反相高效液相色谱法同时测定血清中5种水溶性维生素

目的建立血清中水溶性维生素B1(VB1)、B6(VB6)、烟酸、烟酰胺和叶酸的高效液相色谱同时测定方法。方法取全血40μL,用200μL甲醇沉淀蛋白,冰箱冷冻(-18℃)30 min后离心(8000 r/min,8 min),上清液通过固相萃取柱进一步净化,收集洗脱液,50℃水浴中氮气吹至0.20 mL,取50μL进样色谱柱分析。对样品的固相萃取条件和色谱条件进行优化后,用于测定人血清样品中5种水溶性维生素的含量。结果优化后的固相萃取条件:固相萃取柱AGTcleanertTMODS C18柱;洗脱液:甲醇(2.4 mL)-水(0.6 mL)混合液;洗脱流速:0.5 mL/min。本法的色谱分离条件为:分离柱Phenomenex C18 Luna色谱柱(250×4.6 mm,5μm);柱温:室温(20℃);流动相:0.05 mol/L KH2PO4溶液(pH6.0)-甲醇梯度洗脱;流速:0.9 mL/min;紫外检测波长:266 nm。5种水溶性维生素标准曲线的线性范围为0～100 ng,相关系数均大于0.999,相对标准偏差(RSD)小于5%,方法检出限(信噪比S/N=2)为0.076～0.170μg/mL,加标回收率为80.2%～115.0%。人血清样品中除烟酰胺未检出外,其余4种均检出。结论所建立的方法快速、简便、灵敏、准确,可用于人血清中水溶性维生素VB1、VB6、烟酸和叶酸的同时测定,但烟酰胺的检测灵敏度有待提高。

胶体金免疫层析法视黄醇结合蛋白检测试剂对肾小管功能损伤的诊断价值评价

目的:对胶体金免疫层析法的视黄醇结合蛋白(RBP)检测试剂诊断肾小管损伤的价值进行评价。方法:选择上海柏纳生物技术有限公司生产的视黄醇结合蛋白检测试剂盒(胶体金免疫层析法)与上海太阳生物技术有限公司生产的RBP含量测定试剂盒(酶联免疫法)进行对比试验,分别对临床选取的病例组和对照组的尿液样本进行检测。参考临床单位诊断标准,酶联免疫法结果浓度≥300ng/mL为阳性,<300ng/mL为阴性;胶体金免疫层析法检测结果检测线显色为阳性,不显色为阴性。对两组检验结果进行Kappa一致性检验,分析两种检测方法诊断结果的一致性,同时以临床通用诊断方法为参考,计算胶体金免疫层析法诊断肾小管功能损伤的灵敏度和特异度。结果:两种检测方法的诊断结果一致性良好(市一医院:K=0.9070,95%CI:0.8277～0.9863,P<0.01;市六医院:K=0.9391,95%CI:0.8714～1.000,P<0.01)。胶体金方法诊断肾小管损伤的灵敏度和特异度,市一医院:灵敏度=100%,精确95%CI为:92.45%～100.00%;特异度=91.80%,精确95%CI为:81.90%～97.28%;市六医院:灵敏度=100%,精确95%CI为:91.40%～100.00%;特异度=95.00%,精确95%CI为:86.08%～98.96%。结论:胶体金免疫层析法的视黄醇结合蛋白检测试剂与已批准上市的试剂等效,对肾小管功能损伤的诊断具有重大应用价值。