NDUFS6蛋白生物信息学分析及过表达质粒的构建与鉴定

目的 应用生物信息学方法分析线粒体呼吸链复合体Ⅰ结构亚基烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(泛素)铁硫蛋白6(NDUFS6)的理化性质,构建pCV702-NDUFS6过表达质粒并进行鉴定,为进一步研究NDUFS6蛋白功能奠定基础。方法 利用Expasy、UniProtKB、NCBI、SOPMA等生物信息学工具分析NDUFS6蛋白的理化性质、二级结构等;根据NDUFS6 cDNA序列构建携带NDUFS6基因的过表达质粒pCV702-NDUFS6,转染大鼠心肌细胞H9C2,并设置阴性对照(NC)组和相应空载体CON520作为阳性对照(PC)组,经嘌呤霉素筛选后,采用RT-qPCR和Western blot检测NDUFS6 mRNA和蛋白表达水平。结果 NDUFS6蛋白由116个氨基酸组成,理论等电点pI为9.37。蛋白二级结构以无规则卷曲(占50%)为主。酶切鉴定和基因测序结果显示,pCV702-NDUFS6表达质粒构建成功。RT-qPCR和Western blot结果显示,相较于NC组和PC组,过表达组NDUFS6表达水平均上调(P均<0.05)。结论 成功构建了能在心肌细胞H9C2中有效过表达NDUFS6基因的过表达质粒。

泛素连接酶MuRF2通过抑制线粒体自噬减轻心肌细胞缺氧损伤

目的探讨泛素连接酶肌肉环指状蛋白2(muscle ring finger protein 2,MuRF2)对缺氧心肌细胞活力和自噬的调控作用。方法构建大鼠源MuRF2基因过表达和敲减慢病毒载体,分别感染大鼠心肌细胞H9C2。将H9C2细胞分为阴性对照组(NC)、阳性对照组[MuRF2过表达空载体组(LV-Vector)、MuRF2敲减空载体组(LV-RNAi-Vector)]、Mu RF2过表达组(LV-MuRF2)和MuRF2敲减组(LV-RNAi-MuRF2),缺氧培养(5%CO_(2)、1%O_(2)、94%N_(2))后,采用CCK-8法和ELISA法检测心肌细胞损伤水平,利用透射电子显微镜检测心肌细胞超微结构和自噬水平变化,采用Western blot测定自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和P62的表达水平。结果与对照组相比,缺氧组心肌细胞间隙增大、细胞皱缩、多见漂浮的死亡细胞和细胞碎片,心肌细胞活力下降、肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)含量增加(P均<0.05);电子显微镜下可观察到部分线粒体发生肿胀,并存在嵴断裂、嵴溶解现象,自噬小体散在胞质内;缺氧组LC3-Ⅱ蛋白表达水平升高,P62蛋白表达水平降低(P均<0.05)。缺氧培养后,与NC组和LV-Vector组相比,LV-MuRF2组细胞活力增加,偶见自噬小体,LC3-Ⅱ蛋白表达水平降低、P62蛋白表达水平增高(P均<0.05);与NC组和LV-RNAi-Vector组相比,LV-RNAi-MuRF2组细胞活力降低,可见大量自噬小体,LC3-Ⅱ蛋白表达水平升高、P62蛋白表达水平降低(P均<0.05)。结论泛素连接酶MuRF2可减轻缺氧所致的心肌细胞损伤,其机制可能与抑制心肌细胞线粒体自噬有关。

不同剂量右美托咪定与芬太尼对无痛胃肠镜检查患者麻醉效果的影响

目的 探讨不同剂量右美托咪定与芬太尼对无痛胃肠镜检查患者麻醉效果的影响。方法 选取某院2021年1月~2022年12月期间无痛胃肠镜检查患者253例,按照随机数字表法分为三组:a组(84例)、b组(84例)、c组(85例),a组给予芬太尼联合0.25μg/kg右美托咪定诱导麻醉,b组给予芬太尼联合0.5μg/kg右美托咪定诱导麻醉,c组给予芬太尼联合0.75μg/kg右美托咪定诱导麻醉,观察比较三组不同时间点生命体征变化、芬太尼用量、麻醉起效时间及苏醒时间、镇静效果以及不良反应发生情况。结果 麻醉诱导前(T_(0)),a组、b组、c组平均动脉压(MAP)差异均无统计学意义(P>0.05),麻醉后5 min(T_(1))、开始检查时(T_(2))、结束检查时(T_(3)),c组MAP均低于a组、b组(P<0.05);T_(0)~T_(3)时,a组、b组、c组血氧饱和度(SPO2)比较差异均无统计学意义(P>0.05);b组、c组芬太尼用量均较a组低,麻醉起效时间均较a组短,且a组、b组麻醉苏醒时间均较c组短(P<0.05);T_(1)~T_(3)时,b组、c组Ramsay镇静评分均较a组高,且c组Ramsay镇静评分较b组高(P<0.05);b组、c组不良反应发生率均较a组低(P<0.05)。结论 右美托咪定与芬太尼用于无痛胃肠镜检查患者中,可以有效稳定患者生命体征,且0.5μg/kg右美托咪定麻醉效果最佳,提高了镇静效果,减少了不良反应的发生。

新时代背景下高校财务信息化建设研究

当前高校财务业务活动的多样性和复杂性对高校财务信息化建设提出了更高的要求和挑战,信息技术的迅速发展为解决这些要求和挑战提供了方式方法。高校财务信息化建设的重要性愈加凸显,它不仅能够提升高校财务管理的效率和准确性,还能为决策提供重要的数据支持。在这一背景下,本文将进一步探讨高校财务信息化建设的必要性以及存在的问题,深入研究高校财务信息化建设在新时代的适应性,探索信息化建设的关键问题和路径,对推动高校财务的信息化进程,提高高校财务管理的效能和水平具有重要的理论和实践意义。

光致动态可调太赫兹超材料吸收器

设计了一种具有偏振不敏感和广角吸收的光激发可切换单/双波段太赫兹超材料吸收器.通过调制嵌入谐振器中的光敏砷化镓的电导率实现功能切换,并提取不同砷化镓电导率下的表面电流,对超材料吸收器的吸收机理进行了物理解释.结果表明,该吸收器可以实现从0.568和1.442 THz的双波段吸收(吸收率为99.08%和99.56%)到0.731 THz的单波段吸收(吸收率为95.43%)的切换.该器件强度调制深度为61.4%,频率调谐带宽为60.6%,可制作太赫兹频段的强度调制器和频率选择吸收器.此外,所提出的吸收器对横电(TE)和横磁(TM)偏振波都具有与偏振无关的广角吸收.可调谐超材料吸收器的实现为成熟的半导体技术以及有源太赫兹调制器和开关的潜在应用提供了机会.

头皮衰老与雄激素性脱发

雄激素性脱发(AGA)是脱发中最常见的类型之一,以渐进性毛囊微型化为主要特征。结合临床观察及现代医学理论,笔者认为雄激素性脱发患者存在头皮衰老现象,将其中医病机关键概括为肾虚精亏与痰瘀阻滞。本文遵循“补肾填精,活血化浊”的治疗方法,根据不同病程时期特点,提出了初期侧重活血化浊以固脱,后期侧重补肾养血以生发的治疗角度。

指向科学思维培养的化学可视化教学策略——数字化实验视角

科学思维是义务教育化学课程标准中核心素养的重要组成部分,在科学思维视域下开展课堂教学,充分发挥化学学科的育人价值,有着重要的实践意义。在构建化学概念、探究“有反应无明显现象的化学反应”以及定量实验中融入数字化实验,实现化学反应过程可视化,实验证据多元化,构建“学科融合”“多角度理解化学反应”“思维发展”的新型课堂,在传统实验、数字化实验和结构化设计方面达成知识结构化和素养化的转换。

园林造园艺术特点及造景手法分析——以天津市北宁公园为例

中国园林是中华文化传承的重要部分,也是地区特色景观的重要标志。我国古典园林造园手法对现代园林景观设计和整体布局有着重要的影响。以北宁公园为例,分析宁园历史演变,探究其空间格局,并对其的造景手法进行分析,体会其精巧之处,领会北宁公园中的山野情趣和皇家园林风范,以求为现代园林景观建设提供借鉴参考。

FluMag-SELEX技术体外筛选识别氯胺酮的DNA适体

目的利用FluMag-SELEX技术筛选出能特异性识别氯胺酮的DNA适体。方法体外合成78bp的随机ssDNA文库,氯胺酮作为靶分子,表面修饰甲苯磺酰基的磁珠作为固相载体筛选特异性识别氯胺酮的适体。经过13轮筛选后进行DNA克隆测序,并进行一、二级结构分析。通过对荧光强度的分析检测适体的亲和性、特异性和Kd值。结果获得2条ssDNA适体Apt#4和Apt#8,能够特异性地与靶分子氯胺酮结合,Kd值分别为0.59和0.66μmol/L。二级结构预测以茎环和G-四聚体为主,茎结构可能是适体结构稳定的基础,环和G-四聚体结构可能是与氯胺酮特异性结合的关键。结论 FluMag-SELEX技术可以较好地提高适体的筛选效率,得到能特异性识别氯胺酮的DNA适体,有望用于氯胺酮的快速检测。

五味子色素提取及稳定性研究

目的:研究五味子色素的提取工艺条件及色素稳定性。方法:在单因素实验基础上利用L9(34)正交试验确定最佳提取工艺;以吸光度值的变化为指标,研究色素稳定性。结果:最佳提取工艺为∶料液比1∶25,乙醇浓度45%,浸提温度70℃,浸提时间40min;五味子色素光稳定性较好;在酸性、弱碱性条件下稳定,当pH≥12时出现颜色变化;对糖、氯化钠有一定稳定性;抗坏血酸和Na2SO3对色素影响较小;苯甲酸钠和H2O2对色素影响显著;金属离子Ca2+、Mg2+、Na+对色素无明显影响,Fe2+、Cu2+、Al3+对色素影响显著。

可再制造的矿冶零部件剩余寿命评估

为实现矿冶设备零部件资源的最优化利用,以零部件失效数据和历史服役工况数据为基础,在常见的6种寿命分布类型的适用情况、特征和规律的基础上,运用数理统计的方法对大量实时数据及运行记录数据进行分析得出最优分布,以多元回归分析模型来评估零部件的剩余使用寿命,为企业实现废旧零部件的再利用、再制造及再循环提供解决方案。并以曲轴为例,验证了上述寿命预测模型的可行性。

线粒体泛素连接酶1对大鼠心肌细胞H9C2缺氧损伤的实验研究

目的 观察线粒体泛素连接酶1(mitochondrial ubiquitin ligase 1,Mul1)对心肌细胞缺氧损伤的影响。方法构建大鼠源Mul1基因过表达和敲减的慢病毒载体,分别转染大鼠心肌细胞H9C2。将阴性对照组、Mul1过表达组、Mul1过表达空载体组、Mul1敲减组和Mul1敲减空载体组细胞分别进行常规培养(5%CO_(2)、21%O_(2))和缺氧培养(5%CO_(2)、94%N_(2)、1%O_(2))后,利用倒置显微镜观察各组细胞形态变化,利用CBM智能细胞检测平台动态观察细胞存活率,透射电镜观察心肌细胞超微结构。结果 与相应的各常规培养组相比,缺氧培养后各组H9C2细胞存活率均下降、细胞形态明显改变,细胞器受到损伤。缺氧培养后,与阴性对照组和Mul1过表达空载体组相比,Mul1过表达组细胞状态差,细胞存活率下降(P均<0.05);Mul1敲减组与阴性对照组和Mul1敲减空载体组相比细胞状态较好,存活率上升(P均<0.05);电镜观察结果显示,与阴性对照组和Mul1过表达空载体组相比,Mul1过表达组细胞结构损伤加重,大部分线粒体嵴断裂或溶解呈空泡状、胞质内容物明显减少;Mul1敲减组细胞结构损伤程度较阴性对照组和Mul1敲减空载体组减轻,大部分线粒体结构正常,偶见嵴断裂现象。结论 Mul1可加重缺氧诱导的心肌细胞结构损伤,使心肌细胞存活力下降。

肿瘤细胞能量代谢特点的研究进展

近年来,肿瘤细胞能量代谢的研究越来越受到关注。在细胞能量代谢环节,肿瘤细胞通常表现出一种加剧的新陈代谢。这种新陈代谢的重编程,即使在氧气充足的条件下,肿瘤细胞仍倾向为糖酵解方式供能,即Warburg效应。当然,线粒体氧化磷酸化(oxidative phosphorylation,OXPHOS)途径供能也发挥重要的作用,很多研究显示出线粒体能够适应癌症的条件(“线粒体可塑性”)。不同肿瘤的能量代谢途径表现出很大的差异,癌细胞在很大程度上同时依赖有氧糖酵解和线粒体OXPHOS;即便同一种肿瘤不同细胞型在微环境中也表现出依赖不同的供能方式;大多数癌细胞都表现出在有氧糖酵解和OXPHOS间的转变,这中间也具有复杂性。因此,进一步了解肿瘤细胞的能量代谢特点显得至关重要。本文就肿瘤细胞能量代谢特点进行综述,为今后的研究和临床治疗提供重要参考。

适配体在毒品毒物分析中的应用

适配体是体外合成的能与蛋白质、其他小分子物质、有机离子等等各种配体特异结合单链DNA/RNA,是由SELEX(体外指数富集配体系统进化技术)技术筛选得到,适配体具有对靶标的高特异性和亲和性、合适的化学稳定性、无免疫原性和毒副作用的优点。利用适配体的这些优越性是得适配体可以作为生物识别分子元件应用于传感器及分析试纸中,进而可以快速高效的检测毒物毒品。为了大大提高办案的效率,为维护法治、打击犯罪提供更好的技术支持,通过介绍了一种基于适配体(aptamer)为识别元件的高选择、高灵敏、快速的毒物毒品检验方法。

火电机组实时数据分析与研究

本文以火电机组实际运行数据为基础,通过稳态检测,滤波处理,参数相关性分析等手段,形成多重数据验证流程,实现对实时数据正确性与否的验证。验证后的数据为实时耗差分析等SIS平台模块中数据的应用提供研究基础。最后,通过工程项目实际应用检验该数据验证过程的可行性与实用性。

短期自愿运动对高脂血症小鼠脑出血后内源性神经干细胞的影响

目的探究短期自愿运动对高脂血症小鼠脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)后神经功能修复和内源性神经干细胞(endogenous neural stem cells,eNSCs)激活的影响。方法4月龄Nestin-CreERT2:tdTomato转基因C57BL/6雄性小鼠,8周高脂饮食(high fat diet,HFD)喂养后,立体定位仪辅助下纹状体注射Ⅳ型胶原酶,构建ICH模型。ICH后2 d小鼠开始自主转轮运动,连续7 d;在运动第1、3、5、7天采用NSS、Beam walking实验评估小鼠神经功能;脑组织免疫荧光染色观察侧脑室下区Nestin、Ki67和DCX阳性细胞数量,评估eNSCs激活。结果①与正常饮食(chow diet,CD)组相比,HFD组小鼠8周后体质量、血糖、血清脂质代谢相关因子浓度明显升高,肝脏组织Nile Red染色阳性细胞明显增加。②与假手术(Sham)组相比,ICH组小鼠NSS评分明显升高、Beam walking距离缩短。运动(Ex)组小鼠NSS评分较非运动组下降、Beam walking距离增加,7 d后与Sham组无统计学差异。③与Sham组相比,ICH组小鼠Nestin^(+)/Ki67^(+)细胞数量减少,Nestin^(+)/DCX^(+)细胞数量增加。运动组小鼠Nestin^(+)/Ki67^(+)及Nestin^(+)/DCX^(+)细胞数量均较Sham组明显增加,运动组间无统计学差异;与ICH组相比,运动后(ICH^(+)Ex)Nestin^(+)/DCX^(+)细胞数量差异无统计学意义。结论损伤急性期启动短期自愿运动可改善高脂血症小鼠ICH后神经功能,促进eNSCs激活,为进一步开发基于eNSCs的ICH加速康复策略提供了新的思路。

《企业产品成本核算制度(试行)》分析

2013年8月16日,我国颁布《企业产品成本核算制度(试行)》,本制度自2014年1月1日起施行,执行本制度的企业不再执行《国营工业企业成本核算办法》。本文首先对会计准则、核算制度和核算办法的进行概念辨析,然后,以确认、计量和报告为基础,在企业产品成本核算范围、核算对象、核算范围和项目、费用归集分配和成本结转等方面对《企业产品成本核算制度(试行)》详细分析,同时,与《国营工业企业成本核算办法》进行比较。

沉默CD147对前列腺癌LNCaP细胞糖酵解的影响

目的:探讨CD147对前列腺癌(PCa)LNCaP细胞糖酵解的影响,为PCa临床诊断和治疗提供新的分子标志物和靶点。方法:采用慢病毒感染系统建立沉默CD147的细胞作为LNCaP/shCD147组,同时设立阴性对照组(LNCaP/scramble组)。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组LNCaP细胞中CD147 mRNA表达水平,试剂盒检测2组LNCaP细胞中乳酸(LA)、丙酮酸(PA)和腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)浓度及2组LNCaP细胞中丙酮酸激酶(PK)、6-磷酸果糖激酶1(PFK1)和己糖激酶(HK)酶活性,Western blotting法检测2组LNCaP细胞中CD147、HK2、肌肉磷酸果糖激酶(PFKM)和丙酮酸激酶M2(PKM2)蛋白表达水平。结果:与LNCaP/scramble组比较,LNCaP/shCD147组细胞中CD147 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),表明成功构建沉默CD147的PCa LNCaP细胞模型。与LNCaP/scramble组比较,LNCaP/shCD147组细胞中LA、PA和ATP浓度明显降低(P<0.05或P<0.01)。与LNCaP/scramble组比较,LNCaP/shCD147组细胞中PK、PFK1和HK酶活性明显降低(P<0.05或P<0.01)。Western blotting法检测,与LNCaP/scramble组比较,LNCaP/shCD147组细胞中HK2蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:沉默CD147通过调节糖酵解代谢产物、限速酶活性和相关蛋白表达水平抑制LNCaP细胞糖酵解过程。

SELEX技术筛选甲基苯丙胺适配子

目的利用SELEX筛选甲基苯丙胺适配子,并初步鉴定获得甲基苯丙胺的适配子。方法体外合成全长为76 bp的随机ssDNA文库,以甲基苯丙胺完全抗原偶联到溴化氰活化琼脂糖上,作为固相靶分子对随机ssDNA文库进行SELEX筛选。利用SPR测定适配子和甲基苯丙胺的结合率和特异性,通过MFOLD分析软件对适配子进行二级结构预测和结合位点分析。结果经过10轮筛选后,甲基苯丙胺适配子的结合率由88.3 RU上升到113.7 RU,表明特异性适配子得到逐步富集。获得的适配子进行测序,得10个序列,二级结构均为茎-环结构,可能是适配子和甲基苯丙胺结合的结构基础。结论本研究使用SELEX技术筛选小分子毒品甲基苯丙胺适配子的方法,获得与甲基苯丙胺特异性结合的适配子序列,揭示了适配子与甲基苯丙胺结合的基本结构,为制备特异性甲基苯丙胺检测试剂盒奠定了基础。