期刊文献+
共找到10篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
关岭牛MEF2A基因干扰载体构建及其转染对成肌细胞的影响 被引量:2
1
作者 孙金魁 许厚强 +1 位作者 石鹏飞 阮涌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期584-595,共12页
旨在构建肌细胞增强因子MEF2A(myocyte enhancer factor 2A)基因的重组干扰载体,探究MEF2A基因对牛成肌细胞的影响。本研究选择3头健康的3日龄雌性关岭牛,体重约为21 kg,采集背最长肌组织成功培养成肌细胞。设计MEF2A基因的4对shRNA干... 旨在构建肌细胞增强因子MEF2A(myocyte enhancer factor 2A)基因的重组干扰载体,探究MEF2A基因对牛成肌细胞的影响。本研究选择3头健康的3日龄雌性关岭牛,体重约为21 kg,采集背最长肌组织成功培养成肌细胞。设计MEF2A基因的4对shRNA干扰序列和1对NC阴性对照序列,将其连接至pGPU6-GFP-Neo载体上,转染重组载体至关岭牛成肌细胞。采用qRT-PCR法筛选干扰效率最佳的载体,并检测干扰MEF2A基因对肌生成因子MEF2B、MEF2C、MEF2D,周期与凋亡因子CDK2、CCNA2、BCL2 mRNA表达水平的影响;随后利用流式细胞仪与酶标仪探究干扰载体对成肌细胞增殖生长的影响,各试验组别设置3个生物学重复。同时运用在线软件预测牛MEF2A蛋白理化性质与网络谱图。结果显示,本研究成功筛选出干扰效率最佳的shRNA-MEF2A-3载体(P<0.01)。MEF2A基因被抑制后,成肌细胞中MEF2B、MEF2C与MEF2D基因表达量均极显著上调(P<0.01);CDK2与BCL2表达量皆显著下调(P<0.05),CCNA2表达量极显著下调(P<0.01);与对照组相比,干扰组细胞周期明显延长,干扰组成肌细胞在6 h后的增殖活性均极显著低于对照组(P<0.01)。由此可初步推测,MEF2A干扰载体成功转染至牛成肌细胞后,可有效抑制MEF2A基因表达,改变基因表达模式,影响了关岭牛成肌细胞的分裂增殖,为进一步探究MEF2A基因对关岭牛肉质性状调控机制和挖掘地方种质资源提供数据支撑。 展开更多
关键词 关岭牛 MEF2A基因 干扰 成肌细胞 细胞增殖
下载PDF
关岭牛FABP1和FABP2基因克隆及其组织表达分析 被引量:1
2
作者 石鹏飞 许家利 +1 位作者 孙金魁 许厚强 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期598-608,共11页
【目的】明确肝脏型脂肪酸结合蛋白(FABP1)和肠型脂肪酸结合蛋白(FABP2)基因的分子特征及其在不同年龄段和不同品种牛各组织中的表达情况,为后续研究FABP1和FABP2对牛脂肪酸的调控作用机制提供理论依据。【方法】采用RT-PCR扩增关岭牛FA... 【目的】明确肝脏型脂肪酸结合蛋白(FABP1)和肠型脂肪酸结合蛋白(FABP2)基因的分子特征及其在不同年龄段和不同品种牛各组织中的表达情况,为后续研究FABP1和FABP2对牛脂肪酸的调控作用机制提供理论依据。【方法】采用RT-PCR扩增关岭牛FABP1和FABP2基因编码区(CDS)序列,通过ProtParam、ProtScale、SOPMA、SWISSMODEL、TMHMM-2.0、SignalP-5.0和NetPhos-3.1等在线软件进行生物信息学分析,并以实时荧光定量PCR检测FABP1和FABP2基因在3日龄关岭牛(犊牛)、24月龄关岭牛(成年牛)及24月龄杂交牛(关岭牛×利木赞牛)各组织中的表达情况。【结果】FABP1、FABP2基因CDS序列全长分别为384和399 bp,对应编码127和132个氨基酸残基,其编码蛋白二、三级结构均以无规则卷曲和延伸链为主,无跨膜结构域和信号肽剪切位点,且属于亲水性稳定蛋白。FABP1、FABP2氨基酸序列分别包含19和18个磷酸化位点,其中苏氨酸在2个氨基酸序列中均广泛分布。FABP1、FABP2氨基酸序列同源比对及系统发育进化分析结果均显示,关岭牛与马、绵羊和山羊的亲缘关系较近,而与鸡和鸭的亲缘关系较远,与其他物种的相似性都在75.0%以上。FABP1、FABP2基因在不同年龄段和不同品种牛的各组织中均有表达,其中,FABP1基因以在肝脏和小肠中的相对表达量较高,且犊牛和杂交牛多个组织中的FABP1基因相对表达量极显著高于成年关岭牛(P<0.01,下同);FABP2基因则主要在小肠中高表达,且成年关岭牛小肠中的FABP2基因相对表达量极显著高于犊牛、显著高于杂交牛(P<0.05)。【结论】FABP1和FABP2基因在关岭牛中保守性较高,且在不同年龄阶段及不同组织中均有表达,尤其在肝脏和小肠中的表达水平较高,故推测FABP1和FABP2基因协同调控关岭牛脂肪酸的合成代谢。 展开更多
关键词 关岭牛 FABP1基因 FABP2基因 表达特征 脂肪酸
下载PDF
安徽省滁州市明湖幸福河湖建设探究 被引量:2
3
作者 孙长如 孙金魁 《治淮》 2023年第5期75-76,共2页
明湖是安徽省唯一项目入选水利部首批幸福河湖建设项目,项目以提升人民幸福感为目标,依托河长制,通过治理河湖和保护生态,打造美丽城市,为市民提供更好的居住生活环境。文章分析了明湖建设过程的具体做法、建设亮点及取得的初步成果,并... 明湖是安徽省唯一项目入选水利部首批幸福河湖建设项目,项目以提升人民幸福感为目标,依托河长制,通过治理河湖和保护生态,打造美丽城市,为市民提供更好的居住生活环境。文章分析了明湖建设过程的具体做法、建设亮点及取得的初步成果,并对项目未来进行了展望。 展开更多
关键词 幸福河湖建设 河长制 明湖
下载PDF
左旋咪唑治疗潜在型克山病的研究 被引量:2
4
作者 苗成波 杨杰 +5 位作者 孙金魁 何新科 郭润燕 周德华 师进京 梁志华 《中国地方病防治》 北大核心 1993年第5期302-304,共3页
潜在型克山病(简称潜克)是目前克山病发病的主要形式之一,迄今尚无特异性治疗措施,从提高机体免疫功能考虑探讨其治疗方法,我们于1984年10月至1985年4月在陕西省旬邑县,采用随机分组,安慰剂对照的方法,对69例潜克进行了左旋咪唑(LMZ)治... 潜在型克山病(简称潜克)是目前克山病发病的主要形式之一,迄今尚无特异性治疗措施,从提高机体免疫功能考虑探讨其治疗方法,我们于1984年10月至1985年4月在陕西省旬邑县,采用随机分组,安慰剂对照的方法,对69例潜克进行了左旋咪唑(LMZ)治疗的研究。并于1988年5月对患者进行了随访,结果报告如下: 展开更多
关键词 克山病 左旋咪唑
下载PDF
关岭牛MEF2A和MEF2B基因克隆及其组织表达特征分析 被引量:1
5
作者 孙金魁 许厚强 +4 位作者 阮涌 宋林锦 许家利 陈晨 石鹏飞 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期2643-2653,共11页
【目的】探究肌细胞增强因子-2(MEF2A和MEF2B)的生物学信息特征及其在关岭牛不同发育阶段各器官组织中的表达情况,为揭示MEF2A和MEF2B基因在关岭牛生长发育过程中的作用机制及挖掘地方种质资源提供理论参考。【方法】通过RT-PCR克隆MEF2... 【目的】探究肌细胞增强因子-2(MEF2A和MEF2B)的生物学信息特征及其在关岭牛不同发育阶段各器官组织中的表达情况,为揭示MEF2A和MEF2B基因在关岭牛生长发育过程中的作用机制及挖掘地方种质资源提供理论参考。【方法】通过RT-PCR克隆MEF2A(NM_001083638.2)和MEF2B(NM_001145793.1)基因编码区(CDS)序列,利用ProtScal、NetPhs 3.1、SOPMA、ProtParam、PSORT II Preadict、SWISS-MODEL等在线软件进行生物信息学分析,同时采用实时荧光定量PCR检测MEF2A和MEF2B基因在关岭牛不同发育阶段(犊牛、青年牛和成年牛)各器官组织中的表达水平。【结果】关岭牛MEF2A和MEF2B基因CDS序列分别编码492和368个氨基酸残基;MEF2A和MEF2B蛋白相对分子量分别为52和39 k D,对应的理论等电点(p I)为9.07和9.35,均属于碱性不稳定蛋白。关岭牛MEF2A和MEF2B蛋白以无规则卷曲和α-螺旋为主,主要定位于细胞核(分别占60.9%和52.2%)。关岭牛MEF2A基因与与挪威鼠和绵羊的MEF2A基因遗传距离较近,关岭牛MEF2B基因则与牦牛和绵羊的MEF2B基因遗传距离较近。实时荧光定量PCR检测结果显示,MEF2A和MEF2B基因在关岭牛不同发育阶段的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、里脊和脂肪等7个组织中均有表达,且受生长发育阶段的影响。其中,MEF2A基因在犊牛各器官组织中的相对表达量极显著高于在青年牛和成年牛(P<0.01,下同),随着年龄的增长,MEF2A基因在关岭牛心脏中的相对表达量极显著高于其他组织;MEF2B基因在青年牛和成年牛的相对表达量极显著高于犊牛,且在关岭牛心脏、肝脏和脾脏中的表达量与年龄呈正相关。【结论】MEF2A基因在关岭牛不同发育阶段心脏中高表达,而MEF2B基因在关岭牛不同发育阶段肺脏和脾脏中高表达,但在里脊中的表达相对较低。可见,MEF2A和MEF2B基因在关岭牛的生长发育过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 关岭牛 MEF2A基因 MEF2B基因 表达特征 生长发育
下载PDF
关岭牛FABP3和FABP4基因的分子特征及其组织表达分析 被引量:6
6
作者 石鹏飞 阮涌 +4 位作者 刘文娇 许家利 孙金魁 熊讯 许厚强 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期2281-2293,共13页
【目的】探究关岭牛心脏型脂肪酸结合蛋白(FABP3)和脂肪型脂肪酸结合蛋白(FABP4)基因的分子特征及其在不同年龄段和不同组织中的表达差异,为揭示牛FABP3和FABP4基因对脂肪酸的调控作用机制提供理论依据。【方法】通过RT-PCR扩增关岭牛FA... 【目的】探究关岭牛心脏型脂肪酸结合蛋白(FABP3)和脂肪型脂肪酸结合蛋白(FABP4)基因的分子特征及其在不同年龄段和不同组织中的表达差异,为揭示牛FABP3和FABP4基因对脂肪酸的调控作用机制提供理论依据。【方法】通过RT-PCR扩增关岭牛FABP3和FABP4基因蛋白编码区(CDS)序列,采用ProtScale、ProtParam、SOPMA、SWISS-MODEL、TMHMM-2.0、SignalP-5.0及NetPhos-3.1等在线软件进行生物信息学分析,同时以实时荧光定量PCR检测FABP3和FABP4基因在3日龄关岭犊牛、24月龄关岭牛(成年)及24月龄杂交牛(关岭牛×利木赞牛)各组织中的表达情况。【结果】关岭牛FABP3、FABP4基因CDS序列全长分别为402和399 bp,对应编码133和132个氨基酸残基,其蛋白二、三级结构以无规则卷曲和延伸链为主,均无跨膜结构域和信号肽,且为稳定的亲水性蛋白。关岭牛FABP3、FABP4氨基酸序列分别存在26和21个磷酸化位点,其中又以苏氨酸磷酸化位点为主;关岭牛FABP3和FABP4蛋白与FABP1、FABP6、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、脂蛋白脂肪酶(LPL)及激素敏感脂肪酶(LIPE)等存在互作关系。基于FABP3和FABP4氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树均显示,关岭牛与牦牛的亲缘关系最近,其次是绵羊,与鸡和斑马鱼的亲缘关系较远。FABP3和FABP4基因在关岭牛和杂交牛各组织中均有不同程度的表达,其中,FABP3基因以在心脏中的相对表达量最高,且在成年牛中的相对表达量极显著高于犊牛和杂交牛(P<0.01,下同);FABP4基因以在脂肪中的相对表达最高,且在犊牛中的相对表达量极显著高于成年牛。【结论】关岭牛FABP3和FABP4基因具有较高的遗传保守性,且以在心脏和脂肪中的表达水平较高,与脂肪酸代谢密切相关。 展开更多
关键词 关岭牛 FABP3基因 FABP4基因 分子特征 组织表达 脂肪酸代谢
下载PDF
猪FABP1和FABP2基因的分子特征及组织表达分析 被引量:7
7
作者 熊讯 李永 +5 位作者 阮涌 陈晨 宋林锦 石鹏飞 孙金魁 许厚强 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期935-945,共11页
【目的】明确脂肪酸结合蛋白(FABPs)对香苏杂交猪脂肪沉积的影响,为后续进一步探究猪脂肪细胞内FABP1和FABP2基因对脂肪酸代谢的调控作用打下基础。【方法】采集香苏杂交猪和柯乐猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大肠、小肠、背最长... 【目的】明确脂肪酸结合蛋白(FABPs)对香苏杂交猪脂肪沉积的影响,为后续进一步探究猪脂肪细胞内FABP1和FABP2基因对脂肪酸代谢的调控作用打下基础。【方法】采集香苏杂交猪和柯乐猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大肠、小肠、背最长肌及脂肪等组织样品提取总RNA,利用PCR克隆香苏杂交猪FABP1和FABP2基因编码区(CDS)序列,通过ProtParam、ProtScale、SOPMA、SWISS-MODEL、PSORTⅡPreadict及SignalP-5.0等在线软件进行生物信息学分析,并采用实时荧光定量PCR检测FABP1和FABP2基因在香苏杂交猪和柯乐猪各组织中的表达情况。【结果】香苏杂交猪FABP1和FABP2基因CDS序列分别为384和399 bp,分别编码127和132个氨基酸残基,对应的编码蛋白相对分子量为14107.23和15217.34 Da,均为亲水性蛋白;其二、三级结构均以β-折叠和无规则卷曲为主,无信号肽剪切位点,主要定位于细胞质。香苏杂交猪FABP1和FABP2氨基酸序列表现为与人类、牛、山羊的FABP1和FABP2氨基酸序列高度同源,对应的相似性均在80.0%以上,除斑马鱼外,与其他参考物种的相似性也在74.0%以上,故推测FABP1和FABP2基因序列的保守性较高;STRING预测结果显示,与这2个蛋白可能互作的蛋白有FABP5、FABP7、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、猪载脂蛋白A4(APOA4)、APOA1及脂酰辅酶A氧化酶1(ACOX1)等。FABP1和FABP2基因在香苏杂交猪和柯乐猪的各组织中均有表达,且以在肝脏、小肠和脂肪中的相对表达量较高,而背最长肌中的相对表达量最低;此外,FABP1和FABP2基因在香苏杂交猪肝脏和小肠中的相对表达量极显著高于其在柯乐猪对应组织中的相对表达量(P<0.01)。【结论】FABP1和FABP2基因在猪的各组织中均有表达,且以在甘油三酯和脂肪酸合成代谢的相关组织(肝脏、小肠和脂肪)中特异性高表达,可能对脂肪的合成代谢起重要调控作用。 展开更多
关键词 FABP1基因 FABP2基因 分子特征 脂肪酸代谢
下载PDF
F_(3)代香苏杂交猪DKK1基因多态性与生长性状的关联性 被引量:2
8
作者 许家利 许厚强 +4 位作者 阮涌 赵佳福 倪萌萌 孙金魁 石鹏飞 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期969-976,共8页
【目的】筛选出F_(3)代香苏杂交猪Dickkopf-1基因(DKKI)的单核苷酸多态性位点(SNPs),并分析基因多态性与生长性状的关联性,为培育香苏杂交猪新品系提供参考依据,同时为深入研究DKK1基因生物学功能打下基础。【方法】通过DNA混池测序的... 【目的】筛选出F_(3)代香苏杂交猪Dickkopf-1基因(DKKI)的单核苷酸多态性位点(SNPs),并分析基因多态性与生长性状的关联性,为培育香苏杂交猪新品系提供参考依据,同时为深入研究DKK1基因生物学功能打下基础。【方法】通过DNA混池测序的方法对164头F_(3)代香苏杂交猪群体DKK1基因进行SNPs鉴定,采用Excel 2017计算不同基因型的基因频率、基因型频率、遗传纯合度(Ho)、期望杂合度(He)、有效等位基因数(Ne)及多态信息含量(PIC),以卡方(χ;)检验分析基因型是否处于Hardy-Weinberg平衡状态,并在此基础上分析F_(3)代香苏杂交猪SNPs位点与生长性状的关联性。【结果】在F_(3)代香苏杂交猪DKK1基因的Exon-3,4区域发现6个SNPs位点,分别是A2010T、G2012C、C2014T、A2040C、C2042A和G2044C。6个SNPs位点的Ho均高于He,其中,A2010T、G2012C、A2040C、C2042A和G2044C等5个SNPs位点的PIC处于中度多态水平,C2014T位点的PIC则处于低度多态水平。χ;检验结果表明,仅C2042A位点处于Hardy-Weinberg极度不平衡状态(P<0.01),其他5个SNPs位点(A2010T、G2012C、C2014T、A2040C和G2044C)均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。关联分析结果表明,F_(3)代香苏杂交猪DKK1基因A2010T、G2012C、C2014T、A2040C和G2044C位点的不同基因型在体高、胸围、管围、胸深和腿臀围方面表现出差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)。【结论】F_(3)代香苏杂交猪DKK1基因A2010T、G2012C、C2014T、A2040C和G2044C位点不同基因型与体高、胸围、管围、胸深和腿臀围呈显著或极显著相关,可作为培育新品系的主效候选基因或与主基因紧密连锁的分子标记。 展开更多
关键词 香苏杂交猪 DKK1基因 单核苷酸多态性位点(SNPs) 生长性状 关联性
下载PDF
关岭牛MEF2C基因克隆与差异表达性分析
9
作者 孙金魁 许厚强 +2 位作者 黄勇 李永 熊讯 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期794-803,共10页
旨在分析牛肌细胞增强因子MEF2C(myocyte enhancer factor 2C)基因的分子特征和在不同组织中的表达特性。以关岭牛为试验材料,扩增MEF2C基因CDS区,对MEF2C基因序列和蛋白结构进行分析,RT-qPCR检测MEF2C在不同组织中的表达特性。结果显示... 旨在分析牛肌细胞增强因子MEF2C(myocyte enhancer factor 2C)基因的分子特征和在不同组织中的表达特性。以关岭牛为试验材料,扩增MEF2C基因CDS区,对MEF2C基因序列和蛋白结构进行分析,RT-qPCR检测MEF2C在不同组织中的表达特性。结果显示:牛MEF2C基因的CDS区全长为1326bp,编码441个氨基酸。MEF2C蛋白相对分子质量约为48kDa,理论等电点为7.71,主要以α-螺旋和无规则卷曲为主,含有1个MADS结构域,亚细胞定位显示MEF2C主要位于细胞核(60.90%)。牛MEF2C基因与牦牛同源性较近,与火鸡的同源性较远。RT-qPCR结果表明,MEF2C基因在关岭牛和杂交牛的7个组织中皆可表达,在肺脏和脾脏中差异极显著(P<0.01);心脏和肝脏以及背最长肌中差异显著(P<0.05);在成年牛的脾脏和心脏中表达量极显著高于犊牛(P<0.01);其他组织在犊牛阶段的表达量极显著高于成年牛阶段(P<0.01)。在成肌细胞分化过程中,MEF2C基因的表达量在0,12,24,48h呈逐渐上升趋势,不同时间段的表达量差异极显著(P<0.01)。结果表明MEF2C基因在关岭牛生长发育过程中发挥着重要的作用,为进一步探究MEF2C基因对关岭牛组织器官发育的影响,挖掘地方种质资源提供了数据支撑。 展开更多
关键词 关岭牛 MEF2C基因 基因表达
原文传递
关岭牛MyoD1与MSTN基因相互表达调控
10
作者 田念念 李雄 +3 位作者 黄勇 石鹏飞 孙金魁 许厚强 《生物技术》 CAS 2021年第5期417-424,共8页
[目的]旨在验证牛MyoD1与MSTN在表达调控上的相互作用。[方法]首先,以构建的p EGFP-N3-MyoD1和p EGFP-N3-MSTN过表达载体,分别在两组关岭牛原代成肌细胞中过表达MyoD1和MSTN,细胞转染24 h后,qRT-PCR检测并分析各处理组细胞中MyoD1和MST... [目的]旨在验证牛MyoD1与MSTN在表达调控上的相互作用。[方法]首先,以构建的p EGFP-N3-MyoD1和p EGFP-N3-MSTN过表达载体,分别在两组关岭牛原代成肌细胞中过表达MyoD1和MSTN,细胞转染24 h后,qRT-PCR检测并分析各处理组细胞中MyoD1和MSTN相比表达情况。其次,以海肾荧光载体pRL-TK为内参质粒,在转染p GL-3-MSTN-pro质粒的关岭牛原代成肌细胞中过表达MyoD1,在转染p GL-3-MyoD1-pro质粒的关岭牛原代成肌细胞中过表达MSTN,共转染36 h后,双荧光素酶试剂盒检测分析各组细胞中相对荧光素酶活性变化。[结果]过表达MyoD1组细胞中MyoD1相对表达量相比对照组上调至8 283.987±2 337.534(P=0.004),MSTN的相对表达量上调至7.849±1.089 (P=0.000 4);而MSTN过表达组细胞中MSTN相对表达量相比对照组上调至121 131.802±12 474.046(P=0.004),MyoD1基因的相对表达量下调至0.103±0.016(P=0.000 1)。进一步试验中,过表达MyoD1组细胞中相对荧光素酶活性变化相比对照组从1.131±0.051上调至3.030±0.212(P=0.0001);而过表达MSTN组细胞中相对荧光素酶活性变化相比对照组从1.797±0.136下调至0.543±0.092(P=0.000 2)。[结论]MyoD1的过量表达(P=0.004),会导致MSTN表达显著上调(P=0.000 4);而MSTN的过量表达(P=0.004),可负向调节MyoD1表达(P=0.000 1)。此外MyoD1的过表达会增强MSTN启动子活性(P=0.000 1);而MSTN的过表达会降低MyoD1启动子活性(P=0.000 2)。综上,MyoD1可正向调控MSTN表达,而MSTN也对MyoD1表达起负反馈调节作用。 展开更多
关键词 关岭牛 MyoD1 MSTN 过表达 双荧光素酶 启动子
原文传递
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部