生长抑素DNA疫苗在COS细胞中的瞬时表达

构建了生长抑素DNA疫苗质粒 pCHSS(pCDNA/HBsAg/SS) ,并在COS细胞中的获得较高水平的瞬时表达 ,用HBsAgElisa检测试剂盒跟踪发现 ,约有 2 7%的融合蛋白分泌到细胞外 ,说明SS的插入没有影响HBsAg的免疫反应性和分泌表达。免疫电镜观察 ,HBsAg可以组装成 2 2nm～ 30nm的颗粒 ,说明SS的插入没有影响HBsAg的组装 ,该实验为动物实验打下基础。

重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素3融合蛋白在大鼠体内的药代动力学研究

研究重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素3融合蛋白(GM-CSF/IL-3,MX)在大鼠体内的药代动力学。方法:实验采用同位素示踪技术结合HPLC分析,建立了MX在大鼠血浆中的测定方法,并测定了MX皮下注射3个剂量水平和静脉注射中剂量水平在大鼠体内的药动学参数。结果:高中低剂量T1/2分别为(1 5.4±2.0),(1 6.1±1.8)h,(1 3.2±2.2)h;AUC分别为(5 8 8±1 2 0),(2 8 6±4 7),(1 4 2±2 0)μg/(L.h),Cmax分别为(3 1.2±8.3),(1 4.8±1.2),(8.3±1.4)μg/L。结论:MX皮下注射给药后,Cmax和AUC与剂量成比例,MX在大鼠体内的代谢和消除是线性的。7 0μg/kg组生物利用度为3 5.6%。

酪丝缬肽在Beagle犬体内药动学初步研究

初步研究酪丝缬肽单次静注给药后在Beagle犬的体内过程。建立了酪丝缬肽在Beagle犬全血中浓度测定的RP-HPLC-UV方法。绘制酪丝缬肽单次给药后在Beagle犬体内全血药物浓度-时间曲线,并求得药动学参数。本检测方法灵敏度不高,最低定量限为0.20μg/ml。酪丝缬肽静注给药后在Beagle犬体内药动学符合单房室模型,低、中、高3个剂量(60,600,6000μg/kg)的T1/2分别为(8.88±1.45),(9.00±1.70),(11.12±2.83)s,无显著性差异,C10s和AUC与剂量成良好的线性关系。本实验初步表明:酪丝缬肽静注给药在Beagle犬体内的动力学行为是线性的。酪丝缬肽在Beagle犬体内快速消除,半衰期小于20s。

增食因子的研究进展

文章综述了crexin和OXR（orexin受体）的基因结构、氨基酸序列、组织分布状况及orexin的生理活性;探讨了orexin的作用机理,并对其临床应用前景作了展望。

促黄体生成素基因免疫对前列腺增生模型鼠生殖内分泌的影响

目的 探讨LH基因免疫对前列腺增生模型鼠生殖内分泌的影响。方法RT-PCR法从雌性大鼠垂体细胞中RNA扩增大鼠的促黄体素基因（LH）cDNA片段约（461bp）并克隆至T载体,获得重组质粒T-LH,限制酶酶切,酶连接,构建PCDNA3.1（-）/HbsAg/LH,经脂质体转染纯化的重组质粒至COS细胞中。通过肌肉注射构建的 PCDNA3.1（-）/HbsAg/LH与前列腺增生大鼠,2个月内给药两次。结果 体外培养 COS细胞,发现HBsAg与LH连接物表达较好,肌肉注射前列腺增生模型鼠重组质粒后,模型鼠LH与T的含量明显低于对照组。结论PCDNA3.1（-）/HbsAg/LH可参与前列腺增生模型鼠生殖内分泌腺的调节。

鲨鱼肝再生因子(SHRF)半抗原偶联与多抗制备

探讨鲨鱼肝细胞再生因子(Shark Hepatic Regenerative Factor,SHRF)完全抗原的偶联方法和兔抗体的制备。分别考察了戊二醛(GA)一步法,戊二醛二步法和1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳化二亚胺(EDC)法3 种偶联方法对SHRF与BSA的偶联效果,并将制备的完全抗原免疫新西兰白兔。实验表明碳化二亚胺法具有反应条件温和,偶联效率高等优点,并得到了高效价的兔抗体,为SHRF的ELISA方法的建立奠定了基础。

基因重组干扰素α-2b脂质体的药代动力学研究

研究注射用干扰素α2b脂质体在大鼠体内的药代动力学及小鼠组织分布、排泄。运用同位素示踪法结合SDSPAGE,测定静脉注射后大鼠血液中原型药物浓度并做其胆汁排泄试验;用小鼠进行组织分布试验和尿粪排泄试验。结果:符合一级消除动力学的二房室模型,干扰素α2b的t1/2β为0.69h,脂质体3个剂量的t1/2β分别为3.36h、3.02h、2.34h,干扰素α2b脂质体在大多组织中分布增加,肝脾中尤其明显。脂质体能够显著延长干扰素α2b在血液及组织中半衰期,提高靶向性。

反相制备色谱分离酪丝亮肽拟似物

本文介绍了以反相C18制备色谱柱分离强极性小肽拟似物的方法。采用BüCHI中压制备系统,以水-甲醇为梯度洗脱体系,并配合HPLC检测,结果成功分离纯化了三个活性拟肽化合物,纯度达97%以上。该法简便、分离效果好,可用于该类小肽化合物的分离制备。

胸腺五肽最小保护液相合成工艺的研究

目的:研究免疫增强剂胸腺五肽的合成路线,以降低合成成本。方法:采用最小保护液相逐步接肽合成策略,即氨基酸的侧链功能基在不发生较大副反应前提下尽量不采取保护。结果:采用该策略可得到合格的产品,且合成纯化总产率达到35%。结论:该胸腺五肽合成路线成本低,环保,易产业化。

抗肝癌药物酪丝亮肽的工艺研究

目的探索一类抗肝癌新药酪丝亮肽的固相合成路线,并与申报的液相合成路线进行优缺点比较。方法采用Fmoc/Wang树脂固相合成方法,逐步接肽,然后用裂解液(TFA:Tis:H2O,95.0:2.5:2.5)从树脂切割得到粗品,最后制备液相纯化脱盐,冻干得到产品。结果终产品经质谱、磁共振检测确证,纯度为99.5%,产率为82.0%。结论Fmoc固相合成方法可以得到与液相合成一致的产品,相比液相路线,该合成方法便捷易操作,生产周期短,产率高,但是成本相对较高。

LC-MS法测定全血中酪丝亮肽及其在大鼠中的药代动力学研究

建立准确、灵敏的液相色谱-质谱法以测定全血中酪丝亮肽,并研究酪丝亮肽静脉注射后在大鼠中的药代动力学。大鼠麻醉,进行颈动脉插管,静脉注射酪丝亮肽(200μg/kg、400μg/kg和800μg/kg),采集血样。样品处理后,以YSW肽为内标,采用正离子选择性反应监测,乙腈-水-甲酸系统洗脱,测定全血中酪丝亮肽的浓度,并计算药动学参数。酪丝亮肽在大鼠中被快速降解,半衰期极短,约为20s。该研究的LC-MS法准确、灵敏、结果可靠;酪丝亮肽静脉注射给药半衰期极短,临床中不宜采用静脉注射给药,建议探索新的给药方案。

蛋白酶抑制剂对酪丝亮肽代谢及药代动力学的影响

研究蛋白酶抑制剂对酪丝亮肽代谢及药代动力学的影响。在酪丝亮肽体外血浆代谢系统中,分别加入4种常见的蛋白酶抑制剂,考察其对酪丝亮肽降解曲线的影响,并进一步考察联合使用对酪丝亮肽大鼠药代动力学的影响。体外血浆代谢研究表明,乌苯美司对酪丝亮肽体外血浆降解有明显抑制作用,其它3种酶抑制剂无影响;大鼠药代动力学研究表明,乌苯美司可显著改善酪丝亮肽药代动力学行为,提高体内血药浓度。氨肽酶是酪丝亮肽降解的主要酶,建议在临床中探索乌苯美司与酪丝亮肽的联合用药方案。