草莓轻型黄边病毒CP蛋白的原核表达及抗血清制备

利用PCR技术扩增草莓轻型黄边病毒(strawberry mild yellow edge virus, SMYEV)中国分离物的外壳蛋白(coat protein, CP)基因,将SMYEV CP基因克隆至原核表达载体pET-32a,重组质粒pET-cp转化大肠杆菌BL21菌株,37℃振荡培养,1 mmol·L^(-1)IPTG诱导表达,检测发现CP融合蛋白大量存在于细胞裂解上清液中。Ni^(2+)-NTA亲和树脂纯化CP融合蛋白,Western blot可检测到较单一的特异性条带,分子量约为46 kDa。用纯化的CP融合蛋白免疫家兔获得多抗血清,间接ELISA法测定抗血清效价达1∶512 000。以此多抗血清建立了Dot-ELISA和胶体金试纸条检测方法,不仅可以检测感染SMYEV的草莓样本,用于感病草莓的早期诊断和鉴定,还可以用于SMYEV CP蛋白的瞬时表达和系统表达等分析。