获得性低巨核细胞性血小板减少性紫癜8例分析

结合文献复习对8例AATP的病因、发病机理、临床特征、治疗及转归进行了探讨,认为本症是一组综合病征,建议改称为AATS,并提出了具体诊断标准。

以中枢神经系统损害为首发症状的急性白血病8例报告

对8例以中枢神经系统损害为首发症状的急性白血病患者的临床表现及实验室检查进行了分析,指出这类患者在临床上极易误诊而延误治疗。作者认为对原因不明的脑、脊髓病变者,应考到急性白血病之可能,并应及时进行骨髓等有关检查。

20例骨髓增生异常综合征的染色体观察

骨髓增生异常综合征(MyelodysplasticSyndrome,MDS)是一组骨髓造血干细胞病变所致的造血功能异常的血液病,其特点为骨髓病态造血,外周血一系或数系细胞顽固性减少并有质的异常,以往称为白血病前期。1982年FAB 协作组将MDS 分为5型,即(1)难治性贫血(RA);(2)环形铁粒幼红细胞性RA(RA-S);(3)原始细胞过多性RA(RAEB);(4)慢性粒—单细胞白血病(CMMOL);(5)

Survivin、caspase-3在非霍奇金淋巴瘤组织中的表达及意义

背景与目的:Survivin是新近发现的凋亡抑制因子,在肿瘤的发生中起重要作用。Survivin在多种肿瘤组织广泛表达而在正常成人组织不表达,可直接抑制caspase-3和caspase-7活性。本研究旨在通过检测survivin、caspase-3蛋白在不同恶性度非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkinslymphoma,NHL)组织中的表达,探讨二者与NHL发病的关系及其临床意义。方法:应用免疫组织化学EnVisionsystem法检测NHL患者组织标本survivin、caspase-3蛋白的表达。结果:Survivin及caspase-3在54例NHL中的阳性率分别为51.9%(28/54)和83.3%(45/54)。Survivin在低度恶性组NHL中的表达(19.0%,4/21)低于中-高度恶性组(72.7%,24/33),两组之间有显著性差异(P<0.05);caspase-3表达也有同样规律。Survivin及caspase-3的共同表达率为46.3%(25/54)。结论:NHL中有survivin过度表达。

MAPK在慢性髓细胞白血病K562细胞株信号转导中的作用

背景与目的:近年研究表明,ras-MAPK信号传导通路在慢性髓细胞白血病(CML)的发生和发展中起着重要作用。本研究拟探讨丝裂原活化的蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase,MAPK)在CML信号传导中的作用及其作用机理。方法:用脂质体转染法将MAPK的反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,ASO)导入CML细胞株K562细胞中,通过细胞增殖、DNA合成、MAPK含量和MAPK活性变化检测MAPKASO对K562细胞的作用。结果:MAPKASO可明显抑制细胞增殖、DNA合成、MAPK含量和MAPK活性,其抑制率分别为51.8%、57.1%、45.3%和61.6%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:MAPK在CML信号转导中起重要,极有可能成为治疗CML的新靶点。

不同锑剂对早幼粒细胞白血病凋亡诱导作用比较

目的 :通过不同锑剂对早幼粒白血病细胞株NB4细胞的凋亡诱导作用的比较 ,力求找到有效治疗早幼粒细胞白血病锑剂药物 .方法 :采用细胞生长曲线、形态学及NBT(硝基四氮唑蓝 )还原试验判定NB4细胞的生长、分化及功能 ;细胞周期分析和DNA电泳研究细胞凋亡 .结果 :三价锑剂能够诱导早幼粒白血病细胞凋亡 ,且具有时间剂量依赖性 ,而五价锑剂对早幼粒白血病细胞没有凋亡诱导作用 .结论 :三价锑剂能够有效地诱导早幼粒白血病细胞凋亡 ,提示酒石酸锑钾作为临床治疗寄生虫病有效药物 ,可以老药新用 ,有望用于临床治疗早幼粒细胞白血病 .

Th1/Th2细胞对再生障碍性贫血CD34^+细胞体外扩增和集落形成的影响

目的探讨Th1/Th2细胞平衡偏离及平衡回复对重型再生障碍性贫血(sAA)骨髓CD34+细胞体外扩增和集落生成的影响。方法以1例确诊的sAA患者为研究对象。(1)分离骨髓单个核细胞,用免疫磁珠法富集CD34+细胞、CD4+(Th)细胞。(2)以流式细胞术(FCM)检测CD4+细胞中Th1、Th2细胞比例。(3)扩增CD34+细胞并再次富集以获足量CD34+细胞,分为4组对照组;Th细胞作用组;Th细胞+IFN-γ作用组;Th细胞+IL-4作用组。(4)各组扩增培养10d,继以集落生成试验,测定各组CD34+细胞扩增率和集落产率。(5)患者经免疫抑制治疗后随访,用FCM监测Th1/Th2细胞比。结果(1)患者经5个月治疗获缓解。(2)缓解前、后Th1/Th2比分别是22.47和12.27,正常对照组为8.98±4.45。(3)CD34+细胞扩增率,以对照组最高,其次为Th细胞+IL-4组、Th细胞组,Th细胞+IFN-γ组的最低。(4)各组CD34+细胞集落产率与其扩增率数值平行相关,即对照组最多,其次为Th细胞+IL-4组、Th细胞组,Th细胞+IFN-γ组的最少。结论Th1细胞反应亢进直接抑制sAA患者CD34+细胞在体外的自我更新和增殖分化,IL-4能拮抗这种造血抑制效应,这可能是通过调节Th1/Th2平衡而间接实现的。

PD98059对慢性髓细胞白血病Ras-MAPK信号转导的作用

目的:探讨PD98059对慢性髓细胞白血病信号转导的作用及其作用机制。方法:将PD98059加入慢性髓细胞白血病细胞系K562细胞中,通过细胞活力、DNA合成、集落形成和MAPK活性的变化,观察PD98059对慢性髓细胞白血病信号转导的作用。结果:PD98059可明显抑制K562细胞活力、DNA合成、集落形成和MAPK活性(与对照组比较,P<0.05),其抑制作用具有浓度依赖性。结论:PD98059可通过阻断Ras-MAPK信号通路而发挥其抑制作用。Ras-MAPK通路极有可能成为CML治疗的新靶点。

重型再生障碍性贫血患者骨髓T细胞克隆的初步研究

目的 :建立源于重型再生障碍性贫血 (重型再障 )患者骨髓的T淋巴细胞克隆 ,以便研究该病的发病机理。方法 :用免疫分选法分别从 1名初诊重型再障患者及对照的骨髓中富集CD34+ 和CD3+ 细胞。将CD3+ 细胞作反应细胞、照射过CD34+ 细胞作刺激细胞 ,进行 14d单向自身混合淋巴细胞培养。对活细胞作有限稀释和单个细胞分孔接种 ,与含IL 2和PHA P的饲养细胞体系共培养。观察挑选细胞生长孔 ,计算接种率 ,用泊松 (Poisson)分布初步判断单个细胞分离过程成功与否。而后将阳性孔细胞作转孔培养 ,定期用饲养抚育刺激、常规用IL 2支持增殖以扩大各克隆的数量。用SABC P免疫细胞化学染色法 ,初步鉴定各克隆CD4 CD8抗原表型。结果 :自身混合淋巴细胞培养后的活细胞数 ,病例为 4× 10 3,对照为 6 5。单细胞分离接种培养后 ,对照组的细胞生长孔数为 0 ;而病例组的培养板上 ,共有 11孔发生细胞增殖 ,相应的实际接种率是 2 1% ,未超出Poisson理论接种率值范围 (<2 6 % ) ,判明平均每个增生孔的细胞克隆前体数不大于 1。这 11个克隆中 ,9个呈CD4单阳性表型 ,阳性为 98% ;2个为CD8单阳性表型 ,阳性率为 98%。结论 :从 1例重型再障患者骨髓中分离出了 11株T淋巴细胞克隆。进一步鉴定分析这些克隆的表型和特异性 。

反义寡聚脱氧核苷酸对白血病K562细胞株生物特性的影响

目的：探讨反义核酸对白血病Ｋ５６２细胞株的影响。方法：用人工合成的ｂｃｒ３／ａｂ１２反义寡聚脱氧核苷酸（ＡＳＯ－ｂ）及无义寡聚脱氧核苷酸（Ｎ－ＯＤＮ）处理人急性红白血病细胞株Ｋ５６２细胞系，以观察Ｋ５６２细胞的生长及其ｂｃｒ３／ａｂ１２癌基因的表达。结果：ＡＳＯ－ｂ能抑制体外培养的Ｋ５６２细胞的生长（抑制率为５３．８３±１０．７８，Ｐ＜０．０５），集落形成（４０μＭ的ＡＳＯ－ｂ的抑制率为８８．９，Ｐ＜０．０５），ＤＮＡ及Ｐ２１０蛋白的合成（１２ｈ抑制率分别为７９．６８±１３．５３，６０．３３，Ｐ＜０．０５）；而对照组对Ｋ５６２细胞则无明显的影响。结论：提示ｂｃｒ３／ａｂ１２癌基因是维持Ｋ５６２细胞恶性生长表型的主要因素，也为慢性髓系白血病的治疗指出了新的方向。

端粒酶反义RNA对人髓性白血病细胞系HL-60的作用

目的 探讨抗端粒酶在急性白血病治疗中的意义 .方法 用脂质体介导法将 p BBS2 12 - h TR(反义端粒酶 RNA真核表达载体 )导入人髓性白血病细胞系 HL- 6 0中 ,采用TRAP法测定端粒酶活性 ,细胞生长动力学检测 ,电镜 ,DNA片段分析等方法观察其对 HL- 6 0细胞的端粒酶活性、细胞增殖及细胞凋亡影响 .结果 端粒酶反义 RNA能显著抑制HL- 6 0细胞的端粒酶活性 ,抑制 HL- 6 0细胞的增殖并促进其凋亡 .结论 以端粒酶反义

反义寡核苷酸对K562细胞株恶性表型逆转作用的研究

用人工合成的ｂｃｒ３／ａｂＬ２反义寡聚脱氧核苷酸（ＡＳＯ－ｂ）及无关寡聚脱氧核苷酸（Ｎ－ＯＤＮ）处理人急性红白血病细胞株Ｋ５６２细胞，结果造成了细胞恶性行为的改变。表现为细胞生长减慢、Ｐ２１０蛋白表达受抑、ＤＮＡ的合成减少及集落形成能力下降，从而证明了反义核酸在癌基因表达上的调控和抑制细胞恶性行为的作用。

K562细胞分泌的exosome的免疫电镜研究

目的:通过免疫电镜方法观察K562细胞分泌的 exosome,探讨其潜在的临床应用价值.方法:采用离心超滤和 蔗糖密度梯度离心等方法分离出K562细胞释放的exosome, 经透射电镜观察其超微结构.采用固相免疫电镜法(SPIEM) 制备exosome的HSP70,ICAM 1及ABL免疫电镜标本.结果: K562细胞分泌的exosome为直径50～100nm的膜性微囊结 构,圆形或椭圆形,腔内为低电子密度成分.经抗HSP70, ICAM 1和ABL抗体 胶体金免疫电镜标记,囊外膜及腔内可 见点状、颗粒状电子致密物沉积.结论:离心超滤和蔗糖密度 梯度离心法纯化小量exosome方法可行,K562细胞分泌的ex osome表达HSP70,ICAM 1和ABL蛋白,具备免疫原性.

非霍奇金淋巴瘤survivin和Ki67的表达及意义

目的 探讨survivin蛋白、增殖相关抗原Ki 67在不同恶性度非霍奇金氏淋巴瘤 (NHL)中的表达及意义。方法 应用免疫组织化学envisionsystem法检测NHL组织中survivin蛋白和Ki 67的表达。结果 在反应性增生淋巴组织 (LNRH)中未检测到survivin蛋白表达。在NHL中survivin蛋白表达率为 51.9% (2 8/ 54) ,其中低度恶性及中高度恶性组NHL中的表达率分别为 19% (4/ 2 1)、72 .7% (2 4/3 3 ) ,两组之间比较差异有显著性 (P <0 .0 0 1)。survivin、Ki67表达与恶性度均显著相关 ,而且survivin表达也与Ki67指数相关。结论 survivin蛋白在NHL患者组织中高表达 。

Exosomes对L1210肿瘤细胞攻击的免疫保护作用研究

目的：观察L1210小鼠白血病细胞分泌的exosomes的抗肿瘤作用。方法：采用离心超滤和蔗糖密度梯度离心法分离L1210细胞释放的exosomes。固相免疫电镜法制备exosomes的H-2D，ICAM-1电镜标本，免疫印迹观察exosomes中HSP70的表达情况。exosomes免疫DBA／2小鼠，检测特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）活性；免疫后的小鼠以L1210肿瘤细胞攻击，观察免疫保护效果。结果：L1210细胞分泌的exosomes为直径介于50～100nm的膜性微囊，圆形或椭圆形。抗H-2D，ICAM-1抗体-胶体金免疫电镜标记，囊外膜可见点状、颗粒状电子致密物沉积。通过免疫印迹证明其表达HSP70。Exosomes免疫小鼠，可诱导产生针对L1210细胞的CTL反应；L1210的exosomes（2．5及5扯g）免疫小鼠后，接种L1210肿瘤细胞，有明显的抵抗肿瘤生长作用。结论：L1210分泌的exosomes在同基因小鼠模型中可产生较强的保护性免疫力，exosomes疫苗可作为白血病等恶性肿瘤免疫治疗的候选疫苗。

慢性粒细胞白血病特异性单、双及三单位核酶载体的构建

本文拟针对在慢性粒细胞白血病发病中起关键作用的ｂｃｒａｂｌ 融合基因， 构建特异性的系列核酶载体。为此，我们针对ｂｃｒａｂｌ 融合位点设计、合成了３ 个相邻的锤头状核酶。通过基因重组将３ 个单核酶按顺序定向克隆入改建的ｐＧＥＭ３ｚｆ 载体中，构建了ｂｃｒａｂｌ 单核酶、双核酶及三核酶体外转录载体， 并在此基础上将三单位核酶克隆入ｐ ＤｏＲｎｅｏ 载体中构建三核酶逆转录病毒载体。此外， 通过ＰＣＲ 方法， 扩增了ｂｃｒａｂｌ 融合位点附近约３７６ｂｐ 的序列，成功地构建了ｂｃｒａｂｌ 融合基因体外转录载体。本文构建的ｂｃｒａｂｌ 特异性系列载体，为今后遴选特异、高效的核酶打下了基础，并为将核酶用于自体骨髓移植的体外骨髓净化创造了条件。

线粒体途径在慢性髓系白血病信号转导中的作用

本研究旨在探讨线粒体途径在慢性髓系白血病(CML)信号转导中的作用。用脂质体转染法将bcr3/abl2反义寡核苷酸(ASO)导入CML细胞系K562细胞中;用MTT法检测bcr3/abl2ASO对K562细胞活力的影响;流式细胞术(FCM)分析测定细胞凋亡率;荧光染料罗丹明123染色分析细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm)的变化;Westernblot检测线粒体凋亡信号转导通路相关蛋白细胞色素C(CytC)的表达。结果表明,2μmol/Lbcr3/abl2ASO与K562细胞作用24小时后,可明显抑制K562细胞活力,其抑制率为65.7%;可诱导细胞凋亡,凋亡率为16.9%;可下调K562细胞线粒体ΔΨm,有38.33%的细胞出现线粒体ΔΨm下降;可增强CytC的表达,激光光度扫描仪测得其表达光密度值由2.33±0.3升高到4.78±0.1。结论:线粒体途径通过介导凋亡信号而在CML信号转导中发挥重要作用。

三氧化二锑诱导急性早幼粒细胞白血病细胞凋亡的研究

目的 研究锑剂三氧化二锑 (Sb2 O3 )对早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡的诱导作用 ,以寻求早幼粒细胞白血病治疗的新方法。方法 采用细胞生长曲线、形态学及硝基四氮唑蓝 (NBT)还原试验 ,判定NB4细胞的生长、分化及功能。采用细胞周期分析和DNA电泳研究细胞凋亡。结果Sb2 O3 能诱导早幼粒白血病细胞凋亡 ,且具有时间、剂量依赖性。结论 Sb2 O3 能有效地诱导早幼粒白血病细胞凋亡 ,提示锑剂诱导细胞凋亡的疗法 。

Genistein对K562细胞生长及CyclinD1基因和bcr-abl融合基因表达的影响

目的 研究 Genistein抑制 K5 62细胞生长的机制及对 Cyclin D1基因和 bcr- abl融合基因表达的影响 .方法 用RT- PCR方法检测 Genistein作用于 K5 62细胞前后 Cyclin D1基因和 bcr- abl融合基因的 m RNA表达变化 ,用免疫荧光、流式细胞仪和电镜检测 CDK4蛋白的表达、细胞周期及凋亡 .结果 K5 62细胞中 Cyclin D1基因、bcr- abl融合基因的 m R-NA和 CDK4蛋白表达阳性 ,用 Genistein与 K5 62细胞共同孵育后 ,bcr- abl融合基因的 m RNA表达阴性 ,Cyclin D1的m RNA和 CDK4蛋白表达下降 ,细胞阻滞于 G2 / M期 ,K5 62细胞出现凋亡 .结论 bcr- abl融合基因、 Cyclin D1基因和CDK4蛋白在 K5 62细胞中高表达 ,Genistein能使 K5 62细胞生长受抑 ,诱导其凋亡 ,抑制 bcr- abl基因的 m RNA表达 ,并使 Cyclin D1基因的 m RNA和 CDK4蛋白表达下降 ,表明bcr- abl融合基因、Cyclin D1基因和 CDK4对慢粒发展存在内在关系 .