全国细菌耐药监测网2014—2021年血标本分离毗邻颗粒链菌的耐药性变迁

目的了解全国临床血标本分离毗邻颗粒链菌的耐药性变迁,为临床治疗提供依据。方法按照全国细菌耐药监测网(CARSS)技术方案的要求开展细菌耐药监测工作,参考美国临床实验室标准化协会(CLSI)标准,分析2014—2021年CARSS成员单位血标本分离毗邻颗粒链菌对抗菌药物的敏感性数据。结果2014—2021年CARSS成员单位每年血标本临床分离毗邻颗粒链菌为83~152株,2017年后呈逐渐增多趋势。血标本分离毗邻颗粒链菌对万古霉素敏感率为100%,对美罗培南的敏感率为93.7%,对头孢曲松、头孢噻肟、头孢吡肟的敏感率为90%左右,对左氧氟沙星的敏感率为82.8%,对青霉素的敏感率为65.0%,对红霉素和克林霉素的敏感率较低,分别为32.7%、46.8%。2014—2021年毗邻颗粒链菌对部分抗菌药物的敏感率有不同程度上升,对头孢吡肟、美罗培南的敏感率有所下降。结论临床血标本毗邻颗粒链菌检出数量呈上升趋势,且对青霉素、头孢菌素、碳青霉烯类、氟喹诺酮类、大环内酯类均呈现不同程度耐药,但尚未发现对万古霉素耐药的菌株。

酶联荧光免疫分析技术检测粪便中艰难梭菌毒素A/B

目的应用酶联荧光免疫分析(ELFIA)技术及PCR联合检测粪便标本中艰难梭菌毒素A/B(CDAB),分析不同临床表现的住院患者粪便标本中CDAB的检出情况。方法收集北京大学第一医院2010年8月～11月242位住院患者粪便标本,用ELFIA法检测CDAB,对检测结果为可疑的标本用PCR复测。将患者分为非抗生素相关腹泻组和抗生素相关腹泻组,对两组的CDAB阳性率进行χ2检验,并分析检测结果与临床表现的相关性。结果 242位患者中,22例ELFIA法CDAB检测为阳性,12例检测结果为可疑。12例可疑标本有10例进行了PCR复测,8例(80.0%)CDAB基因阳性。两法联合检测共计30例为CDAB阳性,阳性率为12.4%。抗生素相关腹泻组CDAB阳性率(24.0%)显著高于非抗生素相关腹泻组(6.9%)(χ2=14.21,P<0.01)。CDAB阳性组的年龄(68.2±23.6)岁高于CDAB阴性组(58.7±23.9)岁(P<0.05)。结论 ELFIA法检测CDAB,有商品试剂盒,方法简便可靠。可疑阳性标本用PCR法检测tcdA/tcdB基因,可进一步提高阳性率。艰难梭菌毒素在抗生素相关腹泻患者检出率较高,与临床表现具有较好的相关性。

碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌耐药特征及分子流行病学研究

目的调查2009年碳青酶烯类耐药鲍曼不动杆菌(CRAB)的耐药基因及分子流行病学特征。方法用PCR筛查碳青霉烯类耐药基因OXA-23、OXA-24、OXA-58、IMP、VIM、NDM-1和adeABC型外排泵结构基因adeB,并进行测序分析;用基因外重复回文序列PCR(repetitive extragenic palindromic sequence-based PCR,Rep-PCR)分型技术进行分子流行病学监测。结果2009年我院66株CRAB中98.5%的菌株OXA-23基因阳性,95.5%adeB基因阳性,两种基因同时阳性的比率为93.9%,未检出其他耐药基因。66株CRAB可分为A～D 4个基因型,我院流行的优势克隆株为A型,波及10个病房。这些基因型不同于2004年我院CRAB流行株。结论 2009年CRAB通过产生OXA-23酶和adeABC型外排泵等机制共同介导碳青霉烯类耐药,CRAB克隆株水平传播是造成2009年鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药率增加的主要原因。

25株耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌的耐药机制研究

目的:了解临床分离的耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌的耐药谱特征、同源性及碳青霉烯酶的产生状况。方法:采用PHOENIX100自动化细菌鉴定药敏系统及纸片扩散法进行药敏试验;基因外重复回文序列PCR(REP-PCR)法分析其基因同源性;聚合酶链反应(PCR)检测β内酰胺酶基因,并对扩增出的碳青霉烯酶基因进行序列分析;对整合子基因进行PCR检测。等电聚焦电泳测定β内酰胺酶的等电点。碱裂解法提取质粒。结果:2003年1月～2005年12月我院共分离到30株碳青霉烯类中介或耐药的鲍曼不动杆菌,其中儿科ICU病房9株,外科ICU病房12株。菌株表现为多重耐药,但儿科ICU与其他病房分离株的耐药谱有差异。对存活的非重复的25株菌进行检测,REP-PCR图谱分为A、B、C、D4个基因型,A型7株集中在儿科ICU,16株属于B型,C型和D型各1株。PCR检出10株菌携带OXA-23基因,其中包括7株儿科ICU的碳青霉烯类耐药菌,而外科ICU分离的耐药菌株不具有OXA-23基因。所有菌株均未能检出OXA-24、IMP及VIM基因。有20株携带PER-1型酶基因。22株细菌检测出Ⅰ型整合子基因结构(大小约180～3500bp)。结论:本院碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌流行主要为医院感染所致,儿科ICU分离的菌株对碳青霉烯类耐药的主要机制为产生OXA-23型酶,外科ICU分离的菌株对碳青霉烯类耐药的主要机制则可能为膜通透性降低的原因。

新生儿及儿童血培养凝固酶阴性葡萄球菌的阳性报警时间对血流感染与污染的鉴别诊断价值评价

背景阳性报警时间(TTP)可用于鉴别诊断成人血培养凝固酶阴性葡萄球菌(CoNS)是血流感染(BSI)还是污染,但新生儿及儿童BSI特点不同于成人,TTP在新生儿及儿童BSI中的应用价值仍需进一步评价。目的评价新生儿及儿童血培养CoNS的TTP对BSI与污染的鉴别诊断价值。方法选择我院2008年1月—2012年12月收治的血培养分离出CoNS的43例新生儿(<28 d)和33例儿童(28 d^16周岁)为研究对象,收集其CoNS菌株,自动化血培养仪自动记录TTP;进行菌株鉴定和药敏实验,并判断是BSI还是污染;绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价TTP对BSI与污染的鉴别诊断价值。结果 76株CoNS中,表皮葡萄球菌45株,人葡萄球菌14株,溶血葡萄球菌7株,其他葡萄球菌10株;甲氧西林耐药61株,未发现万古霉素耐药菌株。BSI新生儿及儿童共22例(BSI组),污染新生儿及儿童共54例(污染组),BSI组TTP为(19.16±5.03)h,污染组TTP为(27.15±11.56)h,BSI组TTP短于污染组(t=4.194,P<0.05)。绘制ROC曲线发现,TTP>24.1 h可作为鉴别诊断BSI与污染的最佳临界值,此时的灵敏度为51.9%,特异度为90.9%,曲线下面积(AUC)为0.7〔95%CI(0.6,0.8)〕,准确度为中等。结论新生儿及儿童血培养CoNS的TTP对BSI与污染的鉴别诊断准确度为中等,鉴别诊断污染的特异度较高,可作为一项辅助的鉴别诊断指标。

产ESBLs肠杆菌科细菌中整合子参与多重耐药机制研究

目的 观察产超广谱 β-内酰胺酶 (ESBL s)菌株的多重耐药情况 ,并分析产 ESBL s菌株中整合子的存在 ,同时对整合子的特性进行了初步研究。方法 采用 VITEK GNS药敏板测定庆大霉素等 13种抗菌药物对 12 6株产 ESBL s的肠杆菌属细菌的最低抑菌浓度 (MIC)。PCR技术检测整合子基因 ,应用 PCR定位技术和 DNA测序研究整合子插入耐药基因的情况。结果产 ESBL s的菌株对第三代头孢菌素、氨基糖苷、喹诺酮、磺胺类代表药如头孢噻肟、庆大霉素、培氟沙星、磺胺甲口恶唑 /甲氧苄氨嘧啶 (SMZ/ TMP)的耐药率分别为76 .2 %、6 7.5 %、76 .2 %、6 3.5 % ,对碳青霉烯类的亚胺培南全部敏感。产 ESBL s菌株质粒上存在三种大小不同的整合子 (扩增片段 94 0、180 0、2 6 0 0 bp) ,含有二氢叶酸还原酶基因和 β-内酰胺酶基因和核苷转移酶基因。结论 产 ESBL s菌株和非产 ESBL s菌株相比呈多重耐药 ,产 ESBL s菌株存在不同类型的整合子结构 ,含有多种耐药基因。整合子可以在细菌种内和种间引起多重耐药的水平传播。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性,SCCmec分型及毒素基因的检测

目的调查北京大学第一医院致病性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec分型情况、耐药状况、PVL、TSST-1基因携带率,初步了解临床耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药原因,为临床感染控制提供依据。方法收集2007年9月至2008年3月住院患者首次分离的53株有致病意义MRSA,用全自动微生物分析仪进行药敏试验,应用PCR方法检测MRSA的SCCmec基因型、PVLT、SST-1基因。结果53株MRSA呈多重耐药特点,SCCmec分型以ⅢA为主(47.2%),PVL基因均为阴性,12株(22%)MRSA TSST-1阳性。结论53株MRSA的多重耐药性与SCCmec结构密切相关,SCCmec分型技术是探索MRSA多重耐药性与耐药结构有效的分子生物学手段,TSST-1基因阳性株在临床分离的金黄色葡萄球菌中占有较高的比例。

血培养阳性报警时间在大肠埃希菌血流感染患者预后评估中的应用价值研究

目的评估血培养阳性报警时间(TTP)对大肠埃希菌血流感染患者发生严重脓毒血症及脓毒血症休克、住院期间死亡的预测价值。方法选择2008—2012年在我院行血培养分离到大肠埃希菌且病历资料完整的成年住院患者174例,以TTP的P25(7.13 h)为切点,将患者分为低TTP组43例和高TTP组131例,比较两组患者临床特征及预后情况。结果两组患者中高龄(≥65岁)比例、男性比例、院内获得性感染发生率、基础状态差比例、菌株产超广谱β内酰胺酶(ESBL)率、原发感染灶、感染相关危险因素比较,差异均无统计学意义(P>0.05);低TTP组严重脓毒血症及脓毒血症休克发生率、住院期间病死率均高于高TTP组(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,低TTP预测患者发生严重脓毒血症及脓毒血症休克的OR为6.618〔95%CI(3.036,14.429),P<0.001〕,预测患者住院期间死亡的OR为4.159〔95%CI(1.623,0.657),P=0.003〕。绘制ROC曲线发现,TTP≤9.72 h为预测患者发生严重脓毒血症及脓毒血症休克的最佳切点〔曲线下面积(AUC)=0.792〕,TTP≤9.38 h为预测患者住院期间死亡的最佳切点(AUC=0.708)。结论低TTP对大肠埃希菌血流感染患者发生严重脓毒血症及脓毒血症休克、住院期间死亡的预测价值为中等,可为临床不易察觉的早期菌血症提供重要预警信息。

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌感染聚集性病例分子流行病学调查及控制

目的:对某ICU耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)感染聚集性病例进行调查与控制,为临床多重耐药菌感染防控提供参考。方法:对2018年2月1日至3月31日期间发生的4例CRKP感染聚集性病例进行分子流行病学调查,对环境微生物进行检测,查找环境中的CRKP;应用PCR(Rep-PCR)分型技术分析患者与环境分离菌株的同源性;采取综合控制措施,分析控制效果。结果:发生的4例CRKP感染中医院感染2例,千住院日医院感染率为4.07‰,高于2017年同期,虽差异无统计学意义(P=0.232),但CRKP医院感染率达历年最高值,存在聚集性发生趋势。患者A、B、C及患者B床档分离的CRKP为同一基因型,患者D为其他基因型。患者A为社区获得性感染,患者B和C为医院获得性感染,说明CRKP在ICU内发生了传播。采取综合控制措施后,未发生续发CRKP感染病例,与控制前相比差异有统计学意义(P=0.021)。结论:分子流行病学调查有助于查明感染源和感染高风险因素,深入现场的临床调查与观察有助于发现感染风险,措施的有效落实是预防感染聚集发生的关键。

睾丸酮丛毛单胞菌的分离和鉴定及3α-羟类固醇脱氢酶在大肠杆菌中的克隆表达

目的:从自然界中分离鉴定产 3α 羟类固醇脱氢酶(3α hydroxysteroiddehydrogenase, 3α HSD)的睾丸酮丛毛单胞菌,并在大肠杆菌(E.coli.)中克隆表达 3α HSD。方法:将池塘泥浆样品接种到以雄酮为唯一碳源的培养基中,对分离到的菌株根据形态学和生理生化特征进行初步鉴定。为进一步鉴定该菌株,根据睾丸酮丛毛单胞菌中的 3α HSD的基因设计引物,PCR扩增细菌基因组DNA,将扩增片段插入到载体pET15b中,构建重组质粒pET15b,并在E.coli. BL21 (DE3 )pLysS中进行诱导表达,对表达得到的蛋白进行鉴定并测定其酶活力。结果:一系列生化反应和培养特征证实,该菌与睾丸酮丛毛单胞菌的符合率为 85%,最适生长pH值为 7. 0,最佳生长温度为 30℃。在E.coli. BL21 (DE3 )pLysS中经诱导表达得到了相对分子质量约为 29×103具有酶活性的融合蛋白,可催化雄酮(3α 羟类固醇)脱氢。结论:从池塘泥浆中分离到一株产 3α HSD的睾丸酮丛毛单胞菌,并在E.coli.中表达得到了具有酶活性的融合 3α HSD。这为利用金属螯和亲和层析纯化融合 3α HSD,并进一步建立以其为工具酶的血清总胆汁酸酶循环测定方法奠定了基础。

产ESBLs细菌感染患者多重感染及其耐药性分析

目的 :了解临床产ESBLs细菌感染患者并发多重感染流行分布情况以及多重感染细胞耐药性分析。方法 :将ESBLs细菌感染患者的痰、血、尿等标本进行细菌培养并采用VITEKAMS系统对庆大霉素、亚胺培南等 17种抗菌药物进行最低抑菌浓度 (MIC)进行检测。结果 :临床产ESBLs细菌感染患者 ,39.8%并发多重感染 ,主要分布于ICU病房 ,老年病科病房、儿科、呼吸科病房等 ,多重感染细胞主要是铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、肠球菌、阴沟肠杆菌等。结论 :产ESBLs细菌感染患者相对于非ESBLs感染患者容易出现多重细菌感染 ,主要发生在年老体弱、免疫力低下、危重患者 ,参与多重感染的细菌多是临床难以控制。

耐阿米卡星铜绿假单胞菌氨基糖苷类耐药基因及其基因型研究

目的了解耐阿米卡星(AMK)铜绿假单胞菌(Pa)的氨基糖苷类修饰酶基因和氨基糖苷耐药基因的存在情况及其基因型。方法对临床分离的72株多重耐药Pa(其中对AMK耐药Pa组和对AMK敏感Pa组各36株)分别用聚合酶链反应(PCR)测定9种主要的氨基糖苷类修饰酶基因和2种氨基糖苷耐药基因,用基因外重复回文序列(REP)-PCR进行基因型研究。结果在分组研究中AMK耐药Pa组表现为aac(6′)-Ⅰ和aac(3)-Ⅱ基因同时阳性的占42.4%,aac(6′)-Ⅰ和ant(2″)-Ⅰ基因同时阳性的占36.4%,是耐药组的主要修饰酶基因;AMK敏感Pa组表现为aac(6′)-Ⅰ基因阳性的占50.0%,aac(3)-Ⅱ基因阳性的占33.2%,是敏感组的主要修饰酶基因。2种氨基糖苷耐药基因(RmtA和RmtD)均为阴性。REP-PCR显示耐药菌株可分为A～G 7型,其中AMK耐药Pa组的主要分型为F型(其中尤以F1型为多);AMK敏感Pa组以E型为多见。结论通过2种或多种氨基糖苷类修饰酶同时作用于AMK是Pa对AMK耐药的重要途径之一。

阳性报警时间预测血培养葡萄球菌评价

目的探讨阳性报警时间(TTP)在预测血培养中金黄色葡萄球菌(SA)、凝固酶阴性葡萄球菌(CoNS)和甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)中的价值。方法收集北京大学第一医院2008至2012年血培养阳性标本中SA、CoNS的TTP,根据SA对苯唑西林的敏感性判定为MRSA或甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)。对同一患者分离的重复菌株,仅留取第1株纳入本研究。分别比较SA和CoNS的TTP差异是否具有统计学意义,MRSA和MSSA的TTP差异是否有统计学意义。用受试者工作特征(ROC)曲线分析TTP的诊断价值。结果收集到SA共101株(其中MRSA为51株,MSSA为50株),CoNS共253株。SA和CoNS的TTP分别为(16.63±7.47)h和(24.61±11.09)h,二者差异有统计学意义(P<0.05)。MRSA和MSSA的TTP分别为(18.22±8.15)h和(15.01±6.40)h,二者差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线表明TTP≤16.90 h可作为区分SA和CoNS的切点,曲线下面积(AUC)为0.758。TTP>12.58 h可作为区分MRSA和MSSA的切点,AUC为0.630。结论 TTP对预测SA和CoNS的准确度为中等,对预测MRSA和MSSA的准确度较低。

阳性报警时间预测成人血培养凝固酶阴性葡萄球菌临床意义的准确性评价

目的：评价阳性报警时间（rITrP）对预测成人血培养凝固酶阴性葡萄球茵（CoNS）临床意义的准确性。方法：对我院2008年至2012年血培养分离出CoNS的成年（〉16周岁）住院患者进行回顾性分析，并记录TTP根据临床资料和指南推荐的判断标准来判定CoNS是引起血流感染的病原茵还是污染，将患者分为血流感染组和污染组，比较两组1TrP的差异。用受试者工作曲线（ROC）分析TTP对预测CoNS临床意义的准确性。结果：收集到符合入选标准且临床资料完整的患者共130例，其中血流感染组81例，污染组49例。两组的TTP分别为（19．26±7．46）h和（30．72±13．48）h（P〈0．001）。ROC曲线表明TTP≤20．88h可作为区分血流感染与污染的最佳切点，曲线下面积为0．836（95％可信区间为0．761～0．895），灵敏度为72．8％．特异度为83．7％。结论：TTP对预测成人血培养CoNS临床意义的准确度为中等，具有可接受的敏感度和特异度．可作为一种辅助诊断指标。

一次性鞋套对控制ICU环境污染的研究

目的:调查使用一次性鞋套对控制ICU环境污染的作用。方法:根据《消毒技术规范》规定的方法对外科ICU使用鞋套和不使用鞋套时的空气和物体表面的细菌菌落总数进行测定,分别连续监测10天,对细菌培养结果进行分析。结果:空气细菌菌落总数不穿鞋套组比穿鞋套组低,差异有统计学意义(P<0.05);物体表面细菌菌落总数达到卫生标准的合格率两组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:使用一次性鞋套不能改善ICU空气质量和物体表面的清洁程度。

季也蒙念珠菌引起的导管相关性血流感染1例

患者男性，68岁，入院主要诊断为运动神经元病，其他诊断包括2型糖尿病、原发性高血压、泌尿道感染、肺部感染、低蛋白血症。患者长期卧床，呈植物状态，已气管切开辅助呼吸，并置留深静脉导管，抵抗力差，已有多个耐药菌定植在体内。2014年7月29日发热至39．3℃，心率132次／min，呼吸24次／min，血压126／78mmHg。7月30日仍高热，送深静脉导管血培养（需氧＋厌氧）和外周血（需氧＋厌氧）培养，临床考虑导管相关性血流感染。

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶基因型研究

目的 :分析临床大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中超广谱 β 内酰胺酶的基因型分布以及产ESBLs细菌中头孢菌素酶的存在情况。方法 :质粒接合实验分析耐药性转移 ,根据超广谱β 内酰胺酶和头孢菌素酶各种已知基因序列设计引物 ,进行聚合酶链反应分析 ,确定超广谱β 内酰胺酶的基因型分布以及头孢菌素酶基因。 结果 :80 .4 %的菌株质粒接合实验成功 ,66%的菌株为TEM基因型 ,1 4 %的菌株为SHV基因型 ,1 0 %的菌株为CTX M型。 2株菌同时存在AmpC酶。TEM阳性的大肠埃希菌RAPD带型呈多样性。 结论 :临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药性可以发生转移 ,ESBLs以TEM基因型为主 ,部分菌株为SHV、CTX M型。同一菌株内可以产生 2种不同基因型的超广谱β 内酰胺酶。

浅谈老年患者的心理护理

目的探讨老年患者的心理特征,做好心理护理,以保证和促进老年患者的身心健康。方法针对老年患者可能出现的各种心理问题而采取相应的护理措施。结果通过针对不同老年患者的心理特征采取的护理措施,减轻了老年患者心理压力,对护理人员也产生了信任感,从而积极主动地配合治疗和护理工作。结论恰当有效的心理护理能够提高护理质量,促进老年患者早日康复,减少并发症的发生,同时也降低了病死率。

浅谈老年冠心病的护理

目的探讨老年冠心病患者的发病原因,总结更有效的护理方法,促进患者早日康复。方法对老年冠心病患者重点进行基础知识、饮食、心理、运动、药物等方面的健康护理。结果 65例患者提高了医疗保健知识和自我保护能力,减少了疾病复发频率,促进了患者康复,出院时精神状况良好。结论通过对老年冠心病患者的精心护理,密切了护患关系,增强了患者对护理工作的满意度,提高了患者的生活质量。