射电镜观察结肠上皮细胞结构。结果与对照组相比,正常剂量VD3组和低剂量VD3组DAI、结肠大体形态学以及组织病理学评分均升高(P<0.05),正常剂量VD3组DAI和组织病理学评分均低于低剂量VD3组(P<0.05)。与对照组相比,正常剂量VD3组和低剂量VD3组豚鼠结肠组织Caspase-3的mRNA表达水平[分别为(0.87±0.39、5.58±1.41、4.81±1.33)]明显增加(P<0.05);与低剂量VD3组相比,Bax在正常剂量VD3组转录降低[分别为(7.33±1.89、2.76±1.34,P<0.05)];与对照组相比,Bcl-2在正常剂量VD3组和低剂量VD3组的转录水平均降低[分别为(0.95±0.07、0.43±0.06、0.35±0.20,P<0.05)]。结论补充正常剂量的VD3可以抑制结肠组织的异常凋亡,对肠粘膜有一定的保护作用,缓解了DSS引发的结肠损伤。

VC与VD_3联合应用对结肠炎豚鼠肠粘膜保护作用

目的探讨不同剂量维生素C(VC)联合维生素D3(VD3)对结肠炎豚鼠肠粘膜通透性的影响。方法24只雄性Dunkin-Hartley豚鼠适应性喂养7 d后,按体重随机分为4组,每组6只:对照组(100 mg/kg VC)、模型组(100 mg/kg VC)、低、高剂量VC组(10、200 mg/kg VC),采用改良豚鼠灌胃方法给予各组豚鼠剂量为200 IU/kg的VD3,同时按组别给予相应剂量VC,连续5周;模型组、低、高剂量VC组豚鼠自由饮用2%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液4 d,对照组豚鼠自由饮用蒸馏水。采用放射免疫法检测血清中25-(OH)D3和1,25-(OH)2D3水平,酶联免疫法检测血清中二胺氧化酶(DAO)、D–乳酸和内毒素含量;取远端结肠组织,常规石蜡包埋,苏木素–伊红(HE)染色,显微镜下观察,进行组织病理学评分。结果与对照组比较,模型组、低、高剂量VC组豚鼠结肠大体形态评分和组织病理学评分均明显升高(P<0.05);与对照组比较,模型组、低、高剂量VC组豚鼠血清中DAO含量[分别为(252.02±1.74)、(253.06±2.54)(250.60±0.82)U/m L]均明显升高(P<0.05),低、高剂量VC组豚鼠血清中内毒素水平[分别为(109.74±13.37)、(111.58±12.49)EU/m L]均明显降低(P<0.05)。结论在一定剂量的维生素D3基础上,VC对结肠炎豚鼠肠粘膜屏障功能具有一定保护作用。