中药地椒乙醇提取物对人白血病细胞增殖的抑制作用

目的:筛选中药地椒乙醇提取物的抗肿瘤活性成分,探讨其可能的抗肿瘤作用机制。方法:从野生地椒乙醇提取物中分离得到乙酸乙酯、正丁醇和丙酮3种萃取组分,以体外培养的人白血病细胞株K562和HL-60作为研究对象。将各萃取组分与肿瘤细胞作用一定时间后,计数存活肿瘤细胞数,分析药物对肿瘤细胞生长曲线的影响,考察各组分对肿瘤细胞生长的抑制作用。以去甲斑蝥素作为阳性对照组,通过形态学分析等方法,研究中药地椒乙醇提取物可能的抗肿瘤作用机制。结果:中药地椒乙酸乙酯萃取物对人白血病细胞株K562和HL-60均有显著的抑制作用,且呈药物浓度依赖性,并可诱导肿瘤细胞凋亡;而正丁醇和丙酮萃取物对两种白血病细胞均无显著的抑制作用。结论:体外实验表明,乙酸乙酯萃取物是中药地椒乙醇提取物中主要的抗肿瘤活性成分。

中药地椒提取物的抗肿瘤作用及对小鼠免疫功能的影响

目的 探讨中药地椒提取物的抗肿瘤作用及其对小鼠免疫功能的影响。方法 从野生地椒中提取挥发油及乙醇提取物并制成受试溶液 ,以荷S180瘤小鼠为模型 ,用不同浓度的地椒挥发油和乙醇提取物受试溶液给小鼠灌胃 ,连续给药 9d后 ,测算地椒提取物组、正常组、阴性对照组和环磷酰胺组各小鼠肿瘤、脾脏及胸腺的重量 ,计算抑瘤率、脾指数和胸腺指数。结果 地椒乙醇提取物高浓度组 (40g生药·kg- 1·d- 1)抑瘤率为 51.5% (P <0 .0 1) ,低浓度组 (2 0g生药·kg- 1·d- 1)抑瘤率为3 6.4% (P <0 .0 5) ;地椒挥发油高浓度组 (40g生药·kg- 1·d- 1)和低浓度组 (2 0g生药·kg- 1·d- 1)抑瘤率均为 3 9.4% (P <0 .0 5)。小鼠荷瘤后出现免疫指标的异常 ,表现为脾指数的升高和胸腺指数的下降。地椒乙醇提取物高浓度组可使荷瘤小鼠的脾指数降低并趋向正常 ,胸腺指数则介于阴性对照组和环磷酰胺组之间 ,其他地椒提取物组也有类似作用。结论 地椒挥发油及乙醇提取物均能抑制小鼠体内移植性肿瘤的生长 ,乙醇提取物的抗肿瘤作用更明显 ,并且表现为药物浓度依赖性。此外 。

去甲斑蝥素诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡的研究

目的研究新型抗癌药物去甲斑蝥素抑制人肝癌（ＢＥＬ－７４０２）细胞生长的机制。方法从细胞的形态学观察和ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳等方面考察去甲斑蝥素作用人肝癌细胞的特点，并进一步用免疫细胞化学及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ等分析手段研究癌基因蛋白Ｂｃｌ－２在此过程中的表达情况。结果１０ｍｇ／Ｌ去甲斑蝥素作用人肝癌细胞２４ｈ，部分细胞出现固缩、细胞质膜突起、核染色质异常凝集等，并伴有膜包被的凋亡小体的形成。ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳显示，处理组部分细胞的ＤＮＡ已降解成以约２００ｂｐ为基数的ＤＮＡ片断，呈现典型的“梯状”带纹。免疫细胞化学及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ分析显示该过程伴随癌基因蛋白Ｂｃｌ－２表达的减弱。结论新型抗癌药物去甲斑蝥素可以诱导人肝癌细胞发生凋亡。

斑蝥素及去甲斑蝥素诱导人红白血病K562细胞凋亡的细胞学研究

目的 研究抗癌药物斑蝥素及去甲斑蝥素诱导人红白血病 K5 6 2细胞凋亡的细胞学变化特点。 方法 观察药物作用后 K5 6 2细胞形态的动态变化、一般及超微结构特征 ,并用流式细胞术分析斑蝥素及去甲斑蝥素诱导 K5 6 2细胞凋亡与细胞周期的关系。 结果 2 mg/ L斑蝥素及 10 mg/ L去甲斑蝥素作用 2 4h,部分 K5 6 2细胞质膜突起 ,染色质异常凝集 ,原位复染显示这些细胞质膜的通透性没有增强 ,DNA琼脂糖凝胶电泳呈现细胞凋亡特有的“梯子”状带纹。电镜下 ,加药处理组中部分细胞染色质凝集成块 ,没有核膜包被 ,部分细胞染色质靠核膜边集呈新月形 ,胞浆浓缩 ,内质网结构正常或有扩张 ,呈现典型的凋亡细胞形态。流式细胞术分析结合细胞形态学研究表明 ,斑蝥素及去甲斑蝥素诱导 K5 6 2细胞凋亡与细胞 G2 / M期阻滞相关。 结论 斑蝥素及去甲斑蝥素能够诱导 K5 6 2细胞凋亡 ,凋亡大部分发生在细胞周期的 M期 ,也有少量发生在间期 ,是多点启动的。

去甲斑蝥素诱导人红白血病K562细胞凋亡的实验研究

体外实验证明１０μｇ．ｍｌ－１去甲斑蝥素作用于人红白血病Ｋ５６２细胞２４ｈ，可诱导Ｋ５６２细胞发生凋亡。提取加药组细胞ＤＮＡ进行琼脂糖凝胶电泳呈现典型的ＤＮＡ“梯子”，同时加药组细胞出现核固缩、碎裂及胞浆浓缩等形态学变化。流式细胞测试结合形态学观察，特别是细胞超微结构观察，证明去甲斑蝥素诱导的Ｋ５６２细胞凋亡大部分发生在细胞周期的Ｍ期，也有部分发生在间期。免疫细胞化学结果表明，１０μｇ．ｍｌ－１去甲斑蝥素作用于人红白血病Ｋ５６２细胞２４ｈ，与对照组相比，加药组细胞中ｂｃｌ┐２蛋白表达增强，而Ｂａｘ蛋白表达减弱，两组间有显著性差异（Ｐ＜０．００１）。

原位复染鉴别细胞的凋亡与坏死

用10μg／ml去甲斑蝥素作用于人红白血病K562细胞24h，诱导其发生凋亡。采用台盼蓝染液染色，再瑞特-吉姆萨染液原位复染的方法，验证了凋亡细胞与坏死细胞质膜通透性不同的说法。利用此方法可以在普通光学显微镜下把一张涂片上的凋亡细胞、坏死细胞及活细胞区别开来。该实验也表明，常规用台盼蓝染液拒染细胞数来统计活细胞数的方法是值得商榷的。

新麦草的组织培养及染色体分析

新麦草的组织培养及染色体分析孙震晓，夏光敏，陈惠民（山东大学生物系．济南２５０１００）ＴＩＳＳＵＥＣＵＬＴＵＲＥＡＮＤＣＨＲＯＭＯＭＥＡＮＡＬＹＳＩＳＯＦＰｓＡＴＨＹＲＯＳＡＣＨＹＳＪＵＮＣＥＡ（ＦＩＳＣＨ．）ＮＥＶＳＫＩｓｕｎＺｈｅｎ－ｘｉａｏ；ｘ...

新麦草的核型分析

新麦草的核型分析孙震晓，夏光敏，陈惠民（山东大学生物系，济南２５０１００）ＫＡＫＹＯＴＹＰＥＡＮＡＬＹＳＩＳＯＦＰＳＡＴＨＹＲＯＳＴＡＣＨＹＳＪＵＮＣＥＡ￥ＳｕｎＺｈｅｎ－ｘｉａｏ；ｘｉａＧｕａｎｇ－ｍｉｎ；ＣｈｅｎＨｕｉ－ｍｉｎ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎ...

结肠癌病人几种细胞的Raman光谱

文章给出了结肠癌病人的几种细胞的拉曼光谱。从实验谱线中得到,均有构像不灵敏的苯丙氨酸的单取代苯环的伸缩振动谱线1002cm^(-1),谱线强而半高宽较小,且不易改变,可作为生物细胞拉曼谱线的内标。白细胞拉曼谱线弱而少,红细胞拉曼谱线强而丰富,且有一个吡咯环的C—N呼吸振动谱带,窄而强的1919cm^(-1)的特征峰,宽而强的谱线1577,1560,1548cm^(-1),这是其他细胞不具有的。腺癌细胞的拉曼谱线相对较弱,许多谱线消失,生长在不同部位癌变细胞的荧光强度分布不同。通过这些特征拉曼谱线的不同,为癌症的诊断和治疗提供了有力的实验依据。

何首乌提取物对人正常肝细胞L02周期阻滞及凋亡的影响

目的:分析何首乌中致人肝细胞损伤物质的化学成分,初步探讨其致肝细胞损伤的机制。方法:生、制何首乌用70%乙醇提取,提取物经AB-8型大孔树脂吸附分离,依次用水、50%乙醇和95%乙醇洗脱得到生何首乌和制何首乌水洗脱物、50%乙醇洗脱物和95%乙醇洗脱物;生、制何首乌直接水煎煮得到水提物。体外培养人正常肝细胞L02,用含何首乌洗脱物和水提物的细胞培养液与细胞共同孵育一定时间后,检测药物对L02细胞生长的影响,筛选致肝细胞损伤成分。高效液相色谱法对有明显细胞毒作用的洗脱物进行成分分析,噻唑蓝法检测其对L02细胞增殖的影响,Giemsa染色进行形态学观察,流式细胞术检测L02细胞周期和凋亡情况。结果:生、制何首乌95%乙醇洗脱物对L02细胞有明显的生长抑制作用,其他组分对L02细胞的增殖无明显影响。成分分析显示,生、制何首乌95%乙醇洗脱物中大黄素含量最多,分别为(18.53±2.96)%和(10.28±1.34)%;何首乌95%乙醇洗脱物及大黄素可使L02细胞阻滞于S期,并诱导L02细胞凋亡。结论:何首乌95%乙醇洗脱物是何首乌中导致肝细胞损伤的主要物质,而大黄素是导致肝细胞损伤的成分之一。

何首乌R50部位诱导人结直肠癌细胞凋亡的作用机制

目的考察何首乌R50部位对体外培养的人结直肠癌细胞活性的影响,探究其对人结直肠癌细胞周期和凋亡的作用。方法体外培养人结直肠癌HT29和HCT116细胞24 h,加入何首乌R50部位50-300 mg·L^-1继续培养24,48和72 h,MTT法检测细胞存活率;何首乌R50部位50,100和200 mg·L^-1分别与HCT116和HT29细胞作用48 h,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;何首乌R50部位100 mg·L^-1与HCT116和HT29细胞作用48 h,Giemsa染色检测细胞及核的变化,Western蛋白质印迹法检测胱天蛋白酶原3和Pdcd4蛋白的表达。结果何首乌R50部位对HCT116和HT29细胞存活抑制作用显著,呈时间和浓度依赖性;不同浓度何首乌R50部位与HCT116和HT29细胞作用48 h后,对细胞周期的影响均不显著;但随着何首乌R50部位浓度的增加,细胞凋亡率明显增加,200 mg·L^-1组HCT116细胞凋亡率由对照组的（5.85±0.35）%增加至（27.65±1.62）%（P〈0.05）,HT29细胞的凋亡率由（10.25±0.77）%增加至（35.35±0.35）%（P〈0.05）;何首乌R50部位100 mg·L^-1作用HCT116和HT29细胞48 h,Giemsa染色可见部分细胞出现细胞固缩、核染色质凝集、凋亡小体形成等细胞凋亡形态;胱天蛋白酶原3和Pdcd4蛋白表达均下降。结论何首乌R50部位主要通过诱导人结直肠癌HCT116和HT29细胞凋亡而使其存活率下降,并通过胱天蛋白酶依赖信号通路诱导人结直肠癌细胞凋亡,Pdcd4蛋白表达下调可能与其相关。

去甲斑蝥素诱导人卵巢癌SK-OV-3细胞发生有丝分裂期阻滞与凋亡

目的考察去甲斑蝥素(NCTD)对人卵巢癌SK-OV-3细胞生长的抑制作用,探究其诱导细胞发生有丝分裂期阻滞及凋亡的过程及相关性。方法 NCTD 30,60,120和240μmol.L-1分别作用人卵巢SK-OV-3细胞24,48和72 h后,MTT法检测细胞存活率;NCTD 60μmo.lL-1分别作用SK-OV-3细胞0,6,12和24 h后,流式细胞术测定细胞周期的变化;NCTD 60μmol.L-1分别作用SK-OV-3细胞0,6,12和24 h,倒置显微镜下检测其对细胞形态学变化的影响;Giemsa染色检测细胞核的变化;间接免疫荧光术结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测细胞内微管分布及有丝分裂期纺锤体形成的影响。NCTD 60μmol.L-1分别作用12和36 h后,流式细胞术检测细胞凋亡情况;再将NCTD 60μmo.lL-1作用12 h后的细胞,采用温和的机械振荡法分离为悬浮细胞和贴壁细胞,继续作用24 h,流式细胞术及Giemsa染色检测分析两个时相两种细胞凋亡的影响。结果 MTT结果显示,NCTD 30～240μmol.L-1对SK-OV-3细胞的生长抑制作用存在明显的时间(P<0.05)和浓度依赖性(P<0.05);NCTD作用SK-OV-3细胞24,48和72 h的IC50分别为(261.3±2.4)μmo.lL-1,(48.3±1.7)μmol.L-1和(10.9±1.0)μmol.L-1。NCTD 60μmol.L-1分别作用于SK-OV-3细胞0,6,12和24 h,SK-OV-3细胞逐渐表现出G2/M期阻滞,呈时间依赖性;倒置相差显微镜下观察,NCTD引起SK-OV-3细胞逐渐收缩变圆,与周围细胞分离;Giemsa染色可见处于有丝分裂期的细胞显著增多,多个核细胞比例增多;免疫荧光染色发现,NCTD组细胞的微管系统受到干扰,有丝分裂期细胞纺锤体形成异常。NCTD作用细胞12和36 h凋亡率分别达20.4%和62.3%;将NCTD作用12 h的细胞,人工振荡分离为悬浮细胞和贴壁细胞,检测凋亡情况,同时检测继续作用24 h后两组细胞凋亡情况,发现处于有丝分裂间期的SK-OV-3细胞凋亡率大于处于有丝分裂期的细胞。结论 NCTD主要通过诱导人卵巢癌SK-OV-3细胞G2/M期阻滞和细胞凋亡抑制细胞生长。干扰细胞有丝分裂过程中微管的组装和纺锤体的形成可能是NCTD诱导SK-OV-3细胞M期阻滞的原因之一。NCTD诱导的SK-OV-3细胞发生凋亡可不依赖细胞M期阻滞。

百里香萃取物的体外抗自由基活性研究

对百里香的丙酮提取物的乙酸乙酯和正丁醇萃取物成分的体外抗氧化活性进行了研究,两者的总抗氧化力、羟自由基、Fe3+还原力和由AAPH和CuSO4诱导的大豆卵磷脂的过氧化抑制进行了比较。结果表明,乙酸乙酯和正丁醇萃取物成分均有较强的抗氧化能力,主要为低分子量的黄酮类化合物,且抗氧化能力呈浓度效应;乙酸乙酯萃取物的抗氧化能力明显强于正丁醇萃取物。百里香可作为一种新型的天然抗氧化剂资源。

何首乌生品与炮制品对大鼠肝脏的毒理学研究

目的:比较中药何首乌生品与炮制品对大鼠的肝毒性。方法:常规煎煮获取生何首乌与制何首乌水提物(分别命名为RPWE和PPWE);分别用RPWE和PPWE灌胃SD大鼠,均按何首乌生药量设低剂量组[20 g/(kg·d)]和高剂量组[40 g/(kg·d)],分别进行30 d及60 d实验;观察用药后大鼠的一般状况,并于实验结束时采集大鼠血液进行丙氨酸氨基转移酶(ALT)与天门冬酸氨基转移酶(AST)检测,同时测定大鼠肝重,计算肝脏系数,对大鼠肝脏进行常规组织切片和HE染色。结果:30 d及60 d实验中,给药组大鼠较空白对照组大鼠表现怠动、毛色不华且有腹泻现象,随着药物浓度的增大,怠动、毛色不华以及腹泻现象加重;灌胃60 d,给药组大鼠体重较空白组大鼠明显变轻,且给药浓度愈大,大鼠体重愈轻;30 d及60 d实验中,给药组大鼠肝脏系数均没有明显变化。大鼠血液生化检测发现,各给药组相对于空白对照组转氨酶(ALT、AST)没有显著性增加,但是灌胃60 d的大鼠肝脏切片HE染色发现均有不同程度的脂肪变性,炎性细胞浸润等。结论:生、制何首乌灌胃60 d,肝脏有轻度脂变及炎性细胞浸润。

羟基喜树碱对人肺癌和人胚肺成纤维细胞的细胞毒作用(英文)

目的研究羟基喜树碱（HCPT）对人肺癌细胞A549及人胚肺成纤维细胞MRC-5不同的细胞毒作用及其机制。方法 HCPT 20-200μmol·L^-1作用A549及MRC-5细胞24,48和72 h或脉冲给予HCPT 50-400μmol·L^-1作用24 h后恢复培养5 d,MTT法测定细胞存活;倒置相差显微镜下观察细胞形态学的变化;流式细胞术测定HCPT 50μmol·L^-1作用A549及MRC-5细胞48 h后细胞周期及凋亡。结果 HCPT 20～200μmol·L^-1作用48 h对A549和MRC-5细胞的增殖抑制作用均存在浓度依赖性,浓度-效应相关系数分别为0.898（P=0.015）和0.996（P=2.56E-5）,并且HCPT对A549细胞表现出更大的细胞毒活性,与MRC-5细胞相比有显著性差异（P〈0.05）。HCPT作用A549及MRC-5细胞48 h的IC50分别是（24.00±0.69）μmol·L^-1和（123.63±3.89）μmol·L^-1,表明A549细胞在HCPT作用48 h时对药物的敏感性高于MRC-5细胞4倍之多。形态学观察发现,HCPT 50μmol·L^-1作用48 h可引起大量A549细胞变圆、收缩,细胞质膜出泡及细胞溶解发生,相同情况下MRC-5细胞形态变化不明显。细胞周期和凋亡检测发现,HCPT 50μmol·L^-1作用48 h,引起A549细胞S期和G2/M期阻滞并诱导其凋亡,但是只引起MRC-5细胞发生S期阻滞,凋亡不明显。HCPT 50-400μmol·L^-1脉冲作用24 h后5 d恢复生长实验表明,A549细胞比MRC-5细胞受到更强的生长抑制作用,并且在开始恢复的24 h内,HCPT对2种细胞增殖的抑制作用仍然存在。在观察测定的5 d时间内,A549细胞及MRC-5细胞都没有完全恢复生长,但MRC-5细胞的恢复速度要快于A549细胞。结论 A549细胞比MRC-5细胞对于HCPT更为敏感,可能的机制有HCPT可以引起A549细胞S期和G2/M期阻滞并诱导其凋亡,而HCPT仅仅引起MRC-5细胞S期阻滞。

何首乌药理研究新进展

本文主要对近年来国内外何首乌的药理研究进展进行综述。何首乌的化学成分以二苯乙烯苷类、蒽醌类、磷脂类和多糖类化合物为主,具有明显的药理活性。近年来,有关何首乌的抗衰老及神经保护、降血脂及抗动脉粥样硬化、抗肿瘤、免疫调节、乌发生发等药理研究进展迅速。整理并科学地分析何首乌的传统功效及其新的药理学研究成果,可以为更好地开展相关研究及开发利用何首乌这一重要药用植物资源提供依据。

何首乌中大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷的分离纯化与体外抗癌活性研究

目的：分离提取何首乌R50组分中的抗癌活性成分并进一步研究其抗癌作用机制。方法：利用Sephadex LH-20、TLC色谱法、反向硅胶色谱分离系统对何首乌R50组分进行分离纯化，获得大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷，利用TLC和高效液相色谱法（HPLC）鉴定其纯度；MTT法检测大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷对人肝癌细胞HepG2、永生化人肝实质细胞L02、人结直肠癌细胞HT29和HCT116、人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y和人肺癌细胞A549的细胞毒作用；Giemsa染色观察药物作用后HepG2细胞和L02细胞的形态变化；流式细胞术检测大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷对HepG2细胞和L02细胞周期和凋亡的影响。结果：从何首乌R50组分获得大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷，纯度为96%；大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷对HepG2、HT29和SH-SY5Y细胞均有较显著的细胞毒活性（P〈0.05），且对HepG2、HT29细胞的作用表现出剂量效应（r=0.987，=0.002；=0.992，=0.008），而对L02、HCT116、A549细胞无明显的细胞毒作用；200μg/mL大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷作用HepG2细胞72 h，细胞生长受到抑制，并出现细胞核碎裂等凋亡细胞特征，L02细胞形态正常；大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷可诱导HepG2细胞发生G2-M期阻滞及凋亡。结论：大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷是何首乌R50组分中具抗癌活性的成分之一，其对永生化人肝实质细胞低毒，对人肝癌细胞有显著抑制作用，其作用机制与阻滞癌细胞周期和诱导细胞凋亡有关。