健脾解毒方对大肠癌细胞COX-2/β-catenin/MMP-7信号通路的影响

目的探讨健脾解毒方对大肠癌细胞转移能力的影响及可能的作用机制。方法采用CCK-8检测不同浓度健脾解毒方醇提物对Lo Vo细胞生长的抑制作用。分别采用健脾解毒方、过表达环氧合酶-2(COX-2)基因和(或)糖原合成激酶-3β(GSK-3β)选择性抑制剂SB-216763作用Lo Vo细胞24h,Transwell检测细胞转移能力;Western blottting检测细胞中COX-2和β-连环蛋白(β-catenin)的蛋白表达;ELISA检测细胞培养上清液中基质金属蛋白酶-7(MMP-7)表达。结果健脾解毒方能够以剂量和时间依赖性方式抑制Lo Vo细胞的生长。与空白对照组比较,健脾解毒方能够明显抑制Lo Vo细胞的转移能力(P<0.01),明显下调Lo Vo细胞中COX-2蛋白表达,下调β-catenin在细胞核内的积累及其下游靶基因MMP-7的表达(P<0.01)。COX-2基因能够增加β-catenin在细胞核内的积累及其MMP-7的表达,促进Lo Vo细胞转移(P<0.01);而上调COX-2表达能够逆转健脾解毒方对Lo Vo细胞中β-catenin在细胞核中的积累及其MMP-7的表达和转移的抑制作用,激活β-catenin信号通路能够逆转健脾解毒方对Lo Vo细胞转移的抑制作用。结论健脾解毒方能够抑制人肠癌细胞的转移能力,其作用机制可能与抑制COX-2/β-catenin/MMP-7信号通路有关。

健脾解毒方通过Wnt/β-catenin信号通路下调幽门螺杆菌诱导的胃癌血管生成因子的研究

目的研究健脾解毒方对幽门螺杆菌(HP)感染胃癌细胞诱导的血管生成因子(VEGF)、血管生成素-2(Ang-2)、成纤维细胞生长因子(b FGF)的影响,并探讨其可能的机制。方法采用HP标准株NCTC11637与人胃癌MKN45细胞共培养的方法感染MKN45细胞,分为对照组、HP感染组、健脾解毒方醇提物低中高剂量组(低中高剂量分别为0.5 g/L、1.0 g/L和2.5 g/L),采用ELISA法检测健脾解毒方对HP感染诱导的人胃癌MKN45细胞VEGF、b FGF、Ang-2表达的影响;使用Wnt/β-catenin特异性抑制剂FH-535(20μmol/L)抑制Wnt/β-catenin活性后,再进行HP感染,ELISA法检测人胃癌MKN45细胞VEGF、b FGF、Ang-2蛋白表达的变化。Western blotting检测健脾解毒方对HP感染激活的人胃癌MKN45细胞Wnt/β-catenin信号通路活性的调控作用。结果 HP感染MKN45细胞12 h后,VEGF、b FGF、Ang-2蛋白的表达明显上调(P<0.01)。健脾解毒方醇提物低中高剂量组均可下调HP诱导的人胃癌MKN45细胞VEGF、b FGF、Ang-2蛋白的表达,并呈一定的剂量依赖效应。采用Wnt/β-catenin特异性抑制剂FH-535抑制Wnt/β-catenin活性后可明显抑制HP诱导的VEGF、b FGF、Ang-2蛋白的表达(P<0.01)。HP感染胃癌MKN45细胞12 h后,胞浆和胞核β-catenin蛋白表达明显上调(P<0.01),健脾解毒方可下调胞浆和胞核β-catenin蛋白表达,并呈一定的剂量依赖效应。结论健脾解毒方可下调HP诱导的人胃癌细胞VEGF、b FGF、Ang-2表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路是其机制之一,这可能是该方抗胃癌作用的重要机制。

补肾健脾方对人结肠癌移植瘤生长及血清血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶7表达的影响

目的观察补肾健脾方对人结肠癌移植瘤生长及血清血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶7(MMP-7)表达的影响,探讨其抗结肠癌的部分作用机制。方法裸鼠腋下接种人结肠癌细胞,建立人结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型。随机分为模型组、5-氟尿嘧啶组和补肾健脾方低、中、高剂量组,各给药组给予相应药物,连续3周。各组处死6只荷瘤鼠,测量瘤体质量,计算相对抑瘤率;ELISA测定血清VEGF及MMP-7表达;剩余荷瘤鼠用于观察生存时间。结果补肾健脾方各剂量组瘤体质量较模型组均明显降低,荷瘤鼠生存时间较模型组明显延长;与模型组比较,补肾健脾方各剂量组VEGF、MMP-7表达均明显下降。结论补肾健脾方可抑制人结肠癌裸鼠皮下移植瘤生长、延长荷瘤鼠生存时间,其机制可能与下调VEGF、MMP-7表达有关。

人工智能在现代景观园林设计中的应用探究

随着时代的发展,人们对景观设计也越来越重视。在园林建设过程中,人工智能技术广泛应用于城市景观设计中。本文首先对人工智能与现代景观园林设计的概念、人工智能在现代景观园林设计中的作用进行了概述;其次分析了现代景观园林设计中存在的问题;最后探究了人工智能在现代景观园林设计中的应用,以期为相关人士提供参考。

补肾解毒方抑制肿瘤相关巨噬细胞激活介导的大肠癌转移的机制研究

目的:探讨补肾解毒方(BSJDR)调控肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)极化对大肠癌细胞迁移侵袭的影响。方法:体外培养小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,分别使用PBS、白细胞介素(IL)-4、IL-4+BSJDR低剂量(-L)、IL-4+BSJDR中剂量(-M)以及IL-4+BSJDR高剂量(-H)刺激RAW264.748 h。应用流式细胞术检测TAMs分群比及荧光定量PCR法(qPCR)检测M2型巨噬细胞精氨酸酶(Arg1)、甘露糖受体(Cd206)、Cd163 mRNA表达。收集条件培养基(CM)构建微环境培养体系,应用Transwell与划痕实验观察BSJDR对MC38细胞侵袭迁移的影响。结果:流式细胞术显示,IL-4组M2巨噬细胞分群比为77.7%,显著高于Control组的1.01%、IL-4+BSJDR-L组的40.1%、IL-4+BSJDR-M组的31.4%以及IL-4+BSJDR-H组的29.8%(P<0.01)。qPCR结果显示,IL-4组Arg1、Cd206、Cd163 mRNA表达较Control组显著升高(P<0.01),IL-4+BSJDR组Arg1、Cd206、Cd163 mRNA表达均较IL-4组显著降低(P<0.01,P<0.05)。Transwell及划痕实验显示,IL-4-CM组中MC38细胞侵袭迁移能力增强(P<0.05,P<0.01);(IL-4+BSJDR)-CM组MC38细胞侵袭迁移能力较IL-4-CM组显著降低(P<0.01)。结论:BSJDR可通过抑制TAMs向M2型巨噬细胞极化抑制大肠癌转移。

健脾解毒方通过PTEN/PI3K/AKT信号通路抑制幽门螺杆菌诱导胃癌血管新生的研究

目的:探讨健脾解毒方对幽门螺杆菌(H.pylori)感染胃癌细胞诱导血管新生的调控作用及可能的机制。方法:采用H.pylori标准株NCTC11637与人胃癌MKN45细胞共培养的方法感染MKN45细胞,分为MKN45组,H.pylori+MKN45组,健脾解毒方低、中、高剂量组(0.5、1.0、2.5mg/m L),取上清液与细胞培养液按1∶1比例混合作为条件培养液,观察条件培养基对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)管腔形成的影响;采用ELISA法检测健脾解毒方对H.pylori感染诱导的人胃癌MKN45细胞VEGF表达的影响;采用PI3K特异性抑制剂LY294002(20μmol/L)抑制PI3K/AKT活性后,再进行H.pylori感染,检测人胃癌MKN45细胞VEGF蛋白表达的变化。Western blot检测H.pylori感染对人胃癌MKN45细胞PTEN/PI3K/AKT信号通路活性的影响及健脾解毒方对该信号通路的调控作用。结果:H.pylori感染组可明显促进HUVEC细胞管腔形成,健脾解毒方中、高剂量组可抑制HUVEC细胞管腔形成(P<0.01)。H.pylori感染MKN45细胞可明显上调上清液中VEGF蛋白的表达(P<0.01),健脾解毒方药物各剂量组均可下调H.pylori诱导的人胃癌MKN45细胞VEGF蛋白的表达。采用PI3K特异性抑制剂LY294002抑制PI3K/AKT活性,H.pylori诱导的VEGF蛋白的表达明显下调(P<0.01)。H.pylori感染对人胃癌MKN45细胞PTEN和AKT无影响,但可增加p-PTEN和p-AKT的表达,健脾解毒方各剂量组均可降低二者的表达,并呈一定的剂量依赖效应(P<0.01)。结论:健脾解毒方可抑制H.pylori诱导的HUVEC血管新生及H.pylori诱导的人胃癌细胞VEGF表达,调控PTEN/PI3K/AKT信号通路是其机制之一,这可能是其防治胃癌的重要作用靶点。

补肾解毒散结方醇提物调控HIPK2-p53信号通路抑制人结肠癌细胞增殖

目的:探讨补肾解毒散结方调控HIPK2-p53信号通路抗人结肠癌细胞增殖的作用和机制。方法:裸鼠腋下接种人结肠癌HCT-116细胞,建立人大肠癌(CRC)裸鼠移植瘤模型,随机分为模型组,补肾解毒散结方低、中、高剂量组,并与5-氟尿嘧啶(5-FU)组做对照,连续给药2周,之后处死裸鼠,比较各组裸鼠瘤体体积及相对抑瘤率;以不同浓度的补肾解毒散结方醇提物(10、20、40、60、80、100、120μg/m L)分别作用于人结肠癌HCT-116细胞48h,CCK-8法检测补肾解毒散结方对HCT-116细胞增殖的抑制作用;单克隆形成实验分析补肾解毒散结方对HCT-116细胞克隆形成情况;Western blot法检测补肾解毒散结方对细胞HIPK2、p53蛋白表达的影响。结果:补肾解毒散结方低、中、高剂量组及5-FU组对裸鼠瘤体大小抑制率分别为28.83%、39.98%、47.67%和54.26%;补肾解毒散结方对结肠癌HCT-116细胞的增殖有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性,48h的半数抑制浓度(IC50)值为57.59μg/m L;补肾解毒散结方对HCT-116细胞的克隆形成有明显的抑制作用,呈剂量依赖性;补肾解毒散结方作用HCT-116细胞48h后,剂量依赖性地上调HIPK2、p53蛋白表达。结论:补肾解毒散结方能抑制人结肠癌HCT-116细胞增殖及人结肠癌裸鼠移植瘤瘤体生长,其机制可能与上调HIPK2、p53的表达从而抑制肿瘤生长相关。

补骨脂素对人结肠癌细胞侵袭转移及β-catenin/TCF4-MMP-9信号通路的影响

目的:探讨补骨脂素对人结肠癌细胞侵袭转移及对β-catenin、TCF4、VEGF、MMP-9表达水平的影响。方法:以不同浓度的补骨脂素分别作用于人结肠癌HCT-116细胞24、48、72h,CCK-8法检测补骨脂素对HCT-116细胞增殖率的影响;细胞划痕、Transwell实验检测补骨脂素对HCT-116细胞转移及侵袭能力的影响;Western Blot检测β连环蛋白(β-catenin)、转录因子4(TCF4)蛋白表达情况;ELISA检测补骨脂素对HCT-116细胞血管内皮生长因子(VEGF)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响。结果:CCK8实验显示补骨脂素对人结肠癌HCT-116细胞的增殖率有抑制作用,呈剂量-时间依赖关系,24、48、72h的IC_(50)分别为123.75、94.63、37.87μg/mL;划痕及Transwell实验表明,补骨脂素能显著抑制HCT-116细胞的转移与侵袭能力;补骨脂素能够下调人结肠癌HCT-116细胞核内β-catenin、TCF4蛋白表达水平及VEGF、MMP-9的表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:补骨脂素能够抑制人结肠癌HCT-116细胞侵袭转移,其机制可能与下调β-catenin、TCF4蛋白表达水平及其下游靶基因VEGF、MMP-9的表达水平相关。

补肾解毒散结方通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抗大肠癌侵袭转移

目的:探讨补肾解毒散结方抑制Wnt/β-catenin信号通路抗人结肠癌HCT-116细胞侵袭转移的作用和机制。方法:采用CCK-8法检测以不同浓度补肾解毒散结方(10、20、40、60、80、100、120μg/ml)对人结肠癌HCT-116细胞增殖的影响;采用划痕实验检测HCT-116细胞转移能力;Transwell实验检测HCT-116细胞侵袭能力;Western blot检测HCT-116细胞的β-catenin、Cyclin D1蛋白表达水平。结果:补肾解毒散结方能够以剂量-时间依赖性方式抑制HCT-116细胞的增殖;补肾解毒散结方能够呈剂量依赖性方式抑制HCT-116细胞的侵袭和转移能力(P<0.05);补肾解毒散结方能够下调HCT-116细胞核内β-catenin蛋白表达水平,抑制其下游靶基因Cyclin D1的蛋白表达水平(P<0.01)。结论:补肾解毒散结方具有抑制人结肠癌HCT-116细胞增殖、侵袭和转移能力,其机制可能与其通过Wnt/β-catenin信号通路下调β-catenin蛋白表达水平相关。

白藜芦醇对人大肠癌耐药细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨虎杖有效成分白藜芦醇协同奥沙利铂(oxaliplatin,OXA)对人大肠癌耐药细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用CCK-8法检测白藜芦醇溶液对HCT116/OXA细胞的增殖影响和增敏指数;采用流式细胞术检测白藜芦醇联合OXA对HCT116/OXA耐药细胞凋亡的影响;采用实时定量PCR法检测Bax、Bcl-2及Caspase-3 mRNA水平变化;Western blot法检测Bax/Bcl-2比例、细胞色素-c(Cyt-c)释放及Caspase-3蛋白表达水平变化。结果:50μmol/L白藜芦醇能够提高HCT116/OXA细胞对OXA的敏感性,OXA的IC50值从133.80 mg/L下降至17.40 mg/L,逆转指数为7.69;白藜芦醇联合OXA明显诱导耐药细胞产生凋亡,凋亡途径中Bax、Caspase-3表达上调,Bcl-2表达下调,使得Bax/Bcl-2比例增加,同时引起Cyt-c的释放。结论:白藜芦醇能逆转人大肠癌细胞对OXA的耐药,诱导细胞凋亡。

健脾解毒方通过miR-195抑制大肠癌细胞转移

目的:研究健脾解毒方通过miR-195抑制大肠癌LoVo细胞的转移能力。方法:分别将miR-195的模拟物或抑制剂转染LoVo细胞,以及采用低、中、高剂量(50、100、200μg/m L)的健脾解毒方作用LoVo细胞48h,荧光定量PCR检测细胞中miR-195表达;Transwell检测细胞转移能力;ELISA检测细胞培养上清液中MMP-2和MMP-9表达。结果:miR-195的模拟物能够显著上调其表达,抑制LoVo细胞的转移能力,以及下调细胞分泌MMP-2、MMP-9蛋白(P<0.01);而采用miR-195的抑制剂干预结果与之相反(P<0.05)。健脾解毒方能够上调LoVo细胞的miR-195表达水平(P<0.01),呈剂量依赖性。与LoVo组比较,健脾解毒方能够显著抑制LoVo细胞的转移能力,下调MMP-2、MMP-9表达(P<0.01);在转染miR-195的抑制剂的基础上再采用健脾解毒方干预,发现健脾解毒方对LoVo细胞转移能力无明显影响。结论:健脾解毒方能够抑制人肠癌细胞的转移能力,其作用机制可能与上调miR-195表达有关。

肾虚证动物模型研究概况

随着对肾虚证研究的不断进展与深入,肾虚证动物模型在中医研究中的作用愈加重要。对于肾虚证动物模型的研究有利于科学地从微观上客观化、定量化认识肾虚证的本质,为临床应用提供可靠的理论依据。根据目前肾虚证动物模型的研究进展,文章从中医病因病机、中药干预、西药干预、手术切除等方面进行概述,重点阐述中医传统病因的造模方法。

丹参酮ⅡA通过EP2调控β-arrestin/β-catenin信号通路抑制大肠癌侵袭转移机制

目的:探讨丹参酮ⅡA对大肠癌细胞转移能力的影响及可能的作用机制。方法:利用CCK-8检测不同浓度丹参酮ⅡA对人结肠癌LoVo细胞增殖的影响;采用transwell、划痕实验研究丹参酮ⅡA对人结肠癌LoVo细胞侵袭转移能力的影响;利用Western Blot研究丹参酮ⅡA对EP2介导的β-arrestin/β-catenin信号传递轴的影响。结果:丹参酮ⅡA能够以剂量和时间依赖性方式抑制人结肠癌LoVo细胞的增殖;EP2能够促进LoVo细胞的侵袭转移能力(P<0.01),上调β-arretin的表达,进一步促进β-catenin的核转移(P<0.01);与空白对照组比较,丹参酮ⅡA能够明显抑制LoVo细胞的侵袭转移能力且呈剂量依赖性(P<0.01);同时,丹参酮ⅡA能够直接下调EP2受体的表达,抑制β-arretin的激活,进一步抑制β-catenin的核转移(P<0.01)。结论:丹参酮ⅡA能够抑制EP2/β-arrestin信号通路的激活,从而阻断β-catenin信号通路,发挥抗大肠癌侵袭转移的作用。

健脾解毒方治疗脾虚湿热型晚期大肠癌的临床疗效评价

目的:评价健脾解毒方对脾虚湿热型晚期大肠癌患者的临床疗效。方法:共选90例化疗失败的脾虚湿热型晚期大肠癌患者,随机分为治疗组和对照组,每组各45例。在常规对症支持治疗的基础上,治疗组服用健脾解毒方煎剂,对照组服用复方斑蝥胶囊,连续治疗6个月。观察健脾解毒方对总生存期(overall survival,OS)、中医证候及细胞免疫功能的影响。结果:共有84例患者完成试验,其中治疗组43例、对照组41例。治疗组的中位OS为102 d(95%CI:95.6~108.4 d),对照组中位OS为80 d(95%CI:76.1~83.9d),治疗组较对照组显著延长(P<0.01);治疗组中医证候疗效显著改善15例、部分改善17例、无改善11例,对照组中显著改善9例、部分改善10例、无改善22例,治疗组的证候改善率明显优于对照组(P<0.05);治疗组治疗后CD4+、CD4+/CD8+水平均显著高于对照组(P<0.01)。结论:健脾解毒方可以延长化疗失败的晚期大肠癌患者生存期,改善临床症状,提高生活质量,提高细胞免疫功能。

补肾健脾方调节血管相关生长因子表达抑制肝癌细胞侵袭转移的机制研究

目的:探讨补肾健脾方调节血管相关生长因子对人肝癌细胞侵袭转移的影响及其可能机制。方法:以人肝癌SMMC-2771细胞为对象进行实验。分别给予补肾健脾方0、12.5、25、50、100、200、400μg/mL,分别培养48、72 h,计算补肾健脾方对肝癌细胞增殖的抑制作用;将细胞分为对照组和中药干预低、中、高组。中药低、中、高组分别给予25、50、100μg/mL补肾健脾方醇提液;对照组给予等体积的培养基。划痕实验观察0、24 h各组SMMC-2771细胞的迁移情况;ELISA检测各组SMMC-2771细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达;Western Blot检测各组SMMC-2771细胞表皮生长因子受体(EGFR)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的蛋白表达。结果:补肾健脾方中药干预可显著抑制SMMC-2771细胞的增殖能力(P<0.01);与对照组比较,中药干预各剂量组可显著抑制SMMC-2771细胞的迁移能力(P<0.01),且抑制能力呈一定剂量依赖性;中药干预各剂量组可显著降低VEGF的表达(P<0.01),且抑制作用呈一定剂量依赖性;中药干预各剂量组作用后可显著下调MMP-2、MMP-9、EGFR蛋白表达(P<0.01),且调控作用呈一定剂量依赖性。结论:补肾健脾方能够显著调节血管相关生长因子的表达,抑制人肝癌细胞的侵袭转移能力。

补肾解毒方调控肿瘤相关巨噬细胞M2极化对大肠癌转移的影响

目的:探讨补肾解毒方调控肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)极化对大肠癌转移的影响。方法:构建C57BL/6小鼠大肠癌皮下移植瘤模型,随机分为正常组、补肾解毒方低、高剂量(11.2、22.4 g·kg^(-1))组,待肿瘤生长至1.5~2.0 cm3时剥离瘤体。剥离瘤体28 d后处死小鼠,观察小鼠肺转移情况。苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肺组织病理学变化,免疫荧光(IF)染色检测肺转移灶肿瘤细胞缺氧、凋亡变化;流式细胞术检测肿瘤组织中M1型和M2型巨噬细胞分群比;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤组织中M2型巨噬细胞(M2-TAMs)极化相关基因(Arg1、CD206、CD163)的表达。结果:正常组、补肾解毒方低、高剂量组小鼠转移率分别为70%、40%、10%。与正常组比较,补肾解毒方低、高剂量组转移率均降低,证明补肾解毒方抑制小鼠肺转移;HE染色表明,与正常组比较,补肾解毒方低、高剂量组肺转移灶中肿瘤细胞浸润显著减少(P<0.01);免疫荧光染色结果表明,与正常组比较,补肾解毒方低、高剂量组肺转移灶中肿瘤细胞凋亡增多、缺氧环境改善;Real-time PCR结果显示,与正常组比较,补肾解毒方低、高剂量组肿瘤组织中M2型巨噬细胞极化基因(Arg1、CD206、CD163)表达显著下降(P<0.01);流式细胞术显示,与正常组M2型巨噬细胞分群率为34.867%,补肾解毒方低、高剂量组M2型巨噬细胞分群率分别为22.033%、11.633%,显著降低(P<0.01);与补肾解毒方低剂量组比较,补肾解毒方高剂量组M2型巨噬细胞分群率显著降低(P<0.01),证明补肾解毒方显著抑制肿瘤组织内M2型巨噬细胞激活,且呈剂量依赖性。结论:补肾解毒方通过抑制肿瘤组织中M2型巨噬细胞激活抑制小鼠大肠癌肺转移。