小鼠增强型绿色荧光蛋白-过氧化物酶体增长因子活化受体γ2融合表达重组腺病毒的构建及表达

目的构建小鼠增强型绿色荧光蛋白(EGFP)-过氧化物酶体增长因子活化受体(PPAR)γ2基因的腺病毒重组体,并检测其在感染病毒的小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)中的表达。方法从pcDNAflagPPARγ质粒上切取目的片段PPARγ2,克隆入pEGFP-C1和pEGFP-N1,以pEGFP-C1-PPARγ2为模板通过PCR技术获得EGFP-PPARγ2基因,酶切DC315质粒,获得DC315-EGFP-PPARγ2质粒,在脂质体介导下与腺病毒辅助大质粒pBHGlox△E1、3Cre共转染HEK293细胞,包装产生复制缺陷型重组腺病毒Ad-EGFP-PPARγ2,酶切鉴定证实构建成功。转染HEK293细胞并检测其体外表达情况,经HEK293细胞扩增后,测定病毒滴度,转染小鼠BMSC,72h后鉴定其成脂分化情况。结果将pEGFP-C1-PPARγ2和pEGFP-N1-PPARγ2通过脂质体转染入HEK293细胞后,在倒置相差显微镜下观察,前者在细胞核内有较强的绿色荧光,后者的荧光强度则极低。对重组腺病毒进行酶切和PCR鉴定,证实含小鼠EGFP-PPARγ2的Ad5腺病毒载体构建成功。在倒置相差显微镜下观察到BMSC细胞核内有绿色荧光。结论成功构建含小鼠EGFP-PPARγ2的重组Ad5腺病毒载体,为基因辅助的脂肪组织工程技术、抗肿瘤研究等提供了安全有效的转基因载体。

碱性成纤维细胞生长因子研究进展

碱性成纤维细胞生长因子是细胞生长和分化的重要调节因子,具有促血管生成、细胞增殖、细胞趋化、细胞迁移等活性,在细胞分化和机体发育过程中发挥重要作用。碱性成纤维细胞生长因子通过与细胞膜表面的特异性配体结合,进而引发细胞内的一系列级联反应,从而产生各种生物学效应。本文对碱性成纤维细胞生长因子的生物学基础、信号转导、生物学功能以及临床应用研究进展作一综述。

过氧化物酶体增殖物激活受体γ2在脂肪干细胞脂向分化过程中的表达

目的观察转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(peroxisome proliferation activate receptorγ2,PPARγ2)及其磷酸化形式在脂肪干细胞脂向分化过程中的表达情况,为研究脂肪发育的分子机制提供新线索。方法组织块贴壁法培养脂肪干细胞,采用条件培养基(含有α-改良型、10%胎牛血清、10-6mol/L地塞米松磷酸钠、10-5mol/L胰岛素、0.2mmol/L吲哚美辛和0.5mmol/L3-异丁基-1-甲基黄嘌呤)对第3代细胞进行脂向分化诱导,RT-PCR、Western blot、免疫荧光技术检测在诱导的第0d、1d、3d、5d、7d、9dPPARγ2非磷酸化及其磷酸化形式的表达情况。结果随着细胞脂向分化时间的延长,PPARγ2非磷酸化及其磷酸化形式的基因和蛋白表达量都明显增加。结论 PPARγ2是脂肪分化的关键调节者,推测PPARγ2可能通过自身的磷酸化来促进脂肪干细胞的脂向分化。