IL-2基因修饰对树突状细胞表达细胞因子的影响

目的：观察用白细胞介素 ２（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２，ＩＬ－２）基因修饰小鼠骨髓来源的树突状细胞（ｄｅｎｄｒｉｃ ｃｅｌｌｓ， ＤＣ）后，ＤＣ表达细胞因子和趋化因子的变化及ＤＣ体内免疫后，小鼠体内主要脏器中ＩＬ－２表达情况。探讨其对抗原提呈微环境的改善及其可能的机制。方法：用ＥＩＪＳＡ方法检测ＤＣ培养上清和小鼠血清及脏器中ＩＬ－２的含量，用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ＤＣ中ＩＬ－２，ＩＦＮ－γ，ＩＬ－１２，ＧＭ－ＣＳＦ，ＩＬ－４，ＩＬ－１０，ＴＮＦ－α，ＩＬ－１－β，ＭＩＰ－１β，ＭＣＰ－１，ＲＡＮＴＥＳ和ＩＰ１０等的表达，用ＦＡＣＳ分析ＤＣ表面ＩＬ－２受体的变化。结果：经ＩＬ－２基因修饰后，ＤＣ除了分泌高水平的ＩＬ－２外，尚能分泌一定水平的ＩＦＮ－γ和ＩＬ－１２，其表面表达的ＩＬ－２Ｒα密度增加。ＲＴ－ＰＣＲ分析表明其表达多种细胞因子和趋化因子，用ＩＬ－２基因修饰的ＤＣ免疫小鼠后，血清和脏器中能检测到高水平的ＩＬ－２。结论：ＩＬ－２基因修饰ＤＣ，能促进ＤＣ表达ＩＬ－２受体，并以自分泌形式分泌高水平的ＩＬＺ，优化其抗原提呈的微环境，提示可增强ＤＣ的抗原提呈功能。

IL-17等炎性因子在风湿免疫相关性血细胞减少骨髓细胞中的分泌状态及其临床意义

目的:观察风湿免疫相关性血细胞减少(Rheumatism immune-related hematocytopenia,RIRH)患者骨髓免疫细胞炎性因子分泌状态,探讨其对骨髓造血细胞损伤的病理作用及临床意义。方法:①ELISA法检测66例RIRH患者血清IL-5、IL-10、IL-12、IL-17和IFN-γ浓度,对照组30例采自健康查体血清;免疫化学法观察骨髓免疫细胞HLA-DR表达;②免疫荧光法观察骨髓细胞抗人球蛋白(IgG)抗体、FcγⅡ受体(FcγⅡR)、甘露糖受体(MR)、ICAM-1、IL-12、IL-17A与IL-17RA表达;30例缺铁性贫血患者骨髓作为疾病对照;③随机抽取32例血小板>50×109L-1无出血倾向患者,常规治疗同时联合复方丹参促进炎性因子代谢,与30例不联合复方丹参患者对照治疗效果。结果:①66例患者血清IL-5、IL-10、IL-12、IL-17和IFN-γ浓度分别为(126.04±7.66)ng/L,(316.23±25.163)ng/L,(328.43±27.01)ng/L,(48.17±4.22)ng/L和(40.28±3.69)ng/L,较之对照组(33.16±2.17)ng/L,(176.25±10.69)ng/L,(94.05±3.26)ng/L,(20.03±1.14)ng/L和(8.25±2.01)ng/L显著升高;②骨髓中活化的组织嗜碱细胞、嗜酸性粒细胞(EOS)、树突状细胞和巨噬细胞(Mφ)等免疫细胞高表达HLA-DR、FcγⅡR、MR、ICAM-1、IL-12、IL-17A和IL-17RA;③32例IRHS患者联合复方丹参组经治疗2周后,血清IL-5和IL-17含量较之对照组显著降低,血象恢复时间较之对照组提前1周。结论:RIRH患者骨髓中多种免疫细胞活化,表达和分泌多种免疫分子,介导ADCC效应、细胞免疫功能和炎性反应,是损伤病变的造血细胞的重要免疫机制。抗感染、抑制免疫联合复方丹参活血化瘀,能改善骨髓造血微环境,促进造血恢复。

骨髓造血细胞岛在免疫相关性血细胞减少患者中的异质性研究

目的:观察免疫相关性血细胞减少或免疫相关性全血细胞减少(Immuno-related hematocytopenia/immuno-relat-ed pancytopenia,IRH/IRP)患者骨髓"造血细胞岛"(Hematopoietic islands,HI)的不同性质,分析其与MHCⅠ/Ⅱ类分子和骨髓造血细胞抗人球蛋白(IgG)的关联,探讨相关免疫机制及其对临床诊疗的指导意义。方法:①对37例IRH/IRP患者骨髓涂片行常规瑞氏染色,观察HI的细胞成分和岛中免疫细胞性质;②细胞化学染色观察HI中免疫细胞过氧化物酶(POX)活性和铁贮存情况;③HLA-DR抗体免疫化学染色,观察免疫细胞MHCⅡ分子表达情况;④抗人IgG免疫荧光抗体(Immunofluores-cence,IF)染色,观察造血细胞和免疫细胞表面抗人IgG抗体表达;⑤观察不同HI在患者骨髓中出现的情况。结果:①HI中的造血细胞和免疫细胞各异,并与患者血沉和IgG、血清HLA-B27抗体浓度和过氧化物酶(POX)、HLA-DR和IF染色表达情况密切相关。②根据免疫细胞的生物学性质分为抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(Antibody dependent cell cytotoxicity,AD-CC)型HI、巨噬细胞(Mφ)型HI、抗原提呈(Antigen presenting,AP)型HI、浆细胞型HI和幼粒细胞型HI 5种。③HI中幼稚的造血细胞膜上均表达抗人IgG荧光抗体,HI中免疫细胞与造血细胞接触处和抗原提呈细胞(Antigen presenting cells,APC)浆中呈现不同的强阳性IF颗粒。④Mφ型HI数量最多,常与ADCC型HI在血沉升高患者骨髓中同时出现,HLA-B27和血沉均升高的IRP患者骨髓中可同时存在ADCC型、Mφ型和AP型HI。结论:IRH/IRP患者骨髓幼稚造血细胞膜表面抗原改变产生抗人IgG抗体是HI产生的基础;HI异质性及在骨髓中出现的不同形式则为患者体液免疫和细胞免疫不同程度的活化对造血细胞多重性损伤的生物学表现。

造血微环境免疫状态对IRHS骨髓单个核细胞端粒酶活性的影响及临床意义

目的:观察免疫相关性血细胞减少综合征(Immune related hematocytopenia syndrome,IRHS)患者骨髓造血微环境免疫分子表达状态,对骨髓单个核细胞(BMMNC)端粒酶活性(TA)的影响,探讨对造血细胞破坏的免疫损伤机制及临床意义。方法:①端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附法(TRAP-PCR-ELISA)检测366例IRHS患者治疗前后BMMNC的TA。②免疫化学染色和免疫荧光染色,观察患者骨髓细胞和造血微环境中HLA-DR、抗人IgG、FcγⅡ受体(FcγⅡR)、甘露糖受体(MR)、白细胞介素17A(IL-17A)及受体表达。③FACS技术检测患者外周血淋巴细胞CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞、CD3-CD16+/CD56+NK细胞和CD19+B细胞比例。60例健康查体者外周血淋巴细胞亚群作为正常对照,30例缺铁性贫血患者骨髓作为疾病对照。结果:①IRHS患者治疗前端粒酶活性为0.2617±0.0216,高于疾病对照组(0.0616±0.0313,P<0.01);其中HLA-B27+组高于HLA-B27-组(0.3013±0.0206比0.1923±0.0129,P<0.05),HLA-B27+IgG升高的重度IRP患者显著高于HLA-B27-IgG升高组(0.4016±0.0172比0.2211±0.0110,P<0.01)。②HLA-B27+IgG+组骨髓免疫细胞和造血微环境呈现细胞免疫活化和体液免疫均紊乱状态,高表达HLA-DR、FcγⅡR、IL-17A、IL-17RA和MR等免疫分子,外周血CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞和CD3-CD16+/CD56+NK和CD19+B细胞比例呈不同程度升高,造血破坏呈现多样性。③而HLAB27-IgG+组骨髓免疫细胞和造血微环境呈现体液免疫活化优势状态,高表达FcγⅡR,IL-17A等炎性因子不表达或弱表达,外周血仅CD19+B细胞比例升高,骨髓造血破坏方式主要为抗体依赖性细胞毒性(ADCC)效应。经糖皮质激素联合环孢素A等药物治疗后,患者血象恢复时BMMC的端粒酶重新失活,TA为0。结论:IRHS骨髓单个核细胞端粒酶活化,与患者骨髓造血微环境免疫状态和病变血细胞病理性损害程度密切相关。病毒感染和细胞免疫活化,多种炎性因子参与IRHS造血免疫损伤,是TA增强的重要因素。

MHCI类抗原多肽致敏IL-2基因修饰的树突状细胞对小鼠引流淋巴结T细胞亚群的影响及其免疫保护作用

目的 :探讨MHCI类分子限制性肿瘤抗原多肽Mutl体外冲击白细胞介素 2 (Interleukin 2 ,IL 2 )基因修饰的树突状细胞 (Dendrticcells,DC)对小鼠体内特异性免疫的活化机制。方法 :用腺病毒作为载体介导小鼠IL 2基因修饰DC ,用小鼠Lewis肺癌 3LL细胞株MHCI类分子限制性八肽Mutl冲击IL 2基因修饰的DC(DC IL 2 Mutl)免疫小鼠 ,用流式细胞术 (FACS)分析免疫保护小鼠接受 3LL细胞再攻击后引流淋巴结内T细胞亚群的比例变化。结果 :用Mutl冲击的DC免疫的小鼠抵抗3LL细胞再攻击时 ,引流淋巴结内CD8+ T淋巴细胞比例明显升高 ,DC IL 2 Mutl免疫保护的小鼠接受 3LL细胞再攻击后引流淋巴结内CD8+ 和NK细胞的比例都明显升高。结论 :研究表明MHCI类分子限制性肿瘤抗原多肽体外冲击IL 2基因修饰的DC免疫小鼠 ,能诱导小鼠产生特异性抗肿瘤免疫应答 。

免疫相关性血细胞减少患者骨髓造血细胞岛的免疫损伤研究

目的探讨免疫相关性血细胞减少(immuno-related hematocytopenia,IRH)患者骨髓"造血细胞岛"(hematopoietic islands,HI)对病变造血细胞破坏的免疫机制。方法 ELISA法检测患者血清IL-12和IL-17水平,观察其体内炎性因子的含量,免疫荧光(immunofluorescence,IF)染色,观察其骨髓HI中免疫细胞Fcγ受体Ⅱ(Fcγrecepter Ⅱ,FcγRⅡ)、甘露糖受体(mannose receptor,MR)、IL-12、IL-17A、IL-17RA和ICAM-1表达,分析HI的相关病理作用。结果 37例患者血清IL-12和IL-17的水平分别为(318.59±20.13)ng/L和(45.81±8.27)ng/L,显著高于对照组[(94.05±3.26)ng/L和(20.03±1.14)ng/L];经治疗后均下降近正常,较治疗前差异显著,P<0.01。患者骨髓中HI主要为抗体依赖性细胞毒(antibody dependent cell cytotoxicity,ADCC)型、巨噬细胞型(Mφ)和抗原提呈(antigen presenting,AP)型3种,HI中的免疫细胞高表达FcγRⅡ、MR,呈分泌状表达IL-12、IL-17A、IL-17RA和ICAM-1,在上述免疫分子的介导下,发挥体液免疫和细胞免疫及炎性损伤作用,破坏病变的造血细胞。结论 IRH患者骨髓中不同造血细胞岛是活化的免疫细胞破坏病变血细胞的不同免疫形式,是造血细胞在骨髓中"原位破坏的"重要场所。

低剂量环磷酰胺增强MHCⅠ类限制性肿瘤抗原多肽冲击致敏的树突状细胞的抗肿瘤转移效果

目的:研究低剂量环磷酸胺(Cy)联合MHC Ⅰ类限制性肿瘤抗原多肽Mutl致敏、白细胞介素2(IL-2)基因修饰的树突状细胞(DCs)对转移性肺癌小鼠的治疗作用及其免疫学机理.方法:制备小鼠骨髓来源的DCs,用转移性Lewis肺癌特异性多肽Mutl预激经IL-2基因修饰的DCs联合低剂量Cy治疗转移性肺癌小鼠.通过FACS分析其脾细胞内T淋巴细胞比例的变化,~51Cr释放法检测CTL和NK细胞杀伤活性.结果:肿瘤抗原多肽致敏、IL-2基因修饰的DCs与小剂量Cy联合后,能比单用DCs更有效地治疗转移性肺癌,小鼠脾细胞中CD8^+T细胞和NK1.1^+细胞明显比例升高,联合治疗组诱导出的CTL杀伤活性最高.结论:以肿瘤抗原多肽冲击致敏的IL-2基因修饰的DCs联合小剂量Cy能更有效地促进荷瘤宿主免疫应答,具有显著地体内抑制肺癌转移的效果.

原发性血小板增多症并发多器官栓塞、重症格林巴利综合征一例的护理体会

目的探讨原发性血小板增多症(essential thrombocythemia,ET)并发多器官栓塞、重症格林巴利综合征(Guillain-Barr syn-drome,GBS)患者的护理体会。方法予以呼吸机辅助呼吸、24h特别护理,心电监护观察患者的生命体征;及时观察血象,注意消化道应激性溃疡的发生;保持各种管路的通畅,严格气管切开护理,防治坠积性肺炎、压疮等并发症。结果经药物治疗1周后,患者血小板降至正常,第14天脱离呼吸机,无坠积性肺炎和压疮发生;治疗38d后颅神经损伤恢复,四肢肌力大部分恢复;至发病第60天,患者四肢肌力完全恢复。结论ET并发多器官栓塞、多组颅神经受损及因呼吸肌麻痹导致呼吸停止的重症GBS患者病情复杂、危重,严密观察病情变化,及时吸痰,根据患者的临床情况及血气分析资料及时调节呼吸机的潮气量和压力,及时翻身、叩背和吸痰,加强营养,能有效预防坠积性肺炎和压疮的发生,被动肢体活动和按摩能促进患者病情康复。

血浆置换治疗恶性浆细胞疾病的疗效观察与护理要点

目的观察血浆置换治疗恶性浆细胞疾病的疗效,总结护理要点。方法应用血浆置换联合药物治疗6例恶性浆细胞病并发充血性心力衰竭和尿毒症患者,置换期间注意患者的心肺功能变化及有无缺钙症状、荨麻疹和过敏性休克等。结果置换结束后,患者胸闷、气喘症状明显减轻,室性早搏明显减少或消失;血清白蛋白升高,免疫球蛋白明显下降(P<0.05)。结论血浆置换能有效去除恶性浆细胞疾病患者体内的M蛋白等病理性大分子成分,稀释患者的血浆黏稠度,降低血管内压力,有利于改善患者的心功能,增进常规化疗的效果;置换期间的心电监护、应用药物防治低血钙和过敏性休克是血浆置换护理的重点。

T细胞生长因子活化癌性腹水中TIL对树突状细胞抗原提呈的应答能力

目的 :用T细胞生长因子白细胞介素 2 (IL 2 )和植物血凝素 (PHA)活化癌性腹水中肿瘤浸润的淋巴细胞 (TIL) ,联合肿瘤抗原致敏的树突状细胞 (DC Ag)腹腔回输 ,探讨对腹腔抗原提呈微环境的优化作用 ,评估免疫治疗晚期癌性腹水的可行性。方法 :从晚期癌症患者腹腔积液中分离TIL ,用小剂量IL 2和PHA活化 ,流式细胞仪 (FACS)分析TIL表面IL 2R和IL 10R的变化 ;3H TdR掺入法检测TIL对DC Ag抗原提呈的增殖能力 ;腹腔回输后观察腹水中IFN γ的含量变化和对恶性腹水的治疗效果。结果 :癌性腹水中分离的TIL经IL 2和PHA活化后 ,细胞表面表达IL 2R的淋巴细胞数目明显增多 ,表达IL 10R的淋巴细胞数目明显减少 ,活化后的TIL对DC Ag的增殖能力增强 ;腹水中IFN γ的含量为 (3 5 0± 0 32 ) μg mL ,明显高于对照组 ;免疫治疗的完全缓解率 5 4 .5 % ,部分缓解率 4 5 .5 % ,总有效率 10 0 %。结论 :IL 2能有效地解除肿瘤细胞对淋巴细胞的抑制作用 ,促进TIL表面的Th1型细胞因子受体的表达 ,降低Th2型细胞因子受体的表达 ,增强对DC Ag的免疫应答能力 ,联合DC Ag腹腔回输 。

CD＿3AK与LAK细胞生物活性的比较

采用正常人外周血单个核细胞，经抗ＣＤ３单克隆抗体预刺激后，加入白细胞介素２继续激活的ＣＤ３ＡＫ细胞，与常规ＬＡＫ细胞的生物活性进行了比较。结果表明，ＣＤ３ＡＫ细胞的体外增殖能力，存活时间及细胞活性明显高于ＬＡＫ细胞细胞表型的检测发现ＣＤ３ＡＫ细胞的ＣＤ３＋、ＣＤ８＋表型高于ＬＡＫ细胞，而ＣＤ１６＋表型低于ＬＡＫ细胞（ｐ＜０．０ｌ）。认为ＣＤ３ＡＫ细胞是一种非ＮＫ型ＹＭ细胞毒活性的肿瘤杀伤细胞，为应用ＣＤ３ＡＫ细胞过继免疫疗法提供了有价值的参考依据。

难治性贫血与慢性再生障碍性贫血间红细胞免疫功能初探

检测了18例难治性贫血,20例慢性再生障碍性贫血患者的红细胞免疫功能,发现两种疾病的红细胞免疫粘附功能都降低,免疫调节因子都有失常.提示两种疾病都存着红细胞膜的缺陷和红细胞免疫调节机制的紊乱,两者红细胞肿瘤花环形成率血清红细胞免疫粘附促进因子活性差异显著,可望作为两种疾病临床鉴别诊断的辅助指标.

难治性贫血与慢性再障红细胞免疫功能临床观察

检测了18例难治性贫血(RA)、20例慢性再生障碍性贫血(CAA)患者的红细胞免疫功能。发现两种疾病的红细胞免疫功能有不同程度的降低,血清中红细胞免疫调节因子亦有变化。提示两种疾病都存在着红细胞膜的缺陷和红细胞免疫调节机制的紊乱,尤以两者之间肿瘤红细胞花环形成率(TRR)和血清红细胞免疫粘附促进因子(RFER)活性有显著差异,可望作为一种鉴别诊断辅助实验指标。

人胎鲜羊膜治疗超老龄糖尿病足100例疗效观察

将200例超老龄糖尿病足患者随机分为治疗组和对照组各100例,在全身治疗的基础上,治疗组采用羊膜覆盖治疗,对照组采用山莨菪碱加胰岛素外敷的方法治疗。结果治疗组总有效率、治愈率均明显高于对照组,两组差异有显著性(P<0.01)。提示羊膜对超老龄糖尿病足患者的治疗有较好的效果。

慢性肝炎患者血清Ⅳ型胶原含量分析

1 临床资料 本组共50例,男性41例,女性9例,平均年龄41.6岁(4～73岁)。所有病例的诊断均符合1990年(上海)第六次全国病毒性肝炎学术会议修订的诊断标准。其中慢性迁延性肝炎11例。慢性活动性肝炎17例,肝炎后肝硬化22例。其中部分病例经肝穿活检证实。 检测健康献血员20例作为正常对照组。