新生SD大鼠大脑皮质神经元的原代培养及鉴定

背景:培养神经元的质量是研究中枢神经系统疾病的关键所在,但培养方法一直没有统一的标准。目的:探究取材部位及阿糖胞苷处理对原代培养神经元活性、纯度及成熟度的影响。方法:选取新生24 h内的SD乳鼠,取大脑皮质表面2.0-3.0 mm处细胞,培养后24,48,72 h,用5μmol/L或10μmol/L阿糖胞苷处理48 h;另取全部大脑皮质细胞,培养后48 h用5μmol/L阿糖胞苷处理48 h。培养至第7天,倒置显微镜下观察细胞形态,采用CCK-8法检测阿糖胞苷对神经元活性的影响,免疫荧光和Western blot检测神经元的纯度及成熟度。结果与结论:①倒置显微镜:10μmol/L阿糖胞苷24,48,72 h组神经元密度分别低于同时间下的5μmol/L阿糖胞苷组,该6组神经元突起相互之间均可连接成紧密的网状结构,神经元胞体丰满并充满折光特性;全皮质组细胞密度低于正常对照组,并可明显观察到非神经元;②CCK-8检测:各阿糖胞苷组细胞活性均低于正常对照组(P<0.001),10μmol/L阿糖胞苷24,48,72 h组神经元活性低于同时间下的5μmol/L阿糖胞苷组(P<0.05),5μmol/L阿糖胞苷24 h组神经元活性低于5μmol/L阿糖胞苷48,72 h组(P<0.01);③免疫荧光染色:各阿糖胞苷组神经元纯度大于正常对照组、全部皮质组(P<0.001),各阿糖胞苷组神经元纯度无差异;④Western blot检测神经元特异性烯醇化酶蛋白表达:各阿糖胞苷组神经元成熟度高于正常对照组(P<0.05),其中以5μmol/L阿糖胞苷48 h组成熟度最高;⑤结果表明:取新生24 h内大鼠大脑皮质表面2.0-3.0 mm处皮质,培养后48 h加入5μmol/L阿糖胞苷处理得到的神经元活性、成熟度和纯度较好。

大脑海马沟立体定位数据集的构建及投影回归分析

目的:构建大脑海马沟基于连合间径(AC-PC)定位体系中的立体定位数据集及其平面投影回归方程。方法:将30名健康成年人颅脑横断层MRI数据经格式转化导入Photoshop CS软件包,经过严格的图像配准,建立以AC-PC中点为原点的三维立体坐标系,获取海马沟在脑MRI冠状面图像上的三维立体坐标值,以海马沟的最外侧点为起始点,记录该点坐标的X、Z值,其在软件的信息面板中直接显示,Y值为该图像所在层面与AC-PC层面间隔的层数乘以层间距,所有取样点坐标值构成大脑海马沟在三维坐标系中的立体定位数据集。利用SPSS25.0对所获取的取样点数据进行统计处理,求解其投影回归方程。结果:成功构建大脑海马沟在在三维坐标系中的立体定位数据集及其在横断、矢状、冠状面上的投影回归方程。冠状面上Z值对X值回归方程,右侧:Z=-46.379-0.302X(P<0.05),左侧:Z=-49.512+0.425X(P<0.05);横断面上Y值对X值回归方程,右侧:Y=-0.380-0.198X(P>0.05),左侧:Y=2.982+0.106X(P>0.05);矢状面上Z值对Y值回归方程,右侧Z=-38.501+0.416Y(P<0.01),左侧:Z=-36.793+0.326Y(P<0.01)。结论:大脑海马沟横断、冠状及矢状面的三维坐标值间的相关关系较不密切。构建的海马沟立体定位数据集可为海马区域病灶定位及该区域脑立体定向手术的靶点确定、手术路径规划提供精确的影像解剖学数据。

科研辅助教学在组织学教学中的探索——以构建大鼠脊髓损伤模型为例

目的:以构建大鼠脊髓损伤模型为例,探讨科研辅助教学模式在组织学教学中的应用。方法:采用方便抽样方法选取我校2020级临床医学专业52名大一年级本科生为研究对象,随机分为常规教学组和科研辅助教学组,每组26名。常规教学组采用传统的课堂讲授加实验教学方法;科研辅助教学组在实验教学中加入科研成分,提供更深入的研究方法和实验设计,以培养学生的科研能力。比较2组学生组织学课程理论考核和实践技能考核成绩。采用学生对实验动物模型构建教学的主观评价问卷,由学生对教学方案在心理素质锻炼、技术能力提升、理论知识拓展3个维度的优势进行主观评分。比较2组学生的科研能力评分。采用Pearson相关分析法分析科研能力评分与综合成绩的相关性。结果:科研辅助教学组学生的平时成绩、综合成绩显著高于常规教学组(P<0.05)。科研辅助教学组的学生在挑战性任务适应能力、解决问题决心和毅力、团队合作沟通技巧、文献阅读、实践经验与理论知识结合、课程实际应用价值和教材教学资源创新性方面评分均高于常规教学组(P<0.05)。科研辅助教学组的学生在实验设计能力、文献综述背景知识、沟通报告能力、循证医学意识和科研能力总分方面的评分均高于常规教学组(P<0.05)。学生的科研能力总分与综合成绩呈正相关(r=0.716,P<0.01)。结论:科研辅助教学在组织学教学中的应用显著提高了学生的科研能力,科研能力的提高可以促进理论知识的掌握和实验技能的提高。

脂多糖活化星形胶质细胞并下调其内向整流性钾离子通道(Kir4.1)的表达

目的探讨脂多糖(LPS)对星形胶质细胞的活化作用及内向整流性钾离子通道4.1(Kir4.1)表达的影响。方法分离培养新生SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞;LPS处理或者和白细胞介素1受体拮抗剂(IL-1ra)处理培养的细胞,MTT法检测细胞活力,免疫细胞化学技术检测星形细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,ELISA检测细胞培养上清中的IL-1β的水平,实时定量PCR法检测星形胶质细胞IL-1β和Kir4.1 mRNA的表达情况。结果 LPS促进星形胶质细胞的活化具有浓度和时间依赖性。LPS可促进星形胶质细胞IL-1β的分泌和IL-1βmRNA的表达,下调Kir4.1 mRNA的表达;与LPS组相比较,IL-1ra可以有效对抗上述两结果。结论 LPS可诱导培养的星形胶质细胞活化;LPS下调星形胶质细胞Kir4.1 mRNA表达可能与IL-1β有关。

IL-1β促进星形胶质细胞增殖并下调Kir4.1的表达

目的探讨白细胞介素1β(IL-1β)对星形胶质细胞增殖及其内向整流性钾离子通道4.1(Kir4.1)表达的影响。方法体外培养新生SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞;用IL-1β或者和白细胞介素1受体拮抗剂(IL-1Ra)处理培养的星形胶质细胞,流式细胞术检测IL-1β对星形胶质细胞细胞周期的影响;荧光定量PCR检测IL-1β对星形胶质细胞Kir4.1 mRNA表达的影响;Western blot法检测IL-1β对星形胶质细胞Kir4.1蛋白表达的影响。结果 IL-1β可以以剂量和时间依赖的方式促进星形胶质细胞的增殖。用10 ng/m L的IL-1β处理星形胶质细胞24 h后,Kir4.1 mRNA和蛋白的表达均下降,IL-1Ra可以有效对抗由IL-1β引起的Kir4.1 mRNA和蛋白的表达下降;Kir4.1 mRNA和蛋白的表达下调也能因IL-1β的去除而部分被恢复。结论 IL-1β可以促进星形胶质细胞的增殖,IL-1β是影响星形胶质细胞Kir4.1表达的关键因素。

翻转课堂在组胚教学中应用的可行性分析

在网络技术飞速发展的当今时代,源于美国的翻转课堂教学模式打破了传统的教学理念,在国内大中小各级教育机构中掀起了一场教育改革新浪潮。本文从组织学与胚胎学的课程特点、学生素质、课程的传统教学模式存在的问题、翻转课堂的优势等方面进行分析,建议可在部分章节或实验课内容尝试采用翻转课堂教学模式。

学习过程评价对组织学实验考核成绩的影响

在组织学实验教学过程中加入学习过程评价环节,采用期末切片考核和理论考核方式,对该教学模式与传统教学进行比较。结果显示,该教学模式的实验班切片考核和理论考核成绩均高于传统教学班(P<0.05)。学习过程评价环节的加入,不仅可以提高实验教学效果,也可以加深学生对理论知识的理解。

新生大鼠大脑皮层神经元原代培养与鉴定

目的：建立一种较理想的新生大鼠大脑皮层神经元原代培养方法。方法：新生大鼠大脑皮层通过胰酶消化获取单细胞悬液,用台盼蓝染色鉴定活性后种板培养;培养第3-4天加入阿糖胞苷纯化神经元;最后用甲苯胺蓝染色检测尼氏体进行鉴定。结果：实验获取细胞存活率高;在体外培养条件下细胞生长旺盛,培养第6-7天,细胞胞体较大,突起粗,分支多,突起交织成网,并能形成典型的神经细胞网络;培养第10-14天,检查有尼氏体细胞占90%以上。结论：该培养技术是大鼠皮层神经元体外培养的一种较理想的方法。

PKC对原代培养神经元NF-кB表达的影响

用蛋白激酶C(PKC)刺激剂佛波醇酯(PMA)和PKC抑制剂Rottlerin处理培养神经元,RT-PCR法检测神经元NF-кBp65mRNA的表达;用PMA和NF-кB抑制剂TPCK处理培养神经元,流式细胞术AnnexinV/PI法检测细胞早期凋亡率。观察PKC对原代培养神经元核转录因子kappaB(NF-кB)表达的影响,探讨PKC参与缺血性神经元损伤的可能机制。结果显示PKC可促进NF-кB的表达;NF-кB可诱导培养神经元的早期凋亡。由此可以得出PKC激活参与神经元的损伤可能是通过引起神经元内NF-кB的表达而实现的。

脂多糖对原代培养神经元核转录因子-κB表达的影响

目的:观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对新生大鼠原代培养皮层神经元的神经毒性以及核转录因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)表达的影响,探讨NF-κB的信号通路在LPS损伤神经元过程中所起的作用。方法:体外培养的新生SD大鼠皮层神经元,随机分为对照组、LPS组、N-甲苯磺基-L-苯乙胺酰氯甲基酮(TPCK)预处理后再加入LPS组,后两组均用LPS处理48h。检测各组培养液中乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)的含量及观察各组神经元的存活率,使用RT-PCR法观察NF-κB的表达。结果:LPS作用后神经元存活率减少,LDH释放量及NF-κB的表达增加。经TPCK预处理的神经元LDH释放量及NF-κB的表达明显低于LPS组,而神经元存活率显著高于LPS组。结论:LPS能引起原代培养皮层神经元的损伤,而TPCK可明显减弱LPS对原代培养皮层神经元的损伤作用,提示NF-κB参与了LPS对原代培养皮层神经元的损伤作用。

留学生《组织胚胎学》教学实践与探索

目的:探索如何实现留学生《组织胚胎学》的教学目标。方法:通过分析留学生特点、教师自身基本功的加强、教学方法的创新和教学手段的完善4方面来提高留学生《组织胚胎学》教学效果和教学质量。结果:创新教学模式和完善教学手段能激发留学生的学习积极性和主动性,提高了学习效率。结论:在探索不同于国内本科生的教学模式和创制行之有效的教学手段下,不但实现了预定的教学目标,也达到了提高教师自身素质的效果。

基于翻转课堂的组织学实验课程设计及效果评价

目的探究翻转课堂在组织学实验课中的适用性及其效果。方法通过翻转课堂在组织学实验课教学过程中尝试,从课程设计、效果评价进行项目构建,并对实施翻转课堂教学模式和传统教学模式的学生从问卷调查、实验考核和理论考核三方面进行效果评价。结果翻转课堂教学模式与传统教学模式小比,大部分学生对新的教学模式表示满意,实验和理论成绩均有统计学差异(P<0.05)。结论翻转课堂适用于组织学实验课教学,可锻炼学生多种能力,培养学生终身学习能力。

蛋白激酶C对原代培养神经元诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的:探讨蛋白激酶C(PKC)参与缺血性神经元损伤的可能机制。方法:用PKC刺激剂佛波醇酯(PMA)处理培养神经元后,MTT比色分析法检测细胞毒性率;免疫细胞化学法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达;细胞DNA片段化电泳检测细胞凋亡。结果:PMA可明显增加培养神经元的毒性率及iNOS表达的阳性细胞数,iNOS的表达与神经元的毒性率呈正相关(rs=0.928,P<0.001),PMA作用培养神经元后出现了明显的DNA梯形条带。结论:PKC激活参与神经元的损伤可能是通过引起神经元内iNOS的表达而实现的。

我校组织学与胚胎学试卷分析

考试是教学过程中一个必不可少的重要环节.通过对考绩、考题、考卷的质量分析,可以了解教师的教学质量、学生的学习情况和学院的整体办学质量,对今后如何改善教学及管理方法,提高教学及管理质量提供极为重要的依据.现就我院2002年(春)检本(37人)、护本(80人)、医本(269人)三系期末理论考试考绩、考卷分析如下.

选择性激动黑皮质素4型受体(MC4R)通过HMGB1/TLR4/NF-κB信号途径对抗大鼠脓毒症致急性肝损伤

目的观察选择性激动黑皮质素4型受体(MC4R)对脓毒症致急性肝损伤大鼠的影响。方法 64只雄性SD大鼠随机分假手术组(假手术后用PBS处理)、盲肠结扎穿孔(CLP)组(采用CLP建立脓毒症模型)、Ro27-3225处理组(CLP后用Ro27-3225处理)和Ro27-3225假手术对照组(假手术后用Ro27-3225处理),每组16只(10只大鼠观察术后一般状态和72 h生存率,另外6只大鼠于术后24 h采集血液及肝组织标本)。各组分别于术后30 min腹腔注射PBS或Ro27-3225(180μg/kg),术后24 h测定大鼠心率(HR)及平均动脉压(MAP)、大鼠血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平。动物处死后,HE染色观察肝组织病变,反转录PCR检测肝组织中Toll样受体4(TLR4)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)和caspase-3 mRNA水平,免疫组织化学染色检测肝细胞中核因子κB(NF-κB)p65的表达,并分析NF-κB p65核阳性率。结果与假手术组相比,CLP组大鼠72 h生存率和MAP降低,血清中AST和ALT水平明显升高,肝索排列紊乱,肝细胞水肿,有明显炎性细胞浸润,肝组织中TLR4、HMGB1和caspase-3 mRNA水平明显升高,肝细胞中NF-κB p65核阳性率明显升高。与CLP组相比,Ro27-3225处理组大鼠72 h生存率和MAP明显升高,血清中AST和ALT水平明显降低,肝组织结构损伤明显减轻,肝组织中TLR4、HMGB1和caspase-3 mRNA水平降低,肝细胞中NF-κB p65核阳性率明显降低。结论脓毒症能引起肝损伤,选择性激动MC4R可能通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号途径,减轻炎症反应,降低脓毒症引起的肝损伤。

系统性红斑狼疮患者外周血CD4^+和CD8^+T细胞PD-1的表达和意义

目的探讨程序性死亡分子1(PD-1)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD4^+和CD8^+T细胞上的表达及临床意义。方法应用流式细胞仪检测51例SLE患者和38例健康对照者外周血T细胞亚群表面PD-1表达水平,比较SLE稳定组、活动组和健康对照组以及狼疮肾炎组和无狼疮肾炎组之间CD4^+和CD8^+T细胞表面PD-1表达的百分比,并分析其与临床表现及实验室检查数据的相关性。结果 SLE活动组CD4^+T细胞PD-1表达水平高于健康对照组和不活动组,差异均有统计学意义(P<0.05)。SLE活动组、稳定组CD8^+T细胞PD-1表达水平均高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。狼疮肾炎患者CD4^+PD-1^+和CD8^+PD-1^+T细胞分别高于无狼疮肾炎患者(P<0.01)。SLE患者中抗dsDNA抗体、抗Sm抗体、抗核小体抗体阳性组外周血CD4^+和CD8^+T细胞PD-1表达水平均高于对应阴性组。SLE患者CD4^+和CD8^+T细胞PD-1表达百分率与SLE疾病活动度指数(SLEDAI)、尿蛋白定量呈正相关,与补体C3呈负相关。结论 SLE患者外周血CD4^+和CD8^+T细胞PD-1表达异常,与SLEDA1和自身抗体产生有明确的相关性。

甘草酸调节MRL/lpr狼疮小鼠的免疫功能及机制

目的探讨甘草酸对MRL/lpr狼疮小鼠免疫功能的影响及其机制。方法 MRL/lpr狼疮小鼠随机分为狼疮对照组、1.5 mg/kg地塞米松处理组、20 mg/kg甘草酸处理组、40 mg/kg甘草酸处理组,每组10只;野生型正常对照组C57BL/6小鼠10只。采用ELISA检测小鼠血清中炎症因子白细胞介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)含量;流式细胞术检测各组小鼠脾脏组织中Th1细胞/Th2细胞比例;Western blot法检测各组小鼠脾脏相关蛋白GATA结合蛋白3(GATA3)、T细胞表达的T盒(T-bet)、磷酸化Janus激酶3(p-JAK3)、JAK3、磷酸化的信号转导子与转录激活子3(p-STAT3)、STAT3、磷酸化核因子κBp65(p-NF-κBp65)、NF-κBp65、磷酸化NF-κB抑制蛋白α(p-IκBα)、IκBα蛋白的表达。结果甘草酸能显著降低MRL/lpr狼疮小鼠血清IL-4、增加IFN-γ含量;减少Th2细胞、增加Th1细胞,Th1细胞/Th2细胞比值显著升高;并能显著抑制GATA3、p-JAK3、p-STAT3、p-NF-κB、p-IκBα表达,增加T-bet表达。结论甘草酸调节MRL/lpr狼疮小鼠免疫功能。

过量维A酸致昆明小鼠腭裂动物模型的建立及意义

目的:建立维A酸诱导的发生率较高、易于获得并可用于腭裂发生机制研究的动物模型。方法:采用致畸物全反式维A酸(atRA)作用于昆明小鼠(对照组采用等剂量溶剂),观察不同剂量和不同给药时间的胚鼠腭裂畸形发生率及腭部组织的光镜结构特点,确定诱导腭裂发生的最佳作用条件。结果:在孕10天给予80 mg/kg剂量atRA诱导昆明小鼠腭裂发生率最高为100.0%(P<0.01),为理想的腭裂动物模型,光镜结果显示,atRA诱导的腭裂为小腭。结论:成功建立了atRA致腭裂发生分子机制研究的动物模型,为进一步研究腭裂畸形的分子机制奠定了基础。

显微数码互动实验室在组织学实验教学中的应用效果

使用显微数码互动实验室和显微微观实验室进行组织学实验教学,采用实验考核和理论考核方式对两种不同教学手段的教学效果进行比较。显微数码互动实验室教学班实验考核和理论考核成绩均高于显微微观实验室教学班(P<0.05)。显微数码互动实验室应用于组织学实验教学,能够让学生在有限的课堂时间内全面掌握组织切片的结构并能及时加深对理论内容的理解。

知识竞赛在组织学与胚胎学教学中的应用尝试

组织学与胚胎学是一门重要的医学基础课程,其作为一门形态学科,内容相对枯燥乏味,大一新生在学习过程中往往难以把握知识要点,因此尝试在常规教学基础上开展知识竞赛活动来进行教学互动,有利于激发学生的学习兴趣,提高教学质量,促进教学相长。