无菌猕猴桃种子采集方法研究

无菌的猕猴桃种子是猕猴桃胚乳培养、实生苗微嫁接等技术的基础材料,利用消毒剂灭菌是常用的无菌种子采集手段,应用最广泛的消毒剂为升汞(mercuric chloride)和次氯酸钠(NaClO)。为了避免使用消毒剂,该研究提出了一种新的无菌猕猴桃种子采集方法——无菌搅拌法,同时为探索其准确性和应用性,比较了0.2%升汞灭菌20 min、10%次氯酸钠灭菌20 min、无菌搅拌法三种方式采集无菌猕猴桃种子的效果,并对种子萌发和幼苗形成的影响进行了研究。结果表明:无菌搅拌法、0.2%升汞灭菌20 min是稳定有效的无菌猕猴桃采集方式,10%次氯酸钠灭菌20 min的采集效果不稳定;在相同的时间内,无菌搅拌法的种子发芽率最高,为89.90%,但发芽势较低,均可正常成苗; 10%次氯酸钠灭菌20 min的发芽率次之,与无菌搅拌法的种子无显著差异,发芽势和成苗率最高,分别为47.47%和67.86%,且有打破猕猴桃种子休眠的作用,整体作用类似于赤霉素(GA_3)浸种的效果; 0.2%升汞灭菌20 min对猕猴桃种子的萌发有抑制作用,各项指标均显著低于无菌搅拌法种子,且生长缓慢。此外,无菌搅拌法是物理处理,对种子、操作人员、环境均无害。这证实了无菌搅拌法的实用性和优势,发现了次氯酸钠在打破猕猴桃种子休眠方面的作用,为其它同类型果实的无菌种子采集提供了参考。

UHRF2通过PI3K/Akt信号通路促进肝细胞癌细胞的增殖和转移

目的探讨泛素样含PHD和环指域蛋白2(ubiquitin-like with PHD and RING finger domains 2,UHRF2)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)增殖和转移中的作用及其机制。方法检索TCGA数据库中HCC的基因表达谱数据和患者的临床数据,分析UHRF2的表达差异与HCC患者的预后情况,采用Cox比例风险模型探索UHRF2对HCC患者预后的独立作用;收集2018年7月至2019年12月在重庆医科大学附属第一医院确诊的20例肝癌患者的肿瘤组织和癌旁组织,采用免疫组化检测UHRF2蛋白的表达,分析蛋白的表达与患者临床病理参数的关系;构建UHRF2表达质粒,通过RT-qPCR和Western blot检测转染效率,在HCC细胞系中过表达UHRF2进行划痕及平板克隆实验检测肝细胞癌细胞的迁移和增殖情况;基因富集分析探讨UHRF2与PI3K/Akt通路活化的关系,Western blot检测Akt、PI3K、p-Akt、p-PI3K的表达。结果 TCGA数据库分析显示UHRF2 mRNA在HCC组织中表达明显升高并提示预后不良;Cox多因素回归分析发现UHRF2的表达是影响患者预后的独立危险因素。免疫组化检测结果显示UHRF2蛋白在HCC中的表达明显高于癌旁组织。UHRF2的高表达与肿瘤大小(P=0.002)、肿瘤转移(P=0.002)密切相关。在迁移实验和平板克隆实验中,UHRF2过表达组的划痕愈合能力及增殖能力较对照组显著增强(P<0.01);PI3K/Akt通路在UHRF2高表达HCC患者中显著富集;Western blot检测结果显示,UHRF2过表达组的p-Akt、p-PI3K的表达水平明显上调(P<0.05)。结论 UHRF2的表达水平与HCC的预后密切相关,是影响患者预后的独立危险因素;过表达UHRF2通过PI3K/Akt信号通路促进HCC细胞的增殖和转移。

氨苄西林通过调控泛素样含PHD和环指域蛋白2及组蛋白H3赖氨酸残基甲基化水平的抗结肠癌作用研究

目的探索氨苄西林通过调控泛素样含PHD和环指域蛋白2(UHRF2)和组蛋白H3赖氨酸残基(H3K9)甲基化水平的抗结肠癌作用机制。方法将SW480、HT29细胞均分为对照组和实验组。实验组给予含1μg·mL^(-1)氨苄西林的RPMI培养基进行培养;对照组给予不含氨苄西林的RPMI培养基进行培养。用蛋白质印迹法检测UHRF2和H3K9甲基化水平,用CCK-8实验法检测细胞的增殖能力,用划痕实验法检测细胞的迁移能力,用Transwell实验法检测细胞的侵袭能力。结果在SW480细胞中,实验组和对照组的UHRF2蛋白相对表达水平分别为102.36±10.12和698.67±36.92,H3K9二甲基化(H3K9me2)蛋白相对表达水平分别为406.59±20.97和721.52±36.20,H3K9三甲基化(H3K9me3)蛋白相对表达水平分别为219.78±25.88和821.97±50.61,细胞凋亡率分别为(45.28±6.35)%和(26.18±3.25)%,细胞划痕愈合率分别为(9.47±3.54)%和(26.29±4.29)%,侵袭细胞数分别为(29.23±3.78)和(39.52±4.15)个,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在HT29细胞中,实验组和对照组的UHRF2蛋白相对表达水平分别为160.85±29.74和551.79±39.76,H3K9me2蛋白相对表达水平分别为385.26±46.98和601.30±29.86,H3K9me3蛋白相对表达水平分别为496.85±36.22和725.91±53.62,细胞凋亡率分别为(50.35±7.43)%和(29.45±5.65)%,细胞划痕愈合率分别为(6.54±4.16)%和(21.14±5.74)%,侵袭细胞数分别为(32.22±3.62)和(41.63±5.59)个,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论氨苄西林可能通过下调UHRF2蛋白水平及H3K9甲基化水平,从而抑制结肠癌细胞的生长。