金葡菌肠毒素SEC2的抗体制备及应用

生产厂家以金葡菌肠毒素C2(SEC2)的标示量作为金葡素注射液的质量控制标准,但其真正的含量由于滤液成分复杂而很难检测,本实验试图建立一种方便的鉴定金葡素注射液中的SEC2的方法。首先将重组的SEC2分别免疫BALB/c小鼠和新西兰兔,制备并纯化了单克隆及多克隆抗体。采用自制的抗体建立了检测SEC2的生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附实验,检测目标蛋白的质量浓度范围为2～20ng.mL-1,在检测范围内检测值的平均变异系数为5.08%,采用本法检测质量浓度分别为100ng.mL-1的重组肠毒素(SEA/SEO/SEM/SEN/SEG/SEI),均呈现阴性反应,说明此检测方法的专一性较好。采用此方法对金葡素注射液中的SEC2含量进行了检测,发现SEC2标识量与实际含量存在一定的差距。

聂莉芳教授辨治慢性肾病的对药经验研究

聂莉芳教授系我国著名中医肾脏病专家,全国第四、第五批名老中医药专家,从事肾脏病临床、教学、科研工作40余载,学验俱丰。她在慢性肾脏病的遣方用药,特别是药味的配伍上,颇多传承和创新,形成了独特而系统的聂氏对药。笔者有幸跟随聂师学习多年并成为其学术继承人,兹不揣浅薄,总结如下。对药又称药对,成对出现,相须或相使为用,可提高疗效,起到协同作用。

聂莉芳教授运用活血化瘀法辨治慢性肾脏病的经验研究

《柳叶刀》杂志的研究显示[1],2017年全球慢性肾脏病患者人数达6.975亿,其中中国患者数达1.323亿。因此提高慢性肾脏病的防治水平,是每一位肾科医生的使命和责任。聂莉芳教授系我国著名中医肾病专家,博士、传承博士后导师,首都国医名师,国家中医局第四、五、七批名老中医药专家。笔者有幸成为聂莉芳教授学术继承人并跟师多年,本文将重点介绍聂师运用活血化瘀法辨治多种慢性肾脏病的经验。

聂氏加味参芪地黄汤治疗多种慢性肾脏病的系列经验研究

参芪地黄汤系《沈氏尊生书·杂病源流犀烛》中治疗肠痈,溃后见气血大亏诸虚证的补益方剂。聂莉芳教授是我国著名中医肾脏病专家,全国第四、第五批名老中医药专家传承导师,她在临床中运用参芪地黄汤加味治疗多种慢性肾脏病,灵活配伍,随证化裁,均取得了较好的临床疗效。笔者有幸跟随聂师学习多年,并为学术继承人,兹将其经验与个人的学习运用体会介绍如下。

小鼠肝脏内组成型雄烷受体基因表达剪切突变体的研究

目的:研究组成型雄烷受体(CAR)在小鼠肝脏内是否存在剪切突变体。方法:以小鼠的肝脏为原料提取核酸,采用逆转录的方法获得小鼠的组成型雄烷受体的cDNA序列,并将其构建到T载体中进行测序分析。结果:实验发现CAR在小鼠肝脏内有不同的剪切体存在。结论:剪切体的不同主要集中在受体结合部位,估计这种不同与不同外源性物质对受体的调节功能不同有关。

聂莉芳教授辨治疑难杂症的经验研究

聂莉芳教授系我国著名的中医肾病专家,国家中医药管理局第四、五批师承制导师,博士、传承博士后导师,首都国医名师。聂师在慢性肾脏病中医辨治领域堪称巨擘,然其对于疑难杂症的治疗亦颇有造诣。笔者为聂莉芳教授学术继承人,兹将聂师辨治疑难杂症之经验,研究总结如下。

棕榈酰化超氧化物歧化酶的制备及性质研究

为了增强超氧化物歧化酶的稳定性,用棕榈酸对其进行了修饰,在修饰条件下,酶分子表面氨基修饰率为55％时,酶的活力回收为63％。修饰后的酶在耐热、耐酸、耐碱、抗有机溶剂变性和抗蛋白水解能力上均高于天然超氧化物歧化酶,为将超氧化物歧化酶作成实用药物和进一步扩大其应用范围创造了条件。

中医药治疗IgA肾病随机对照试验的系统评价

目的:评价中医药治疗IgA肾病的疗效和安全性。方法:参照Cochrane系统评价的要求,应用Revman5.0.15Meta分析软件对选择纳入的临床试验进行方法学质量评价、数据提取和分析。结果:12篇包括1104例患者的随机或半随机对照试验纳入并进行系统评价。根据Jadad方法学评分,所纳入的试验质量普遍较低,仅有2个研究评分高于3分,属于高质量试验。Meta-分析结果表明,中医药治疗IgA肾病在临床综合疗效、减少中小量蛋白尿、降低血浆IgA水平、控制Scr这几方面优于西医治疗;未报告严重的不良反应。对尿红细胞的疗效,因计量单位差异导致纳入研究不足,致使疗效难以肯定,需在今后的研究中进一步证实。结论:中医药在临床综合疗效、减少中小量蛋白尿、稳定肾功能方面有较好的疗效,表明中医药治疗IgA肾病是一种有前景的选择,值得深入探索。对尿红细胞的疗效,因计量单位差异导致纳入研究不足,致使疗效难以肯定,需在今后的研究中进一步证实。由于所纳入试验的方法学质量普遍较低,上述发现需要设计严谨的、方法学质量较高的随机对照试验的证据支持。

IgA肾病中医临床实践指南概览

指南的由来：2007年4月受WHO西太区委托，由中国中医科学院王永炎院士牵头，启动27种疾病指南编写工作。我们承担IgA肾病中医临床实践指南分课题工作。IgA肾病中医临床实践指南由我牵头组织编写，在收集循证医学证据的基础上，参考相关指南，结合专家经验和国内中医药治疗IgA肾病的实际情况制定的。该指南在以往工作基础上，

益气滋肾颗粒对IgA肾病辅助性T淋巴细胞亚群的影响

目的进一步阐明IgA肾病的发病机制及益气滋肾颗粒对IgA肾病辅助性T淋巴细胞亚群(Th1/Th2)的影响。方法应用流式细胞仪分别检测31例服用益气滋肾颗粒治疗3个月前后的IgA肾病患者(治疗组)和24名健康对照组的Th1/Th2细胞内细胞因子。结果与健康对照组比较,治疗组γ-干扰素(IFN-γ)百分比降低(P<0·05),白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)百分比升高(P<0·01)。治疗组治疗后与治疗前比较,IFN-γ百分比升高(P<0·05),IL-10百分比降低(P<0·01)。结论IgA肾病患者存在Th1/Th2的失衡,益气滋肾颗粒对IgA肾病Th1/Th2的失衡有一定调节作用。

金葡菌肠毒素C_2的克隆表达及其生物学活性

目的克隆金葡菌肠毒素C2全长基因,构建SEC2的表达载体,实现其可溶性表达,并对纯化的rSEC2蛋白的生物学活性进行研究。方法通过聚合酶链式反应(polym erase chain reaction,PCR)从金葡菌FR I1230菌株基因中得到肠毒素SEC2的基因,将其克隆至融合表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌进行表达并对融合蛋白进行亲和色谱纯化。通过考察重组SEC2对淋巴细胞的增殖作用及其对肿瘤细胞杀伤活性的影响,对其超抗原活性和免疫学活性进行研究。结果得到正确的肠毒素SEC2基因序列并得到高效表达的融合蛋白,MTT法结果表明,重组SEC2表现出良好的促淋巴细胞增殖活性,且能够增强淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。结论本研究成功克隆了SEC2基因,表达并纯化出具有抗肿瘤生物学活性的重组SEC2蛋白,为进一步对其分子抗肿瘤作用机制进行研究以及构建靶向抗肿瘤融合蛋白奠定了基础。

人血清白蛋白与PTH(1-34)融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达及鉴定

目的:在毕赤酵母中高效分泌表达人血清白蛋白与PTH(1-34)融合蛋白。方法:利用PCR技术获得HSA和PTH(1-34)基因,以柔性连接肽相连插入到表达载体pPIC9,重组质粒线性化后,用化学法转化毕赤酵母GS115,经组氨酸缺陷型培养板和PCR鉴定筛选得到转化子。在启动子AOX1和α交配因子信号肽的作用下,分泌表达融合蛋白HSA-PTH(1-34)。PCR法和电泳鉴定表达验证阳性转化子,并观测不同时间点的表达量。Western blot验证其免疫活性,在兔肾皮质细胞膜中测定腺苷酸环化酶的激活产生cAMP的量来检测融合蛋白的生物学活性。结果:PCR鉴定重组转化子验证了融合基因的成功整合,用甲醇诱导表达,蛋白电泳分析表明融合基因得到高效表达,HSA-PTH(1-34)同时具有HSA和PTH(1-34)的抗原性,且能激活兔肾皮质细胞中的腺苷酸环化酶产生cAMP,但活性低于PTH(1-34)。结论:在毕赤酵母中成功表达了具有生物学活性的人血清白蛋白与PTH(1-34)融合蛋白。

聂莉芳教授中医辨治糖尿病肾病的经验

糖尿病肾病属于糖尿病微血管并发症，是终末期肾衰竭的主要病因之一，其发病率逐年增加。病情进展相对较快，治疗难度大且预后较差。糖尿病肾病患者并无固定的临床症状，早、中期患者可能会出现多食易饥、口渴多饮、水肿、乏力等症状，晚期则可兼见恶心呕吐等症。

467例慢性迁延期IgA肾病中医证候分布的研究

目的：进一步探索IgA肾病的中医证候分布规律。方法：收集1999年4月-2006年10月到我院就诊的且均经肾穿刺确诊为IgA。肾病的慢性迁延期患者467例资料，中医辨证分型为：气阴两虚证、肝肾阴虚证、睥肾气虚证、睥肾阳虚证四型。结果：在467例慢性迁延期患者中，气阴两虚证所占比例最多，肝肾阴虚证居第二位，而睥肾阳虚证所占比例最少。结论：IgA肾病慢性迁延期以气阴两虚证居多，益气滋肾法为IgA肾病的主要治疗方法。

细胞色素P450 2C19单碱基突变位点CYP2C19m1的分析

目的:CYP2C19ml是引起CYP2C19酶活性缺陷的主要等位基因,有83％左右的慢代谢者含有CYP2C19ml等位基因,本文试图建立一步PCR测定CYP2C19ml等位基因的方法。方法:根据等位基因特异扩增(ASA)原理设计两对分别特异扩增野生型等位基因和突变型等位基因的引物,建立了一步PCR测定CYP2C19ml等位基因的方法。结果:对39位随机受试者进行了基因分型研究,发现3位CYP2C19ml纯合子、18位CYP2C19ml杂合子,其余18位为野生型纯合子。结论:说明效法能够用于测定CYP2C19ml等住基因,并且证明该法具有简便、快速和污染少的优点。

110例肾脏活检病理资料的总结分析

目的结合110例肾脏活检病理资料,探讨其病理与临床分布特征,明确肾脏穿刺的临床意义。方法回顾性分析110例肾穿刺活检的病理资料。结果 110例病理报告中,原发性肾小球疾病97例(88.2%),其中IgA肾病49例(44.5%),占总数比例最大;继发性肾小球疾病13例(11.8%),以过敏性紫癜性肾炎、乙肝病毒相关性肾炎、狼疮性肾炎为常见。结论原发性肾小球疾病仍为最常见的肾脏疾病,其中以IgA肾病最多;继发性肾小球疾病逐渐增多,以过敏性紫癜性肾炎、乙肝病毒相关性肾炎、狼疮性肾炎为常见;肾穿刺活检术对肾脏疾病的诊断、治疗、预后具有重要意义。