中性粒细胞趋化因子3可影响神经干细胞的存活和增殖

背景:课题组前期研究首次发现骨髓基质细胞可以分泌中性粒细胞趋化因子3,且在骨髓基质细胞调控神经干细胞分化为神经元的过程中中性粒细胞趋化因子3的表达上调1.5倍,提示中性粒细胞趋化因子3可能具有促进神经干细胞增殖与分化的作用。目的:观察中性粒细胞趋化因子3对新生大鼠海马来源神经干细胞存活和增殖的影响。方法:体外分离培养新生SD大鼠海马神经干细胞,将培养3代的神经干细胞分为对照组和中性粒细胞趋化因子3组,通过MTS法检测细胞存活率,细胞生长曲线及活/死细胞染色观察细胞存活及增殖情况,通过免疫荧光染色法及Real-time PCR检测神经干细胞中Nestin的表达来观察神经干细胞增殖情况。结果与结论:①随着中性粒细胞趋化因子3质量浓度从1μg/L增加至20μg/L,神经干细胞存活率逐渐增加,当质量浓度为10μg/L时,神经干细胞存活率最高且细胞活力最好,再增至20μg/L时,神经干细胞存活率无显著增加;②中性粒细胞趋化因子3组Nestin染色阳性率明显高于对照组(P<0.05);③中性粒细胞趋化因子3组的Nestin mRNA表达量明显高于对照组(P<0.05);④结果表明,中性粒细胞趋化因子3对海马来源神经干细胞具有促进存活和增殖的作用。

艾司西酞普兰体外对大鼠海马神经干细胞存活和增殖的影响

目的探讨艾司西酞普兰(ESC)体外对大鼠海马神经干细胞(NSCs)存活和增殖的影响。方法取4只新生SD大鼠两侧海马组织,将其制成单细胞悬液,加入无血清的NSCs培养基培养,将稳定传代后的海马NSCs分为对照组和ESC组,对照组仍采用无血清的NSCs培养基继续培养;ESC组中加入不同浓度(5、10、20、40μmol/L)ESC进行干预。通过MTS检测不同浓度ESC对NSCs存活率的影响,筛选最有益于NSCs存活的ESC浓度,将其用于后续试验研究。采用细胞生长曲线和台盼蓝染色观察细胞增殖和存活情况,免疫荧光染色法和RT-PCR技术检测NSCs中的巢蛋白(Nestin)表达。结果稳定传代后的神经球呈规则立体球体,神经球内大多数细胞呈Nestin染色阳性。筛选发现浓度20μmol/L ESC最有益于NSCs的存活。MTS检测显示,对照组及20μmol/L ESC组1~5 d的细胞存活率比较无统计学差异。细胞生长曲线显示,对照组及20μmol/L ESC组NSCs的生长呈持续增殖趋势,20μmol/L ESC组的细胞数目较对照组多(P<0.05),增殖速率较对照组高(P<0.05)。免疫荧光染色结果显示,20μmol/L ESC组Nestin阳性神经球个数较对照组多(P<0.05)。RT-PCR结果显示,20μmol/L ESC组Nestin mRNA表达较对照组高(P<0.05)。结论ESC体外对大鼠海马NSCs具有促进存活和增殖的作用。