NF-κB参与低氧预适应对自体原位肝移植大鼠JNK通路的影响

背景:在肝脏缺血再灌注损伤中,NF-κB与JNK通路的串扰方式决定了细胞的死亡或存活。而将低氧预适应用于肝移植过程所导致的细胞凋亡现象,尚未见有报道。目的:探讨低氧预适应后NF-κB的表达对移植肝JNK通路的影响及保护作用。方法:采用经门静脉灌注法建立大鼠自体原位肝移植模型,SD大鼠随机分为正常对照组:不接受任何处理;自体移植组:行自体原位肝移植;低氧预适应组:移植前体积分数8%氮氧混合气体的低氧预处理90min,然后行自体原位肝移植。分别于移植后1,6,24h处死大鼠取肝脏标本检测肝组织丙二醛、超氧化物歧化酶水平,免疫组化方法测定大鼠肝组织p-JNK蛋白,RT-PCR检测肝脏NF-κB mRNA含量,透射电子显微镜下观察肝细胞的超微结构变化。结果与结论:与对照组比较,两移植组肝组织丙二醛水平升高,超氧化物歧化酶水平降低(P<0.05);与自体移植组比较,低氧预适应组丙二醛水平显著降低、超氧化物歧化酶水平显著升高(P<0.05)。与正常对照组比较,两移植组各时相p-JNK蛋白的表达、NF-κB mRNA的转录水平显著升高(P<0.05);与自体移植组比较,低氧预适应组NF-κB mRNA转录水平显著增高(P<0.05),p-JNK蛋白的表达明显降低(P<0.05)。透射电镜下自体移植组肝细胞出现典型的凋亡征象,而低氧预适应组肝细胞无明显凋亡形态。提示,肝移植大鼠低氧预适应后可能通过上调NF-κB的表达,减少活性氧释放,抑制JNK通路的持续激活,从而抑制肝细胞凋亡,减轻肝脏缺血再灌注。

低氧预适应对自体原位肝移植大鼠TNF-α诱导肝细胞凋亡的保护作用及机制的研究

目的:探讨低氧预适应(HP)对自体原位肝移植大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导肝细胞凋亡的保护作用以及可能的机制。方法:采用经门静脉灌注法制备大鼠自体原位肝移植模型,将SD大鼠随机分为正常对照组(NC)、自体肝移植(AT)和AT+低氧预适应(HP)3组。HP组术前用8%氮氧混合气体处理90 min。3组分别于术后1,2,12,24 h处死大鼠取肝脏标本,抽血检测肝功能,RT-PCR检测TNF-α、c-JunmRNA表达水平,透射电子显微镜下观察肝细胞的超微结构变化。结果:术后1、2、12、24h,HP组血清ALT,AST水平较AT组均显著降低,但均高于NC组(P<0.01);HP组各时段TNF-αmR-NA的转录水平较AT组显著降低,但高于NC组(P<0.05);HP组1 h,2 h,12 h时段c-Jun mRNA的转录水平较AT组显著降低,但高于NC组(P<0.05),24 h时段AT、HP、NC组间无显著差异(P>0.05);透射电镜下AT组肝细胞出现典型的凋亡征象,而HP组肝细胞无明显凋亡形态。结论:HP对移植所致的肝脏缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与减少上游TNF-α表达,抑制JNK信号通路的激活,减轻肝细胞凋亡有关。

低氧预适应对自体原位肝移植大鼠p-JNK蛋白表达的影响

目的:探讨低氧预适应(HP)对大鼠自体肝移植后p-JNK蛋白表达的影响及其保护作用。方法:采用改良的自体肝移植模型,将SD大鼠随机分为正常对照(NC)组、自体肝移植(AT)组和+AT(HP)组,每组32只。HP组术前用8%氮氧混合气体处理90min。分别于术后1、2、12和24h处死各组大鼠,每个时相点处死8只,取肝脏标本,抽血检测肝功能,免疫组织化学方法测定大鼠肝组织磷酸化的JNK(p-JNK)蛋白、细胞色素C的表达,并在透射电子显微镜下观察各组肝细胞形态学改变。结果:HP组血清ALT和AST水平显著低于AT组,差异有统计学意义(P<0.05);HP组各时相点的肝功能明显优于AT组;HP组各时相点p-JNK蛋白、细胞色素C的表达明显低于AT组,差异有统计学意义(P<0.05)。透射电子显微镜下AT组肝细胞出现典型的凋亡征象,而HP组肝细胞无明显凋亡形态。结论:HP对移植所导致的肝细胞凋亡有明显的抑制作用;其机制可能是通过抑制JNK信号通路的持续激活,下调p-JNK蛋白的表达、抑制线粒体细胞色素C的释放而发挥其保护作用。

白术多糖对自体肝移植大鼠缺血再灌注损伤的影响

目的探讨白术多糖(atractylodes macrocephalaon polysaccharide,AMP)对自体肝移植大鼠肝脏缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)的干预作用。方法 SD大鼠随机分为假手术组、模型组和白术多糖组,采用大鼠自体肝移植诱导IRI模型。造模后,给药组分别灌服相应的受试药物,假手术组和模型组灌服等量的生理盐水。分别于术后1、6、24 h取血测定大鼠血清丙氨酸转氨基酶(ALT)、天门冬氨酸转氨基酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)含量;ELISA法测定大鼠血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量;取固定部位肝组织做病理组织学检查;免疫组化方法检测肝组织中NF-κB的表达。结果模型组NF-κB蛋白表达增强,白术多糖组与模型组比较明显减弱(P<0.05);白术多糖能明显提高SOD的含量,并降低大鼠血清中ALT、AST、TBIL、DBIL及MDA含量;病理组织学检查结果显示白术多糖组肝脏淤血、肿胀程度明显轻于模型组;肝细胞变性坏死程度,汇管区炎症细胞浸润程度也明显轻于模型组。结论白术多糖可减轻自体肝移植大鼠肝脏IRI,其作用机制可能与其抑制NF-κB表达、干扰氧自由基对肝细胞膜的破坏,促进降酶及减轻形态学损伤有关。

白术多糖预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤后肝细胞线粒体结构的影响

目的探讨白术多糖预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤后肝细胞线粒体结构的影响。方法将54只成年雄性SD大鼠随机分成3组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(HIRI组)、白术多糖预处理缺血再灌注组(AMP组),分别于缺血60 min再灌注1 h,6 h,24 h后取材,透射电子显微镜下观察肝细胞的超微结构变化,定量分析线粒体的直径、周长及面积的变化情况。结果电镜下见缺血再灌注组大鼠肝细胞线粒体细胞核皱缩变形,染色质粗糙,核仁浓缩甚至裂解,部分膜破裂,线粒体嵴疏松溶解等,而白术多糖预处理组明显好转。定量分析线粒体的直径、周长及面积,AMP组与HIRI组差异具有显著性(P<0.05),AMP组线粒体损伤程度较HIRI组减轻。结论白术多糖对肝脏缺血再灌注损伤造成的肝细胞线粒体损伤具有显著的保护作用。

板蓝根多糖减轻自体肝移植大鼠缺血再灌注损伤的研究

目的:探讨板蓝根多糖对自体肝移植大鼠缺血再灌注损伤的作用。方法:将72只SD大鼠随机分为3组:自体肝移植模型组、板蓝根多糖+自体肝移植模型组、假手术组。分别于术后1、12、24、48 h采血检测血清转氨酶及TNF-α的水平,并使用透射电镜观察肝细胞及其线粒体的形态学改变。结果:板蓝根多糖+自体肝移植模型组血清转氨酶及TNF-α水平显著低于自体肝移植模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。透射电镜示:自体肝移植模型组肝细胞线粒体肿胀明显,膜结构模糊不清、部分破碎,线粒体嵴疏松溶解,有空泡形成;板蓝根多糖+自体肝移植模型组线粒体结构改变不明显,肝细胞结构形态基本正常。结论:板蓝根多糖具有减轻移植肝缺血再灌注损伤的作用。

肝动脉/门静脉早期复流对肝移植大鼠小肠缺血再灌注损伤的影响

背景:当肝动脉与门静脉早期复流时序不同时,是否会加重对肝移植大鼠小肠缺血/再灌注的损伤尚未见大量报道。目的:探讨肝动脉与门静脉早期复流对肝移植大鼠小肠缺血/再灌注损伤的影响。方法:采用门静脉灌注的大鼠自体肝移植模型,78只SD大鼠以简单随机化法分为3组:肝动脉组(n=36):行自体肝移植手术,以40C乳酸林格液由门静脉灌肝40min,开放肝动脉及下腔静脉,10min后开放门静脉;门静脉组(n=36):行自体肝移植手术,门静脉开放恢复肝脏血流后10min再开放肝动脉血流;假手术组(n=6):打开腹腔,游离肝脏后关腹。观察各组小肠显微及超微结构变化并测定一氧化氮水平。结果与结论:术后各实验组不同时段先后出现小肠绒毛排列不整或紊乱,小肠黏膜细胞线粒体大小不一,明显肿胀,呈类圆形,内有空泡变性,严重者可见嵴减少、断裂或消失。小肠组织一氧化氮水平均升高。上述变化在术后12h达高峰。术后肝动脉先复流组小肠显微及超微结构损伤及小肠组织一氧化氮水平明显高于门静脉先复流组。提示,肝动脉早期复流可以通过早期肝脏供氧以减少移植肝脏的损害,但门静脉的延迟开放则加重了肝移植大鼠小肠的缺血/再灌注损伤。

直视微创技术在肝硬化门静脉高压患者肝外胆管手术中的应用

胆囊结石及胆囊良性疾病是胆道系统常见的疾病,腹腔镜胆囊切除术是其治疗的首选方法,但合并肝硬化门静脉高压者施行腹腔镜手术的风险性较高。从手术时机和手术方式选择、手术技巧及围手术期处理等方面,将开腹直视微创手术技术应用于肝硬化门静脉高压肝外胆管手术的治疗体会进行总结。

低氧预适应对自体原位肝移植大鼠肠道TLR4表达的影响

目的:探讨低氧预适应(HP)对大鼠自体肝移植后肠道TLR4蛋白表达的影响。方法:将SD大鼠随机分为正常对照组(NC)、自体肝移植(AT)组和低氧预适应+AT(HP)组3组,每组24只,采用改良的自体肝移植模型。HP组术前用8%氮氧混合气体处理90 min,分别于术后1、6、12 h处死大鼠取小肠标本,抽血检测血清ALT及AST水平,采用免疫组化法测定各组小肠组织TLR4蛋白表达情况,及应用逆转录-聚合酶反应(RT-PCR)检测小肠组织TNF-αmRNA的含量。结果:HP组血清ALT、AST水平,小肠组织TLR4蛋白表达及TNF-αmRNA的含量均显著低于AT组,但均高于NC组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:HP通过下调肝移植大鼠小肠组织TLR4蛋白的表达,进一步抑制TLR4信号转导通路,减少TNF-α等细胞因子的合成与释放,从而减轻对移植肝功能的损伤。

对乳腺癌患者进行环乳晕切口肿瘤切除术的效果探讨

目的:对乳腺癌患者进行环乳晕切口肿瘤切除术的效果。方法:选取2011年9月至2014年5月期间江阴市人民医院乳房甲状腺外科收治的89例乳腺癌患者作为研究对象。将这89例患者随机分为对照组和观察组,对照组有42例患者,观察组有47例患者。对对照组患者进行传统肿瘤切除术,对观察组患者进行环乳晕切口肿瘤切除术。然后,比较两组患者的VSS评分、对治疗的满意率及病情的复发率。结果:在术后,观察组患者的VSS评分低于对照组患者,其对治疗的满意率高于对照组患者(P<0.05)。结论:对乳腺癌患者进行环乳晕切口肿瘤切除术的效果显著,且可提高其对治疗的满意率。

甲状腺癌颈淋巴结清扫联合迷走神经、桡神经浅支Ⅰ期吻合修复术1例

甲状腺乳头状癌临床上常见,生长缓慢,属于惰性肿瘤,较少侵犯周围神经。本文介绍1例患者因发现左颈部肿物伴声音嘶哑入院,颈部B超和CT提示双侧甲状腺结节恶性伴左侧颈部淋巴结转移,喉镜提示左侧声带麻痹。行常规双侧甲癌标准根治术+左侧根治性颈淋巴结清扫术,术中发现左颈中上群淋巴结侵犯迷走神经及颈内静脉,遂切除侵犯段神经和血管,于前臂锐性游离并离断桡神经浅支长约6.5 cm,将其移植于颈段缺失迷走神经处。术后恢复良好,未发生饮水呛咳、吞咽困难。

低氧预适应诱导肝脏HIF-1α高表达对自体原位肝移植大鼠JNK信号转导通路的影响

目的检测低氧诱导因子仪（HIF-1α）在自体原位肝移植大鼠肝脏的表达情况，探讨HIF-lα在JNK信号转导通路中的作用机制。方法采用单纯随机抽样法将96只SD大鼠分为正常对照组、自体肝移植组、低氧预适应＋自体肝移植组，每组32只。正常对照组：仅开腹分离血管，不作其他处理；自体肝移植组：采用经门静脉灌注法建立稳定的70％自体原位肝移植模型；低氧预适应＋自体肝移植组：术前用8％氮氧混合气体低氧预处理90 min，其他处理同自体肝移植组。分别于术后1、2、12、24h检测大鼠血清ALT、AST水平，免疫组织化学染色法测定大鼠肝脏组织HIF-1α的表达，RT-PCR检测c-JunmRNA表达水平，Western blot检测Cleaved Caspase-3蛋白表达水平。多组比较采用方差分析，两组比较采用t检验。结果术后l、2、12、24h，低氧预适应＋自体肝移植组大鼠血清ALT和AST水平显著低于自体肝移植组，但高于正常对照组，差异有统计学意义（F=2631．371、1177．642、810．383、682．848，743．618、1095．522、375．995、580．613，P〈0．05）。自体肝移植组大鼠术后各时相点HIF-1α蛋白的表达水平明显低于低氧预适应＋自体肝移植组，但均高于正常对照组，差异有统计学意义（F=191．737，284．482，459．419，215．782，P〈0．05）。低氧预适应＋自体肝移植组大鼠术后1、2、12hc-Jun mRNA表达水平显著低于自体肝移植组，但均高于正常对照组，差异有统计学意义（F=66．211，53．169，9．645，P〈0．05），术后24hc-Jun mRNA表达水平3组间比较，差异无统计学意义（F=1．100，P〉0．05）。低氧预适应＋自体肝移植组大鼠术后各时相点Cleaved Caspase-3蛋白表达水平显著低于自体肝移植组，但均高于正常对照组，差异有统计学意义（F=23．133，31．158，14．547，29．043，P〈0．05）。结论肝移植大鼠低氧预适应后HIF-1α的高表达可能通过抑制JNK信号通路的持续激活，下调Cleaved Caspase-3蛋白的表达，从而抑制肝细胞凋亡，减轻肝脏缺血再灌注损伤。

肝窦内皮细胞缺血再灌注损伤防治的研究进展

肝窦内皮细胞(SEC)在缺血再灌注损伤(IRI)的病理生理过程中发挥重要作用。有效保护肝窦内皮细胞已成为防治肝脏缺血再灌注损伤的关键。笔者就SEC受损的防治方法及其作用进行综述,包括低氧预适应、缺血后处理、缺血预处理、CO吸入、药物处理以及基因治疗等措施。

重症急性胰腺炎相关性肾损伤的发病机制及防治

重症急性胰腺炎相关性肾损伤的发病机制尚未完全明确，目前主要有肾脏血流动力学异常、炎性递质与细胞因子释放、肾小管细胞凋亡、肠道细菌和内毒素移位等学说，文中就近年来其发病机制及防治研究进展作一综述。

白术多糖对缺血再灌注损伤大鼠肝脏的保护作用

目的探讨白术多糖对大鼠肝脏缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用。方法成年雄性SD大鼠随机分成3组:假手术组,I/R组,白术多糖预处理缺血再灌注组(PC组),分别于成模后1,6,24 h 3个时段分别检测3组大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平;检测肝组织中ICAM-1 mRNA含量及IL-1的表达。结果 PC组及I/R组ALT,AST水平以及ICAM-1 mRNA含量和IL-1表达均高于假手术组(P<0.05),但PC组上述4个指标均较I/R组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论白术多糖可能通过降低ICAM-1的含量而减少炎症因子IL-1的生成,从而对肝脏I/R损伤起保护作用。

低氧预适应对自体原位肝移植大鼠血清内毒素的影响

目的探讨低氧预适应(HP)对大鼠自体肝移植后血清内毒素的影响。方法采用改良的自体肝移植模型进行研究。将SD大鼠随机分为正常对照组(NC)、自体肝移植(AT)和低氧预适应+AT(HP)3组,每组24只。HP组术前用8%氮氧混合气体处理90 min。各组分别于术后1,6,12 h处死大鼠取肠标本,抽血检测ALT和AST水平;在光镜及透射电镜下观察各组小肠黏膜损伤程度及线粒体超微结构改变;同时应用ELISA试剂盒测定大鼠血清内毒素水平的变化。结果 HP组血清ALT,AST及内毒素水平均显著低于AT组,但高于NC组,差异均有统计学意义(P<0.05);光镜下HP组小肠黏膜损伤程度明显低于AT组;透射电镜下HP组线粒体损伤较AT组明显减轻。结论 HP可减轻肝IRI对肠道黏膜的损伤,减少了肠道内毒素移位而降低肝移植大鼠血清内毒素水平,从而减轻内毒素对移植肝功能的影响,其机制可能与减轻线粒体结构损伤,减轻缺血缺氧后线粒体功能障碍,改善细胞的供能,提高细胞的抗缺氧能力有关。[中国普通外科杂志,2011,20(1):15-19]

线粒体型天门冬氨酸氨基转移酶在大鼠肝移植术后的变化意义

目的 探讨线粒体型天门冬氨酸氨基转移酶（m-ASI）以及m-AST与天门冬氨酸氨基转移酶（AST）比值在大鼠自体原位肝移植手术中的变化意义.方法 采用大鼠门静脉灌注的自体原位肝移植模型,A组：自体原位肝移植组;B组：正常大鼠假手术对照组.测定两组大鼠术后各时间段血清中m-AST、AST及ALT,计算出m-AST/AST比值,观察其在手术后的变化.结果 术后1 h A组ALT为1149.2 U/L,而B组ALT为111.3 U/L;术后1 h A组AST为819.5 U/L,而B组AST为128.2 U/L;术后1 h A组m-AST为290.8 U/L,而B组m-AST为40.5 U/L.大鼠自体原位肝移植术后m-AST、AST及ALT显著高于正常对照组（P＜0.05）,表明A组与B组相比肝脏损害的程度明显增加.A组m-AST/AST随时间延长其变化较明显.m-AST较AST在血清中半寿期短,而术后AST在本试验中则缓慢恢复正常,致使A组m-AST/AST比值术后6 h明显下降,值为0.12,说明术后6 h大鼠肝细胞线粒体损伤有所恢复.结论 血清m-AST的变化有利于大鼠肝移植手术的预后判断,较AST相比更能在早期反映肝细胞损伤及恢复情况,对大鼠肝移植术后的肝细胞及其线粒体损伤的评估和诊断治疗有指导价值.

低氧预适应对自体肝移植大鼠肝细胞EGR-1表达的影响

目的探讨低氧预适应对大鼠肝移植术后早期生长反应因子1（early growth response factor-1，EGR．1）的影响。方法采用门静脉灌注的大鼠自体肝移植模型：A组：低氧预适应大鼠自体肝移植组；B组：大鼠自体肝移植组；C组：正常大鼠对照组。比较大鼠自体肝移植术后肝脏组织病理学改变、肝组织中低氧诱导因子（hypoxic induce factor1，HIF-1）、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）的mRNA表达变化和早期生长反应因子1（EGR-1）的WB结果。结果A组大鼠因术前低氧诱导致HIF-1RNA的表达比B组和C组更明显，术后6h明显高于B组（t=9．601，df=10，2．tailedSig=0．000，P〈0．05）；A组和B组的Egr-1蛋白表达量术后都增多，但A组明显低于B组。而B组肿瘤坏死因子RNA的RT．PCR表达比A组和c组更明显，其中术后6h明显高于A组（t=-12．067，df=10。2-tailedSig=0．000，P〈0．05），与Egr-1蛋白表达呈正相关。肝细胞病理结果示A组肝小叶结构损伤较B组轻，肝细胞轻微肿胀，肝组织无明显改变。结论低氧预适应后大鼠移植肝中EGR．1生成适度增加，与大鼠自体肝移植组相比明显减少，降低了TNF等炎性因子的产生从而减少肝脏的病理损害。