核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性小体在肥胖相关心房颤动发病中的研究进展

近年来肥胖发病率逐渐上升,流行病学研究发现,肥胖对心房颤动(atrial fibrillation,AF)的发生和预后有重要影响[1-2]。肥胖相关AF的机制尚不明确,但二者都与炎性反应增强有关。最近,肥胖诱导AF与核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)炎性小体之间建立了联系,成为研究热点[3]。NLRP3炎性小体参与肥胖相关AF可能的机制涉及炎症、纤维化结构重构和离子通道相关电重构。

血必净注射液联合季德胜蛇药片救治蛇咬伤的临床观察

目的探讨血必净注射液联合季德胜蛇药片对蛇咬伤患者的治疗作用。方法采用回顾性病例对照分析,解放军总医院第一附属医院2006年～2010年收治的各类蛇咬伤226例患者的临床资料。结果血必净注射液联合季德胜蛇药片治疗后,患者的血液白细胞、血小板、转氨酶、血凝、心肌酶等反映脏器功能的指标明显好于单用季德胜蛇药片组;血必净注射液联合季德胜蛇药片治疗患者伤口局部炎症明显改善,血必净注射液组较对照组的平均住院天数明显缩短。结论血必净注射液与季德胜蛇药片联合应用可明显改善蛇咬伤患者全身脏器功能及伤口愈合,缩短平均住院日,提高治疗有效率。

分化抑制因子1促进血管内皮细胞增殖的机制研究

目的探讨分化抑制因子1(Id1)促进血管内皮细胞增殖的机制。方法构建p21启动子介导的报告基因p21-Luc,分别转染Eahy926细胞、Id1抑制(siId1细胞)或诱导表达(pcDNAId1)细胞、E2A抑制或诱导表达细胞,检测荧光素酶报告基因活性。提取Eahy926细胞总蛋白,分别加入Id1抗体、E12抗体和E47抗体,免疫共沉淀,以Eahy926细胞作为对照,Western blotting检测Id1、E12和E47的表达情况。分别转染siId1、pcDNAId1载体于Eahy926细胞,与正常Eahy926细胞同步化培养48h后,行细胞染色,用流式细胞仪检测细胞G1期的DNA含量。结果与Eahy926细胞比较,siId1细胞、pcDNAE2A细胞p21基因启动子介导的荧光素酶活性增强,p21蛋白表达增高(P<0.05,P<0.01);pcDNAId1细胞、siE2A细胞p21基因启动子荧光素酶活性降低,p21蛋白表达减弱(P<0.05)。免疫共沉淀结果显示,Id1免疫共沉淀细胞裂解物中同时检测到E47/E12蛋白,E47/E12沉淀物中也能检测到Id1。与正常Eahy926细胞比较,转染siId1的细胞G1期DNA含量增多,约为Eahy926细胞的3.3倍(P<0.05),细胞周期停滞,细胞增殖缓慢;而转染pcDNAE2A的细胞G1期DNA含量减少,约占正常的35.4%(P<0.05),细胞周期演进,细胞增殖加快。结论Id1可能通过与转录因子E47/E12作用,调节p21表达,进而促进血管内皮细胞增殖。

溺水急救过程中的几点问题思考

溺水的特点是发生突然、抢救困难、往往因捞救不及时而丧失抢救时机，病死率高。但溺水是可预防的急症。因此，溺水急救重在预防，强调水中、现场和院前急救，加强规范化、专业化培训的理念。目前，我国溺水急救流程没有统一的标准，缺乏多中心、大样本的权威数据。控水是否必需，C－A－B模式是否适用，液体复苏有无规范化等一系列问题，没有指南可循，期待专家共识。本文就其做一探讨。

急诊专科医师培训的思考

专科医师的培养对于急诊科乃至急诊医学的发展都至关重要。近年来，解放军总医院第一附属医院借鉴国外先进的发展模式和经验，对急诊科医师专科化和系统培养等问题进行了一系列的探索。其培训在实践上历经了以轮转为主到以专科为主的发展过程；在理念上产生了由转科医生到“急诊专科医师”的转变；在管理上实现了规范化，临床实践中实现了规模化和系统化，提高了急诊科作为窗口单位的工作效率。

siCASK重组载体构建及效应检测

目的 构建针对人CASK基因的siRNA质粒 ,建立CASK下调表达的细胞模型 ,为CASK相关的细胞信号研究奠定基础。方法 选择人CASK基因不同靶点 ,体外合成DNA模板 ,经退火后插入到pSilencer3 .1hygro载体的多克隆位点。阳性重组质粒转染ECV3 0 4细胞 ,蛋白印迹。观察siCASK对目的蛋白表达的抑制效率。结果 酶切、测序表明以pSi lencer3 .1hygro为载体的重组质粒siCASK构建成功。siCASK转染细胞后 ,能够明显抑制目的蛋白的表达。结论 成功构建了siRNA重组质粒 ,为下一步CASK功能研究奠定基础。

构建创伤修复相关基因p21表达载体

目的:构建创伤修复相关基因p21启动子驱动的荧光素酶报告基因表达载体,并评估其稳定性和可靠性。方法:实验于2004-06/08在第三军医大学西南医院烧伤研究所内皮细胞室完成。野生型p21基因启动子全序列经酶切亚克隆入pGL3-basic荧光素酶报告基因载体,重组载体pGL3-p21p转染ECV304细胞,并应用双荧光素酶检测系统检测荧光素酶活性,排除转染过程误差。结果:①目的片段克隆载体与p21基因启动子cDNA序列高度同源。②转染重组载体pGL3-p21p和E47+IPTG诱导细胞荧光素酶活性明显增强,而空载体pGL3-basic的荧光素酶表达处于基础水平,两者比较差异有显著性意义(P<0.05)。结论:构建的野生型p21基因启动子驱动的荧光素酶报告基因载体,转染ECV304细胞后能够表达荧光素酶蛋白,具有稳定和可靠性能。

E-box元件在p21基因表达调控中作用的研究

目的:通过p21基因调控序列E-box位点的突变分析,研究E-box位点对p21基因表达调控的作用。方法:将人野生型p21基因启动子全长序列构建到荧光素酶报告基因载体pGL3-basic,并进一步对重组载体pGL3-p21p启动子E-box位点做定点突变,构建突变载体E1、E2、E3,分别转染人脐静脉血管内皮细胞株(ECV304细胞),DLR系统测定荧光素酶活性,并观察E-box位点突变前后荧光素酶活性变化。结果:测序结果表明野生型pGL3-p21p及突变载体E1、E2、E3构建成功。野生型pGL3-p21p荧光素酶活性(105.82±16.55)明显高于空载体pGL3-basic(1.56±0.62);突变载体E1、E2、E3的荧光素酶活性(70.71±16.46、37.87±3.26、83.25±11.48)较野生型载体不同程度下降(P<0.01)。结论:p21基因启动子某些E-box位点参与了p21基因的表达调控。

分化抑制因子1对创伤组织新生血管化的促进作用观察

目的探讨分化抑制因子1(Id1)对创伤组织新生血管化的促进作用及其机制。方法经基因鉴定的SD大鼠16只,随机分为非创伤组(即正常对照组,n=4)和创伤组(包括Id1基因敲除组、Id1诱导表达组和Id1正常表达组,n=4)。采用MTT法测定Id1对血管内皮细胞Eahy926增殖的影响,实时定量RT-PCR、蛋白免疫印迹技术检测创伤1、24、48、72h后创伤组织中新生血管化标志物血管内皮细胞生长因子(VEGF)、CD105、内皮素-1(ET-1)等的mRNA和蛋白表达变化,并用报告基因技术检测Id1对VEGF、CD105、ET-1基因表达的调控作用。结果血管内皮细胞模型实验显示转染Id1siRNA后,血管内皮细胞Eahy926增殖明显受到抑制,以72h时最显著(P<0.01);而转染pcDNAId1后,细胞增殖于48h时即增强(P<0.05),以72h时最显著(P<0.01)。创伤组Id1基因敲除大鼠VEGF、CD105的mRNA及蛋白表达均受到抑制(P<0.05),且伤后各时间点表达水平无明显变化。Id1诱导表达组24h后大鼠Id1、VEGF、CD105表达均明显增强(P<0.05),于72h达高峰(P<0.01),而ET-1mRNA水平在伤后24h升高,48h达高峰(P<0.05),72h下降。报告基因检测结果显示,Id1敲除后VEGF、CD105荧光素酶活性明显受到抑制(P<0.05),而Id1基因诱导表达后VEGF、CD105活性明显增强(P<0.01),但Id1对ET-1的表达无明显影响。结论Id1能有效促进血管内皮细胞Eahy926增殖,调节血管内皮细胞、创伤组织中VEGF、CD105以及ET-1的表达,在组织细胞新生血管化中起重要作用。

深静脉穿刺置管的方法研究

目的探讨如何迅速建立有效的可靠的静脉通路,救治特殊体位的急危重症患者。方法我院急诊科1992-01～2005-12选择和建立深静脉通路共2489例,选用常规(去枕平卧位)方法及非常规(特殊体位:不去枕卧位、半卧位、斜卧、坐位)穿刺方法。结果深静脉颈内静脉穿刺为43例(1.73%);锁骨下静脉为2230例(89.59%),其中锁骨下静脉穿刺上入路病例389例,行下入路锁骨穿刺术的病例1841例;股静脉为216例(8.68%)。结论深静脉穿刺置管是危重患者急救复苏的关键,锁骨下静脉的上下入路可以作为常规、非常规体位患者抢救、紧急给药或复苏时首选。

北京及周边地区毒蛇咬伤流行病学调查

目的分析北京及周边地区毒蛇咬伤的发病情况,用于指导对毒蛇伤害的预防和治疗。方法回顾近两年我院收治的毒蛇咬伤病例270例,对资料完整的106例留观患者进行总结。结果北京及周边地区毒蛇咬伤有其特有的流行病学特点。北京地区蛇咬伤多发生在北部山区;北京周边地区如承德、张家口和内蒙古等多山地区蛇咬伤高发;蝮蛇咬伤病例占多数,偶有五步蛇、竹叶青蛇等;蛇伤集中发生于5～9月,占93.4%(99/106),其他时间有散发病例;伤者以40～59岁人群为主;危重型占全部伤者的1.9%(5/270)。结论北京及周边地区毒蛇咬伤有季节性、区域性等流行病学特点。有针对性地进行预防和治疗可以降低其危害性。建立一个或若干个蛇伤救治中心作为技术核心可以向周围展开地区性防治网络。

大鼠骨髓间充质干细胞向表皮细胞分化的初步研究

目的 体外分离培养骨髓间充质干细胞，并探索表皮细胞生长因子诱导MSCs分化的潜能及条件。方法 采用直接贴壁法，分离培养大鼠股骨和胫骨骨髓间充质干细胞，应用免疫细胞化学法检测细胞CD44、CD106、CD29、CD90、CD34等，对分离的细胞进行鉴定。以10～40ng／ml的表皮生长因子处理第3代MSCs，观察细胞角蛋白的表达。用Western blot方法摸索integrin β1的表达与MSCs分化状态的关系。结果 原代培养的骨髓间充质细胞CD44、CDl06、CD29、CD90免疫细胞化学染色为阳性，CD34为阴性，符合骨髓间充质干细胞特征。MSCs经不同浓度的EGF体外诱导7d后，免疫细胞化学结果显示，EGF浓度为30ng／ml和40ng／ml时，细胞角蛋白出现阳性表达；体外诱导14d，呈角蛋白染色阳性的细胞比例进一步增加，同时integrin131表达量下降。结论 体外培养的MSCs在EGF诱导下，具有分化为表皮细胞的倾向，同时integrin β1可能在MSCs分化中具有一定的作用。

乌司他丁对严重蝮蛇咬伤器官损害及全身炎症反应的抑制作用

目的 探讨乌司他丁（ulinastatin,UTI）对蝮蛇咬伤后的重要器官功能保护及全身炎症反应的抑制作用.方法 选择42例严重蝮蛇咬伤患者,随机分为对照组和UTI治疗组.对照组常规给予抗蝮蛇毒血清和季德胜蛇药片治疗,UTI组则在对照组的治疗基础上加用UTI治疗,连续3 d.各组分别于治疗前及治疗1、2、3 d测定动脉血气分析、血常规及临床生化指标.结果 与对照组比较,UTI治疗组外周血中C反应蛋白、白细胞计数、心率、呼吸频率及PaCO2显著改善（P〈0.05或P〈0.01）;UTI治疗组治疗3 d心肌酶学、肝功能及肾功能指标显著改善,其中AST、ALT、BUN、Cr、LDH及CK与治疗前比较差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）.UTI治疗组治疗3 d CK、Cr、BUN、ALT、AST、LDH与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05或 P〈0.01）,而CK-MB两组比较差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 UTI能有效降低蝮蛇蛇毒导致的器官功能损害,抑制全身炎症反应综合征.

北京地区三级甲等医院急诊科医生工作及身心压力调查分析

目的通过对北京市区三级甲等医院急诊科医生工作压力状况的调查，探讨急诊医生工作压力对身心健康的影响。方法采用整群抽样方法抽取北京市区三级甲等医院120名急诊科医生和80名普通内科医生，分别进行问卷调查其工作压力源、心理健康状况。结果三级甲等医院急诊科与普通内科医生在专业信心和医疗自我满意度方面比较差异无统计学意义（P〉0．05），在工作量和工作环境方面比较差异有统计学意义（P〈0．05），在人际关系、情感及思维方式等方面比较差异亦有统计学意义（P〈0．05）。结论三级甲等医院急诊科医生工作压力大，建议医院管理者采取有效的措施，改善工作环境和人际关系，维护急诊科医生的健康。

严重创伤后早期胰岛素强化治疗的临床价值

目的严重危重患者应激性高血糖的发生极为普遍。应激性高血糖主要由下丘脑—垂体—肾上腺皮质轴及细胞因子激活导致,严重影响创伤后的救治效果,增加了患者的死亡率。早期胰岛素强化治疗能有效减少感染,显著降低血清炎性介质的水平,增加患者的免疫功能,从而降低患者并发症的发生率及死亡率。

整合素β1小干扰RNA载体构建及其在表皮干细胞干扰效应检测

目的 设计和构建整合素 β1(integrinβ1)特异性的小干扰RNA表达载体 ,并初步验证其对靶基因的抑制作用。方法 设计靶点特异性的寡核苷酸 ,连接到经BamHⅠ HindⅢ酶切线性化的pSlincer3 .1 H1质粒上。转染重组质粒到表皮干细胞 ,通过免疫印迹 (Westernblotting)实验检测靶基因的抑制情况。结果 构建的小RNA干扰质粒siIntegrinβ1转染表皮干细胞能够抑制靶基因整合素 β1的表达。 结论 成功构建了针对整合素 β1的siRNA质粒 ,为进一步研究整合素在表皮干细胞增殖与分化调控中的作用奠定了基础。

早期胰岛素强化治疗对严重创伤患者凝血状态变化的研究

目的探讨早期胰岛素强化治疗对严重创伤患者凝血状态变化的影响。方法选择138例严重创伤患者(ISS>20分),随机分为胰岛素强化治疗组和对照组,分别给予胰岛素强化治疗和常规治疗,记录每天胰岛素用量和血糖值,分别检测血小板数(PLT)、D二聚体(DD)、蛋白C(PC)、蛋白S(PS)、抗凝血酶-Ⅲ(AT-Ⅲ)、血栓调节蛋白(TM)、组织纤溶酶原激活物(TPA)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FBG)等12项涉及到与凝血功能有关的实验室指标。结果强化治疗组每日平均胰岛素用量显著高于常规治疗组(P<0.01),平均血糖值显著低于常规治疗组(P<0.05)。强化治疗严格控制血糖后,强化治疗组APTT、PT、TT较常规治疗组缩短,FBG升高(P<0.05),血小板高;TM低于常规治疗组(P<0.05),PC和PS则高于常规治疗组(P<0.05),AT-Ⅲ降低;PAI-1和DD低于常规治疗组,TPA则高于常规治疗组(P<005)。结论胰岛素强化治疗能有效降低ICU中危重患者凝血系统功能紊乱。

快速检测氨基末端-脑钠肽前体在急诊老年呼吸困难患者中的应用价值

目的探讨快速检测氨基末端-脑钠肽前体(NT-proBNP)在急诊老年呼吸困难患者中的临床应用价值。方法根据病因将202例老年急性呼吸困难患者分为单纯肺源性呼吸困难组(A组);单纯心源性呼吸困难组(B组);混合性呼吸困难组(肺源性+心源性,C组)。床旁快速检测NT-proBNP水平,并行超声心动图检查,测量左心室射血分数(LVEF)。比较各组间NT-proBNP水平的差异及B,C两组中NT-proBNP水平与NYHA心功能分级和LVEF的相关性。结果 A组NT-proBNP水平明显低于B,C两组[(197.5±64.3)vs(1873.9±857.1)和(1952.4±914.8)ng/L,P<0.01]。B,C两组NT-proBNP水平差异无显著统计学意义(P>0.05),说明有心源性呼吸困难的患者NT-proBNP水平明显高于单纯肺源性呼吸困难患者。心功能Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级患者中,NT-proBNP水平依次升高,说明患者NT-proBNP水平越高,心功能分级越高[分别(562.37±102.45),(2736.72±81.67),(5873.19±127.73)ng/L,P<0.01]。Person直线相关分析发现,NT-proBNP水平与LVEF呈负相关(r=-0.689,P<0.01),提示NT-proBNP水平越高,LVEF值越低,心功能越差。结论 NT-proBNP水平检测在判断老年肺源性与心源性呼吸困难方面具有较好的临床鉴别诊断价值,其水平高低与心力衰竭严重程度密切相关。

运用综合标准化方法推进紧急医学救援标准体系建设

灾害的频发，催生了现代救援医学的创建与发展，我国紧急医学救援也受到越来越多的重视，其建设已经取得了一定成效。但由于我国地域辽阔，纬度跨度大，地形及气候多样性，突发自然灾害事件种类繁多，事故灾难对人民生命财产造成极大威胁，并且社会安全事件也不容小视，所以突发事件紧急医学救援仍面临严峻的形势，任务艰巨。我国紧急医学救援实力尚不能很好满足突发事件应对的实际需求。如何能充分利用现有的紧急医学救援力量，实现高效运转，是亟待思考和解决的问题。如何能在现有条件下，推进紧急医学救援领域标准化建设，持续提升我国救援医学水平，对解决灾害需求与救援力量相对不足的矛盾无疑是一个非常有效的举措。

连续性血液净化治疗严重脓毒症患者临床疗效分析

目的分析在对严重脓毒症患者实施治疗过程中连续性血液净化的临床疗效。方法随机选取解放军总医院门诊部急诊科在2012年10月1日．2014年9月30日期间收治的接受严重脓毒症治疗的患者86例为试验研究的对象，根据患者治疗方法的不同分为观察组（n=43）和对照组（n=43），观察组患者给予连续性血液净化治疗，对照组患者给予常规治疗，对比分析两组患者的临床疗效。结果观察组患者治疗后动脉血氧分压、白细胞计数、血糖、血尿素氮以及白细胞介素-8、肿瘤坏死因子-α和血清白细胞介素-6浓度均明显优于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05），观察组患者平均ICU天数、气管插管率、再插管率、病死率均优于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论在对严重脓毒症患者实施治疗的过程中，连续性血液净化治疗的运用可以提高临床治疗的效果和有效性，改善了患者治疗后的各项指标，具有较好的治疗效果，值得临床推广。