微囊藻毒素时间分辨荧光免疫分析方法

目的建立高灵敏的微囊藻毒素（MC-LR）的时间分辨荧光间接竞争免疫分析方法（MC-LR-TRnA）。方法以MC-LR与牛血清白蛋白的偶联物（MC-LR-BSA）包被96孔板为回相抗原，与游离MC-LR共同竞争有限的抗MC-LR多克隆抗体；用稀土离子Eu^3＋标记的羊抗兔抗体进行示踪。结果该方法的灵敏度为0．01μg／L，测量范围为0．01—20μg／L，ED80、ED50和ED20分别为0.16、0.57和1．70μg／L。平均回收率为101％，与MC-LF和MC-RR平均交叉反应分别为0.73％和35％。比较MC-LR-TRFIA和MC-LR-E：LISA检测MC-LR，两者的相关系数为0.958。研究表明，MC-LR-TRFIA是目前报导的MC-LR检测中最灵敏的方法。结论该方法适用于水样中MC-LR的定量检测。

低聚糖的纳滤分离技术

确定了低聚异麦芽糖和低聚果糖纳滤分离高纯化工艺.首先根据纳滤膜截留相对分子质量和截留率选择适用的纳滤膜,然后进行纳滤分离工艺和操作条件的探索,随着纯化倍数递增,单糖或二糖逐渐被去除,产品纯度、低聚糖收得率和产品出率发生规律性变化.应用纳滤分离技术使低聚异麦芽糖纯度IMO≥90%,低聚果糖纯度FOS≥95%.

ELISA法检测赭曲霉毒素A的改进研究

针对ELISA法检测赭曲霉毒素A(OTA),使用微振荡酶标板可以缩短免疫反应检测时间约30min。采用ELISA方法检测小麦样品中的OTA时,使用空白样品提取液来配制OTA标准溶液可以消除样品基质造成的干扰。同时对提取溶剂加以改进,采用NaCl-水-甲醇(10%:70:30)作为提取溶剂的提取效率最高。0.1、1、10μg/kg三个浓度水平的加标回收率为95%～110%,方法的重现性很好,变异系数小于10%。

杜仲叶粉提取绿原酸工艺的优化

[目的]优选杜仲叶粉中绿原酸的最佳提取方法和提取工艺,为工业化生产提供参考。[方法]用酶解和超声相结合的方法,在单因素试验的基础上,采用四因素三水平正交设计法对提取工艺条件进行优选。[结果]单因素试验结果得出,在溶剂pH值为4.5,酶加入量为0.6%,酶解温度为40℃,料液比为1∶10,超声时间为30 min,绿原酸提取得率最大。在此基础上进行的正交试验结果显示,绿原酸提取的最佳工艺条件为:溶剂pH值为5.0,酶解温度为40℃,料液比为1∶10,超声时间为30 min,在此最佳条件下绿原酸提取得率可达3.05%。从与酶法和超声波法的比较试验得出,绿原酸提取得率比酶解高出5.54%,比超声波提取高出16.68%。[结论]采用酶解与超声波结合的方法,先让酶作用后,有利于超声波的进一步作用,促进绿原酸的释放,提取效果远远超过酶法和超声波法。

低聚异麦芽糖的纳滤分离技术和色谱分离技术

以淀粉为原料 ,运用先进的酶工程技术生产低聚异麦芽糖IMO - 50 .再以IMO - 50为原料 ,应用高新分离技术 ,去除葡萄糖、生产高含量低聚异麦芽糖IMO -

微囊藻毒素(MC-LR)多克隆抗体的制备、纯化及鉴定

目的制备针对藻毒素(MCLR)的多克隆抗体,并鉴定其特性。方法利用合成的免疫抗原MCKLH结合物,按常规方法免疫新西兰大白兔20周,经离心、硫酸铵沉淀法制得纯化的抗体,计算其亲和常数,用间接竞争法测定效价、抑制率IC50及特异性。结果纯化的MCLR抗血清效价大于25600,最低检出限为0.01ngml,IC在0.1～1ngml之间,与MCLW和MCLF的交叉反应率为0.1%～20%。

金标免疫层析法检测黄曲霉毒素B_1的方法

应用金标免疫层析法(GICA)研制的金标免疫试纸条对食品中黄曲霉毒素B1的检测,来确立该方法的各项技术指标。结果表明:方法的最低检测限:2.5ng/mL;金标免疫试纸条在4℃环境下可稳定10个月以上;与类似毒素AFB2、AFG2的交叉反应率分别是7.14%、6.25%;检测时间小于15min;GICA与ELISA方法的符合率达90%以上。该方法简便、快速,有较高的灵敏度,重复性好,特异性强,能定性或半定量检测食品中的黄曲霉毒素B1含量。

低聚异麦芽糖醇的工艺研究

以低聚异麦芽糖浆IMO 5 0为原料 ,又应用纳滤分离技术生产低聚异麦芽糖浆IMO 90 ,再采用特殊的氢化工艺技术生产高纯度低聚异麦芽糖醇IMO H。

藻毒素免疫抗原的制备及鉴定

目的为建立藻毒素(MCLR)免疫学检测方法,制备具免疫功能的MCLR完全抗原。方法根据MCLR分子中的羧基和蛋白质分子中的氨基,利用“活泼酯法”和“碳二亚胺法”分别制备MCLRKLH(匙孔血蓝蛋白)免疫抗原和MCLRBSA(牛血清白蛋白)检测抗原。结果用紫外光谱法(UV)和Bradford蛋白含量测定法鉴定,结合物中MCLR与KLH、BSA的结合摩尔比为9.1∶1和9.4∶1。采用“皮下注射法”用MCLRKLH免疫新西兰大白兔15周,取血清,用“间接酶联免疫吸附法”(id-ELISA)鉴定抗MCLR多克隆抗体效价,最高达1∶25600。结论证明制备的MCLRKLH具有免疫性。

ELISA法与HPLC法检测太湖水中藻毒素的比较研究

目的：比较ELISA法与HPLC法检测水中微囊藻毒素含量的异同。方法：利用基于抗MC—LR多克隆抗体建立的间接竞争ELISA和HPLC法分别检测太湖中不同检测点、不同时期采集的大量水样中的MC—LR含量。结果：ELISA法和HPLC法相对误差平均值为8．62％，相关性检验t值为0．9996。在加标浓度为0．5～12．5ppb时，ELISA法回收率为94．84％～116．51％，HPLC法回收率为86．14％～92．18％。结论：两种方法具有良好的相关性，但ELISA法比HPLC法前处理简单，快速，回收率较好，更适合基层检测部门使用。

抗微囊藻毒素单克隆抗体胶体金标记物的制备及鉴定

目的制备抗微囊藻毒素(MC-LR)单克隆抗体胶体金标记物,并利用光谱分析来探讨结合物的合成机理。方法用杂交瘤技术生产并纯化的抗MC-LR的单克隆抗体,利用胶体金标记技术合成20nm粒径的胶体金与抗MC-LR单克隆抗体的结合物,通过光谱分析对偶联物中单克隆抗体的构象进行分析,ELISA法检测偶联物中抗体的免疫性。结果抗MC-LR单克隆抗体的效价达108,IC50抑制浓度为3ng/ml,为IgG2a亚型,分子量为1·5×105,与MC-LW、MC-LF无明显交叉反应。胶体金与抗体偶联物的颗粒圆整,光谱分析结果显示抗体蛋白的特征官能团没有发生明显变化,与胶体金粒子作用后结构略加紧密。ELISA结果显示偶联物仍然保持免疫原性。结论抗MC-LR单克隆抗体胶体金标记偶联物中抗体蛋白结构和抗原决定簇的位点没有改变,仍具有免疫原性,偶联物的稳定性良好。

微囊藻毒素(MC-LR)ELISA检测方法的改进及误差分析

针对间接竞争ELISA检测微囊藻毒素(MC-LR)方法,利用微振荡免疫反应可缩短整个检测时间约60min。同时考察了水样中盐分、金属离子和pH值对测定结果的影响,并提出了可以利用稀释法减少甚至消除这些误差影响。

杜仲叶提取物对鲫鱼出血性病原菌抑菌试验的研究

试验测定了杜仲叶主要提取物绿原酸对水产养殖中常见病原菌的最小抑菌浓度及其对嗜水气单胞菌体内和体外抑菌效果。结果显示,绿原酸对水产养殖中的常见病原菌嗜水气单胞菌最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)均为250mg/l,哈维氏弧菌、苏伯利产气单胞菌的MIC与MBC均为500mg/l,肠型点状产气单胞菌的MIC与MBC分别为500、1000mg/l。药敏试验结果发现,绿原酸对嗜水气单胞菌抑菌圈的直径为(19.4±1.2)mm,氟哌酸的抑菌圈直径为(30.3±1.3)mm,土霉素为(28.5±2.5)mm。攻毒试验结果显示,在攻毒7d后,对照组死亡率为45%,饲料中添加0.5%绿原酸的试验组死亡率为10%,添加4%的试验组的死亡率为20%,添加1%和2%的试验组没有鱼死亡,表明饲料中添加1%的绿原酸能有效增强鱼体对嗜水气单胞菌的抵抗能力。试验结果说明,绿原酸对水产养殖中常见的病原菌具有良好的抑菌效果,对嗜水气单胞菌的抑菌效果与抗生素类抗菌药物相当,能够增强机体免疫力,对细菌性疾病具有较强的预防作用。

以菊芋(或菊苣)为原料酶法生产高纯度菊糖和果糖

以菊芋(或菊苣)为原料,热水浸提获得提取液.酶法处理提取液,使压滤液流畅,提高菊糖出率达95%以上.应用纳滤高纯化技术分离去除葡萄糖、果糖和蔗糖,使菊糖纯度(蔗果三糖以上含量)达94.85%-98.58%;高纯化菊糖液经菊糖酶转化,得到高纯度果糖浆,果糖含量达85.56%-87.24%.

低聚异麦芽糖的质量与工艺设备

本文阐述低聚异麦芽糖的质量指标和当前产品质量问题，研究如何在改进工艺、完善设备基础上提高产品质量。

以菊芋(或菊苣)为原料酶法生产菊糖、果糖

以菊芋(或菊苣)为原料,热水浸提获得提取液。酶法处理提取液,使压滤液流畅,提高菊糖出率达95％以上。应用纳滤高纯化技术分离去除葡萄糖、果糖和蔗糖,使菊糖纯度(蔗果三糖以上含量)达94.85％-98.58％;高纯化菊糖液经菊糖酶转化,得到高纯度果糖浆,果糖含量达85.56％～87.24％。

低聚糖的纳滤分离技术

应用纳滤分离技术提纯低聚异麦芽糖和低聚果糖,使IMO≥90%,FOS≥ 95%。

低聚异麦芽糖发展中的问题及当前对策

本文针对低聚异麦芽糖发展中存在的问题,阐述了如何研究应用低聚异麦芽糖生理功能,开发功能食品,拓展销售市场,以及如何在改进工艺、完善配套设备基础上提高产品质量。