2009年中俄满洲里-后贝加尔斯克口岸地区蚤类调查

本文报告了2009年8月在满洲里-后贝加尔斯克口岸地区进行鼠传疾病联合监测时的蚤类调查结果。在中俄双方口岸地区分别捕获蚤类5种285匹和8种160匹,中方蚤类的宿主多,鼠体染蚤率和总蚤指数均高于俄方。

中越河口-老街双边边境地区蚊虫比较性调查

为明确中越河口-老街双边边境地区蚊虫种类及其分布情况，2008年11月在云南省河口县及越南老街省老街市4个地点的畜圈，于夜间用电动诱蚊灯采集蚊虫，并对雌蚊进行分类鉴定。结果显示，在中国河口采集库蚊、按蚊、阿蚊、伊蚊、小蚊共5属19种678只，在越南老街采集到库蚊、按蚊、伊蚊、阿蚊、曼蚊、蓝带蚊6属20种1334只。骚扰阿蚊和三带喙库蚊是河口、老街夜间畜圈数量最多的蚊种；河口的骚扰阿蚊构成比比20年前有所增加；致倦库蚊在老街蚊虫中构成比仅次于骚扰阿蚊和三带喙库蚊，与河口不同。

温度对突变型HPV16-L_1蛋白表达的影响

目的 :探讨温度对突变型 HPV16— L1蛋白表达的影响。方法 :分别在 37℃、2 5℃诱导表达突变型HPV16 - L1蛋白 ,SDS- PAGE电冰比较表达产量。结果 :电泳结果显示 ,降低诱导温度对总蛋白量没有明显影响 ,但目的蛋白量高于常规 37℃下的产量。结论 :诱导表达时适当降低温度可提高目的蛋白表达产量。

人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1的纯化

目的 :探讨人乳头瘤病毒 16型主要衣壳蛋白 L 1的纯化方法。方法 :分别利用亲和层析和离子交换层析对重组融合蛋白 p ET30 a- 6× His- L 1进行了纯化。结果 :以包涵体形式表达的重组蛋白在变性条件下经 Ni- NTA Agarose、Q- Sepharose FF纯化 ,透析复性后均获得较高纯度 ,回收率分别为 30 %和2 9%。结论 :亲和层析和离子交换层析都是纯化重组 L 1蛋白的适宜方法 ,二者纯化效率相当。

“三江并流”自然遗产地澜沧江流域居民区蚊类多样性的空间分布格局

为探索我国西南山地居民区蚊类多样性空间分布规律与区系分异,作者于2005年7-9月应用紫外灯诱捕法对滇西北"三江并流"自然遗产地中的澜沧江流域6个纬度梯度带(24°-30°N)和5个海拔梯度带(1,000-3,500m)山地居民区的蚊类进行了调查取样。共捕获蚊类76,458只,分属于2亚科5属36种。统计分析结果显示:(1)物种丰富度随纬度的升高呈下降趋势,随海拔的升高呈先增高后降低的单峰型分布格局;(2)α多样性随纬度的升高呈先降低而后略有升高的分布格局,最高峰位于Ⅰ带(24°-25°N),而随海拔的升高呈波浪状变化,峰值分别出现在C(2,000-2,500m)和E(3,000-3,500m)带;(3)β多样性(Cody指数)随纬度和海拔的升高先减少后增加,基本形成两端高中间低的格局。两端高峰的具体地理位置分别处于南亚热带向中亚热带气候和暖温带向寒温带气候的过渡地带,说明蚊类β多样性空间分布格局、区系及物种的组成与地理环境和气候条件的变化有关;(4)从种群组成相似性聚类分析的结果来看,不同纬度、海拔梯度带间蚊类都被分为3个地域区系类型,即东洋区系、东洋与古北区系的过渡区和古北区系;(5)典范对应分析(CCA)的排序结果显示:气温和降水均影响当地蚊类多样性的空间分布格局,降水起主导作用。

云南登革4型病毒的鉴定及NS1和NS2a基因序列分析

目的对1989年8月分离自云南省盈江县蚊虫的2株登革病毒进行生物学及分子特征的鉴定,明确这两株病毒的血清型及基因型。方法蚊虫用BHK21细胞和乳鼠法分离病毒,用间接免疫荧光试验、RT-PCR等方法进行鉴定,并对这两株病毒的分子生物学特征进行分析。结果从白纹伊蚊和达勒姆阿蚊中各分离到一株病毒,分别命名为M110和M113,这两株病毒对BHK21细胞能产生明显的细胞病变,脑内接种乳鼠4d左右导致乳鼠死亡。该病毒经血凝、血凝抑制和间接免疫荧光试验提示为黄病毒。分别用黄病毒属特异引物、登革4型病毒NS1和NS2a基因片段特异引物进行RT-PCR扩增、序列测定,证实为登革4型病毒。NS1和NS2a基因序列片段分析表明,M110和M113的NS1核苷酸序列与登革4型病毒基因Ⅰ型的H241株(Y19176)同源性最高,分别为99%、98%;NS2a基因片段与H241的核苷酸序列的同源性分别为96.5%、97.1%。结论从盈江县蚊虫分离到的M110和M113病毒为登革4型病毒基因Ⅰ型,表明云南省西部边境地区在20世纪80年代发生过登革4型病毒的流行。

新疆分离的0507JS60鉴定为辽宁病毒

0507JS60是从中国新疆喀什地区采集的库蚊标本分离的病毒株,可以在C6/36细胞上稳定传代。电镜观察显示完整病毒颗粒呈球形,直径55nm(n=10),无包膜,衣壳表面壳粒结构非常清晰。基因组核酸电泳显示基因组包括12条双链RNA(Double stranded RNA,dsRNA)片段。病毒第12基因片段序列测定结果显示该片段全长760bp(GenBankID:FJ157354),具有长度为525bp的单一开放读码框(Single open reading frame,ORF),编码长度为174个氨基酸的蛋白,分子量约18.9kD。病毒第12基因片段序列比对显示与辽宁病毒(Liaoning virus,LNV)核酸序列同源性大于89,氨基酸序列同源性大于91。病毒第12基因片段系统进化分析显示该病毒与LNV病毒位于同一进化分枝内,与LNV-NE9712病毒株进化关系更接近。0507JS60经系统鉴定为LNV,这是首次在东北以外的地区分离到该病毒。

首次从云南蚊虫分离到辛德毕斯病毒及其鉴定

目的了解云南省虫媒病毒的存在和流行情况。方法2005年8月,在云南省勐海县采集蚊虫,蚊虫标本经研磨后,上清液接种BHK21细胞以分离病毒,用间接免疫荧光试验和RT-PCR等方法进行鉴定,并对病毒的分子生物学特征进行分析。结果采集到蚊虫标本9400只,其中分离到一株对BHK-21细胞能产生明显细胞病变的病毒(MX10)。该病毒经间接免疫荧光试验提示为甲病毒。用甲病毒属特异引物和Sindbis病毒E1基因特异引物对MX10病毒的RT-PCR扩增为阳性,经核酸序列测定分析证实该序列与Sindbis病毒泰国分离株(AF492770)同源性最高,为90.0%;与1987年分离自云南发热患者的YN87448株和1991年新疆按蚊分离株XJ-160的同源性分别为73.1%和72.0%。结论本次从勐海县蚊虫分离到的MX10病毒株为Sindbis病毒,并可能是Sindbis病毒的新亚型或新株系。

五种生物恐怖细菌基因悬浮芯片多重检测方法的建立

目的建立5种生物恐怖细菌的快速、高通量的基因悬浮芯片检测方法,即炭疽芽胞杆菌、鼠疫耶尔森菌、布鲁菌、土拉弗朗西斯菌和类鼻疽伯克霍尔德菌的多重检测。方法针对炭疽芽孢杆菌、鼠疫耶尔森菌、布鲁菌、土拉弗朗西菌、类鼻疽伯克霍尔德菌的特异性基因序列设计6对引物和相应的特异性探针,经多重PCR扩增并用生物素标记相应的基因片段,标记的PCR产物与包被在不同编码微球上的相应探针杂交,用悬浮芯片扫描仪检测。结果多重PCR悬浮芯片检测体系能够正确的检测和鉴定5种生物恐怖细菌,特异性好,灵敏度高,可用于恐怖样本的高通量筛查。结论建立了多重PCR基因悬浮芯片快速检测几种生物恐怖细菌的方法。

中俄双边七个口岸地区鼠传疾病病原体调查

对2007年中俄联合监测小组在中俄边境7个口岸地区捕获的鼠进行病原体检测，以了解中俄边境鼠传疾病病原体携带情况。采用RT．PCR法检测鼠肺标本中的汉坦病毒RNA。PCR方法检测鼠肝脏、脾脏中的鼠疫杆菌、土拉杆菌、莫氏立克次氏体的DNA核酸。PCR方法检测肾脏中钩端螺旋体DNA核酸。ELISA方法检测血清中出血热病毒总抗体。胶体金法检测鼠疫杆菌抗体、钩端螺旋体抗体、土拉杆菌抗体、英氏立克次氏体抗体。结果显示鼠疫杆菌抗体、钩端螺旋体抗体、土拉杆菌抗体、立克次体抗体检测结果均为阴性。鼠疫杆菌、土拉杆菌、立克次体，钩端螺旋体的DNA核酸检测结果均为阴性。汉坦病毒3例核酸阳性，出血热总抗体8例阳性。结果表明中国抚远、俄罗斯布市、哈巴3个口岸地区应该注意肾综合征出血热的防控。

中俄双边口岸地区鼠形动物监测名录

目的于2006至2009年间对中俄黑龙江、内蒙古双边11个口岸地区的鼠形动物进行本底调查。方法 5 m夹夜法、弓形夹法及电弧捕鼠器捕捉法。结果编著中俄双边11个口岸鼠形动物名录。结论该名录为中俄口岸公共卫生及鼠传疾病的防治提供本底资料。

我国蚊虫分离的一种新型胞质多形体病毒

0507BS3是从中国新疆喀什地区采集的库蚊和按蚊混合蚊标本分离的病毒株,对C6/36细胞致病变而对Ve-ro和BHK-21细胞不致病变。电镜观察显示病毒颗粒呈圆球形,直径约60nm(n=20),无包膜,单层衣壳,衣壳内有中央核。基因组核酸电泳显示基因组包括10条双链RNA(double stranded RNA,dsRNA)片段。病毒第10基因片段核酸序列测定显示该片段全长964bp(GenBankID:FJ150869),具有单一开放读码框,编码长度为275个氨基酸的蛋白,分子量约30.8kD。病毒第10基因片段核酸序列比对未发现相似的病毒核酸序列,氨基酸序列与胞质多形体病毒(Cytoplasmic polyhedrosis virus,CPV)第10基因片段编码的多形体蛋白部分区段匹配。病毒第10基因片段和已知各型CPV第10基因片段核酸序列共同进行系统进化分析显示该病毒位于独立的进化分枝,提示0507BS3病毒可能是一种新型CPV病毒。

中俄边境中部地区不同生境鼠类初步调查研究

目的调查2008年中俄边境中部地区不同生境鼠的种类组成和携带体外寄生虫的情况。方法采用夹夜法捕鼠。结果本次调查共捕获啮齿类动物4科7属计266只,同时捕获啮齿类动物的体外寄生虫蚤371只、螨133只、蜱1只。4种生境分布的鼠种的多样性不同,田地的鼠种多样性最高,其次为草地及林区,口岸的鼠种最为单一。同时,所有生境下捕获黑线姬鼠占21%,黑线仓鼠占21%,长尾黄鼠占16%,东方田鼠占13%,大林姬鼠占11%,棕背鼠平占10%,花鼠占7%及褐家鼠占1%。结论为中俄边境地区深入开展鼠类防治研究提供了重要依据。

喀什0507JS32病毒的分离鉴定

2005年7～8月,在喀什地区采集蚊虫进行病毒分离,从当地居民家畜圈采集的一组库蚊分离到0507JS32病毒,该病毒对C6/36细胞致病变,而对Vero细胞不致病变。电镜观察显示,完整病毒颗粒呈球形,直径55nm,无包膜,衣壳表面壳粒结构明显。基因组核酸电泳显示基因组为12节段双链RNA(double stranded RNA,dsRNA)。利用辽宁病毒(Liaoning virus,LNV)第12基因片段特异性引物对病毒RNA进行RT-PCR扩增,PCR产物进行序列测定,所得核酸序列进行BLAST比较,结果显示,与LNV病毒第12基因片段核酸序列同源性大于89%,证实该病毒为LNV病毒。

喀什分离到新型双链RNA病毒

2005年7～8月在喀什地区采集蚊虫13,491只,50～100只/组进行研磨,取上清在C6/36和Vero细胞上进行病毒分离,获得24个对C6/36细胞致病变而对Vero细胞不致病变的病毒。24个病毒分离物的基因组核酸电泳显示相同的12节段双链RNA(double stranded RNA,dsRNA)带型。以随机六聚体引物pd(N)6反转录制备病毒基因组cDNA,采用辽宁病毒(liaoning virus,LNV)第12基因片段特异性引物进行PCR扩增,PCR产物进行核酸序列测定,序列BLAST比对显示与GenBank中已知LNV第12基因片段核酸序列同源性超过85%,证实24个病毒分离物均为LNV。核酸序列系统进化分析显示与LNV-NE9712进化关系更接近。

血清学方法监测HPV感染和预防宫颈癌前病变价值的初步探讨

目的 初步探讨利用原核系统表达的复性L1蛋白检测抗HPV16L1抗体的血清学方法在监测HPV感染中的价值，为预防宫颈癌前病变的发生提供简便的实验室监测方法。方法 以基因重组技术表达的变性和复性突变型L1蛋白为抗原用酶联免疫法检测不同宫颈病变患者血清中的IgG抗体。结果 以变性L1(m202)蛋白为抗原检测，宫颈癌、CIN患者、正常或慢性宫颈炎妇女(对照组)血清IgG阳性率分别为16．0％、10．5％和9．1％，3者间无显著差异；HPV～DNA阳性的CIN患者阳性率为12．5％，与对照组无显著差异。以复性L1(m202)蛋白为抗原，3组阳性率分别为16．0％、35．5％和15．9％，CIN患者的阳性率显著高于宫颈癌和对照组；HPV—DNA阳性的CIN患者阳性率为32．5％，显著高于对照组。结论血清中抗L1蛋白线性抗体的检测不能反映HPV天然感染状态；以复性L1蛋白为抗原的血清ELISA检测方法可用于检测HPV感染后人体产生的针对构象表位的抗体，该检测方法可用于研究HPV血清流行病学及筛选发生宫颈癌前病变的高危人群。

中缅边境蚊虫调查研究

目的调查中缅边境3个口岸蚊虫种群数量及构成。方法灯诱法。结果在中缅边境3个采样点共采集19种蚊虫,其中三带喙库蚊是优势种群,致倦库蚊、棕头库蚊和中华按蚊数量较多。结论中缅边境蚊种丰富,优势度较高的三带喙库蚊为流行性乙型脑炎(乙脑)的媒介,联合开展中缅边境蚊虫和蚊传疾病的监测是双方共同控制传染病传入传出的关键。

穿山龙体外给药对T淋巴细胞增殖的抑制作用

应用ＭＴＴ比色法观察了穿山龙水煎醇提剂体外给药对ＣｏｎＡ刺激小鼠脾细胞增殖的影响。结果表明，此药可抑制ＣｏｎＡ诱导的脾细胞增殖反应，此种抑制作用只有在培养早期加入药物才能发生，并证明此种作用并非穿山龙的细胞毒作用引起。

医学免疫学实验教学情况的调查

通过对 33所高等医学院校医学免疫学实验教学的情况调查 ,结果是实验开设项目平均为 1 3.55项 ,其中学生独立操作项目为 7.97项 ,学生人均经费仅 2 2 .0 3元 ;所开项目以传统的实验项目为主 ,新项目不多 ,更缺少综合性和设计性项目。

HPV16主要衣壳蛋白L1在昆虫细胞中的表达及免疫学活性分析

目的 在昆虫细胞中表达HPV16L1(m2 0 2 )蛋白 ,并分析其免疫学活性。方法 构建表达载体pFASTBACHTb L1(m2 0 2 ) ,用重组病毒感染sf9细胞表达HPV16L1(m2 0 2 )蛋白 ,SDS PAGE、western blot鉴定其表达 ,亲和层析和离子交换层析纯化后的产物经鼻腔免疫Balb/c小鼠 ,竞争抑制ELISA分析免疫血清的中和活性。结果 SDS PAGE、western blot结果证明HPV16L1(m2 0 2 )蛋白的表达 ,纯化复性后产率约为 17% ,免疫血清具有竞争抑制HPV中和单抗与HPV16L1(m2 0 2 )相结合的能力。结论 昆虫细胞表达的HPV16L1(m2 0 2 )