鸭多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H基因的表达及抗原性鉴定

为了对多杀性巴氏杆菌(Pm)外膜蛋白基因H(OmpH)的免疫学活性进行鉴定,本研究根据已发表的Pm70株序列(AE004439)设计了两对引物,用PCR方法扩增了鸭多杀性巴氏杆菌C48-102株的Omp H,扩增片段为1180bp(ORF为1056bp)。Omp H与GenBank中登录的C44-1、P-1059、P52、X-73、PM-70、serogroup D的序列比对结果表明:Omp H在核苷酸水平上同源性为82.8%～99.2%;在氨基酸水平上同源性为82.1%～99.1%。扩增去信号肽的Omp H基因,构建了原核重组表达质粒pHT-Omp H,转化BL21并诱导表达,SDS-PAGE结果表明:表达蛋白约为41ku,与预期的分子量大小相符;western blot结果表明具有良好的免疫学活性,这为以重组OmpH蛋白建立针对鸭Pm的血清学检测方法奠定了基础。

1型鸭疫里氏杆菌OmpA蛋白间接ELISA方法的建立

为建立检测1型鸭疫里氏杆菌(R.anatipestifer)的间接ELISA方法,本研究根据已发表的R.anatipestifer外膜蛋白A(ompA)基因序列(AF104937)设计引物,扩增1型R.anatipestifer HLG1株的ompA基因,构建重组质粒pHtb-ompA,转化大肠杆菌BL21(DE3),并利用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE和western blot结果表明,表达蛋白约为55 ku,具有良好的抗原活性。以纯化的OmpA为包被抗原建立间接ELISA并对条件进行优化。建立的ELISA具有良好的特异性、敏感性;与HLG1株菌体裂解蛋白为抗原的间接ELISA比较,符合率为91.3%。本研究建立的ELISA方法为R.anatipestifer的流行病学调查和SPF鸭的监测提供了快速、特异的血清学诊断方法。

以锯末为微生物载体的好氧堆肥反应器对人粪便降解特性的研究

以锯末作为好氧堆肥反应器的微生物载体,研究反应器对人类粪便的降解特性。在98d的堆肥反应试验中,每天定时、定量投加粪便并混合均匀。控制含水率和反应温度,对载体的总固体(TS)、有机质(VS)、灰分(Ash)和水溶性COD、总氮(TN)和氨氮(NH4+-N)含量进行了定量分析。研究结果表明,在载体体积为0.16m3、每日定量投加1kg粪便(4～5人的日排泄量)的条件下,载体中VS含量逐渐降低;灰分含量不断增加;水溶性COD去除率在前10d迅速提高,第10天达到83.5%,并一直保持到反应末期;水溶性TN和NH4+-N含量在反应过程中约有50%损失,但其含量在载体中不断增大,最终分别达到12mg/g和6mg/g。在整个过程中,反应器无臭无味,具有良好的卫生条件。因此,好氧堆肥反应器是一种可行的粪便处理设施,能有效降解有机物和保持肥分;在缺水或供水困难条件下,好氧堆肥反应器是一种良好的卫生和堆肥设备。

鸭多杀性巴氏杆菌外膜蛋白A基因表达及抗原性鉴定

根据已发表的Pm70株的序列(GenBank登录号:AE004439)设计了两对引物,用PCR方法扩增了鸭多杀性巴氏杆菌标准株C48-102的外膜蛋白基因A(ompA),扩增的片段为1062bp。将测序结果与GenBank中多杀性巴氏杆菌P52、PM70、T931317、T94289的ompA序列比对结果表明,核苷酸水平上同源性为89.0%～98.9%;在氨基酸水平上同源性为90.7%～99.2%。全ompA序列在大肠杆菌中干扰蛋白的正常表达,因此截断ompA蛋白的信号肽序列,将去信号肽的ompA基因插入到pPRO-EX-Htb载体上,构建了原核表达载体Htb-ompA,转化BL21,并诱导表达,SDS-PAGE结果表明,表达蛋白约为35kDa,与预期的分子量大小相符。Western-blot结果表明,表达的蛋白具有良好的抗原活性。本研究重组蛋白ompA的获得,为敲除ompA基因多杀性巴氏杆菌突变株的血清学检测奠定基础。

CMIP3和CMIP5模式对北太平洋海平面气压变率主导模态的评估

利用20世纪再分析资料(1871～2010年),分析了北太平洋(135°E～100°W、10°～65°N)海平面气压变率的前2个主导模态的时空特征,并结合CMIP3和CMIP5耦合模式模拟的结果,对比评估了两代CMIP耦合模式对北太平洋海平面气压变率主导模态的模拟效果。结果表明,北太平洋海表面气压异常变化的第1模态呈现阿留申低压型的变化特征,变率最大的中心位于阿留申群岛附近,而第2模态表现为北太平洋涛动型的变化,北面中心位于阿留申群岛偏北地区,南面中心位于30°N的中太平洋地区,南北呈现反相变化;CMIP3多模式集合仅能模拟出北太平洋海表面气压异常变率的第1模态,模拟不出第2模态,而CMIP5多模式集合对北太平洋海表面气压变率的前2个主导模态均能够较好地模拟出来。对北太平洋海表面气压异常变率的主导模态而言,CMIP5多模式集合无论在空间型还是强度、时间序列的模拟均优于CMIP3多模式集合的结果。

论WTO专家组职权范围的确定

WTO专家组的职权范围的确定,是一个重大的现实问题意义,它确立了WTO争端解决机制的管辖权。由于DSU的条文模糊,专家组及上诉机构通过解释DSU的方法界定了专家组的职权范围。但解释的过程存在瑕疵,结论也不正确。本文将就此进行讨论。