异欧前胡素对人表皮黑素细胞酪氨酸酶和Rab27a的调节作用

目的:探讨异欧前胡素对体外培养的人表皮黑素细胞酪氨酸酶和Rab27a的凋节作用。方法:体外分离人表皮黑素细胞并纯化培养,随机分为对照组和实验组。对照组加入M-254培养基,实验组加入含25μmol/L异欧前胡素的M-254培养基,培养48h后倒置显微镜下观察黑素细胞的形态;MTT法检测黑素细胞活力;Western blot法检测黑素细胞酪氨酸酶和转运相关蛋白Rab27a的表达;L-多巴氧化法和NaOH法测定黑素细胞酪氨酸酶活性和黑素含量。结果:与对照组比较,实验组人表皮黑素细胞的树状突起变长,黑素细胞活力降低17.2%(P<0.05),黑素细胞酪氨酸酶表达下降30.3%(P<0.01),而Rab27a表达升高31.9%(P<0.05);酪氨酸酶活性降低25.6%(P<0.05);黑素含量降低30.9%(P<0.01)。结论:25μmol/L异欧前胡素使黑素细胞的树状突起变长,抑制黑素细胞活力,抑制黑素细胞酪氨酸酶的表达和活性,促进黑素转运相关蛋白Rab27a的表达,降低黑素细胞中黑素的含量。

异欧前胡素抑制人表皮黑素细胞c-Kit蛋白的表达

目的探索异欧前胡素对体外人表皮黑素细胞c-kit蛋白表达的作用。方法体外分离、纯化培养人表皮黑素细胞,随机分为1组(对照组)、2组(10 nmol/L SCF组)、3组(25μmol/L异欧前胡素组)和4组(25μmol/L异欧前胡素+10nmol/L SCF组),各组黑素细胞按设定条件培养48 h,倒置显微镜观察黑素细胞的形态,免疫荧光显微镜观察黑素细胞的干细胞因子受体c-Kit蛋白表达和分布,NaOH裂解法测定黑素细胞黑素的含量。结果与1组比较,2组黑素细胞胞体增大,3组黑素细胞胞体变小,树状突起变长,4组黑素细胞胞体小于2组。免疫荧光显微镜观察可见1组黑素细胞c-kit蛋白表达呈红色荧光,分布于胞膜,2组黑素细胞c-Kit蛋白由于SCF诱导而表达增强,3组、4组黑素细胞c-Kit蛋白因异欧前胡素的抑制而表达减弱,各组黑素细胞c-Kit蛋白表达的结果与1组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。黑素含量检测结果表明,异欧前胡素对SCF诱导的黑素细胞黑素的合成有抑制作用,2组、3组、4组与1组之间黑素含量的差异、4组与2组之间黑素含量的差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 25μmol/L异欧前胡素可抑制体外培养人表皮黑素细胞c-Kit蛋白的表达,调节SCF/c-Kit信号传导而降低黑素细胞的黑素含量。

异欧前胡素对体外人表皮黑素细胞酪氨酸酶和β-肌动蛋白表达的调节作用

目的:研究异欧前胡素对体外培养的人表皮黑素细胞酪氨酸酶和β-actin蛋白表达的影响。方法:体外分离、纯化培养人表皮黑素细胞,随机分为对照组和异欧前胡素实验组。对照组用M-254培养基培养,实验组加入含25μmol/L异欧前胡素的M-254培养基,培养48 h。倒置显微镜下观察人表皮黑素细胞形态,Na OH裂解法检测黑素含量的变化,采用实时荧光定量PCR方法、Western blot方法、免疫荧光法检测酪氨酸酶和β-actin在黑素细胞中的表达及其变化。结果:异欧前胡素作用48 h后,与对照组黑素细胞比较,实验组黑素细胞的树状突起变长,黑素含量减少(P<0.01);实时荧光定量PCR、Western blot和免疫荧光法检测结果表明,与对照组相比,实验组黑素细胞酪氨酸酶m RNA及其蛋白的表达降低(P均<0.05),β-actin m RNA及其蛋白的表达增加(P均<0.05)。结论:25μmol/L异欧前胡素抑制体外培养人表皮黑素细胞酪氨酸酶m RNA及其蛋白的表达,促进β-actin m RNA及其蛋白的表达,从而降低体外人表皮黑素细胞黑素的含量。