Rad9错配修复功能缺陷与结直肠癌发生的关系

目的探讨Rad9错配修复功能与结直肠癌发生的关系。方法收集100例结直肠癌患者肿瘤样本，采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测hRad9基因突变，采用快速点突变方法构建hRad9L101M点突变质粒并转染Rad9基因敲除的小鼠细胞。采用Westernblot方法检测Rad9表达．采用错配修复报告质粒及流式细胞仪检测活细胞错配修复能力。结果100例结直肠癌患者中，有7例发现了hRad9基因101位氨基酸由亮氨酸突变为甲硫氨酸。mRad9-＋L101M细胞（表达hRad9．L101M突变体的Rad9基因敲除小鼠细胞）和mRad9＋hRad9细胞（表达hRad9的Rad9基因敲除小鼠细胞）的错配修复效率分别为（34．0±5．6）％和（48．0±7．5）％，差异有统计学意义（P〈0．05）。用N-甲基亚硝脲（MNU）处理细胞后，mRad9-＋L101M细胞和mRad9-＋hRad9细胞的存活率分别为（33．7±5．9）％和（21.3±4．7）％，差异有统计学意义（P〈0．05）。hRad9基因101位氨基酸突变导致细胞错配修复效率下降及对MNU的抗性增加。hRad9基因多处翻译后修饰位点突变导致细胞错配修复能力下降。结论hRad9错配修复功能缺陷可能与结直肠癌发生有关。