布鲁氏菌M5-90ΔWboA基因缺失株的构建及免疫效果的初步评价

为获得毒力较弱并能区分自然感染和疫苗免疫的布鲁氏菌候选疫苗株,本研究用PCR方法扩增WboA基因的上下游同源臂序列,构建重组质粒pGEM-7zf-Δ WboA-Sac,电转化布鲁氏菌M5-90感受态细胞,筛选布鲁氏菌疫苗株M5-90的WboA基因缺失株,并对获得的M5-90Δ WboA遗传稳定性、毒力、免疫保护性、抗体水平等指标进行检测。实验结果表明M5-90Δ WboA株的毒力比M5-90株明显减弱,差异极显著(p<0.01),体液免疫和细胞免疫结果表明M5-90Δ WboA株与亲本M5-90株相比差异不显著(p<0.05),M5-90Δ WboA株和亲本株的保护率分别为10%和20%,表明M5-90Δ WboA株与M5-90株具有相似的保护性。凝集试验和western blot试验显示M5-90Δ WboA株免疫小鼠的血清反应结果为阴性。本研究构建的布鲁氏菌基因缺失株M5-90Δ WboA具有较好的遗传稳定性,毒力比亲本株更弱,免疫保护性与亲本株相当,并能以血清学检测方法区分野毒株感染和缺失疫苗株免疫的动物。

新疆羊口疮病毒分离鉴定及B2L基因分析与表达

为研究新疆地区羊口疮(Orf)病毒(ORFV)的生物学特性及流行特征,本研究采集新疆地区疑似Orf的羔羊结痂病料,用MDBK传代细胞进行病毒分离培养及电镜观察,进行动物回归实验;对ORFV B2L基因进行PCR扩增,并构建B2L基因原核表达重组质粒pET-32a-B2L,转化至大肠杆菌BL21。将表达产物进行SDS-PAGE及western blot检测,结果证明所获得的分离株ORFV-shz为ORFV,与India 67/04分离株的亲缘关系最近,其重组B2L蛋白大小为60 ku,并具有良好反应原性。

布鲁氏菌ery操纵子突变株生物学特性分析

布鲁氏菌ery操纵子参与赤藓醇代谢.赤藓醇能够促进布鲁氏菌的生长.为进一步研究布鲁氏菌引发宿主流产的分子机制,采用基因重组技术构建布鲁氏菌ery操纵子启动子缺失株(△ery),通过体内外实验探讨布鲁氏菌ery操纵子的生物学功能.研究结果显示,获得了布鲁氏菌ery操纵子缺失株;布鲁氏菌ery操纵子缺失株侵染胚胎滋养层细胞脱落较亲本株明显下降;巨噬细胞CFU计数缺失株作用组和亲本株作用组差异显著(P<0.05).试管凝集和虎红平板实验结果显示均出现凝集现象;检测血清中细胞因子IL-10和TNF-α的表达水平,△ery诱导机体产生的IL-10和TNF-α明显低于亲本株(P<0.05).小鼠脾脏细菌CFU计数结果显示,△ery较亲本株毒力明显下降.本研究表明,布鲁氏菌ery操纵子启动子缺失株毒力较亲本株明显下降,为进一步揭示布鲁氏菌引起流产的致病机制提供了一定的理论依据.

1983～1993年黑龙江省脊髓灰质炎监测结果分析

我国承诺了WHO西太区1995年消灭脊髓灰质炎(Polio)的目标,黑龙江省是1993年7月前建立无脊灰区的省份之一。因此分析1983年以来Polio监测资料对实现既定目标有着现实意义。

湖羊FecB基因在新疆细毛羊胎儿成纤维细胞中的表达

为培育携带FecB多胎基因的高繁殖率新疆细毛羊,本研究提取了湖羊卵巢的总RNA,在此基础上反转录为cDNA,通过PCR扩增得到了湖羊的FecB基因,再与pMD19-T载体连接,构建了pMD19-T-FecB重组质粒。通过双酶切与真核表达载体pEGFP-N1连接,得到了pEGFP-N1-FecB真核表达载体。经测序与酶切证明,成功构建了pEGFP-N1-FecB真核表达载体,并转染新疆细毛羊胎儿成纤维细胞,通过药物筛选获得了表达湖羊FecB基因的阳性新疆细毛羊胎儿成纤维细胞,为培育高繁殖率的新疆细毛羊奠定基础。

RT-PCR诊断风疹及E1膜蛋白基因序列分析

目的 应用RT -PCR方法扩增风疹病毒E1膜蛋白的核苷酸片段作为检测该病毒感染的靶目标。方法 对发疹后 4周 ,ELISA检测风疹病毒感染 (IgM阳性 )的病人血清样品提取RNA ,用RT -PCR方法扩增风疹病毒E1膜蛋白的 14 2bp核苷酸片段。测序并与英国代表株Thomas株的相应核苷酸序列进行比较。 结果 10份样品中 ,4份样品扩增到一条DNA片段。测序结果分析表明 3份样品扩增的风疹病毒E1膜蛋白的核苷酸片段序列与英国代表株Thomas株的相应核苷酸序列有 3个核苷酸的变异。一份样品扩增的风疹病毒E1膜蛋白的核苷酸片段序列与英国代表株Thomas株的相应核苷酸序列 4个核苷酸的差异。结论 该片段的核苷酸序列很稳定 ,适用于作为RT -PCR方法检测该病毒感染的靶目标。

犬瘟热病毒的分离与鉴定

[目的]分离与鉴定犬瘟热病毒(CDV)的石河子流行株。[方法]对临床症状疑似犬瘟热和血清学(ELISA)检测为阳性的自然发病犬,取其淋巴结为病料,接种于非洲绿猴肾细胞系(Vero),进行病毒的分离;用RT-PCR检测感染CDV分离株特异性核酸。[结果]病料接种Vero细胞产生明显的细胞病变(CPE),用RT-PCR技术可扩增出CDV特异性核酸,扩增出的基因片段与预期设计的长度相同,所扩增的CDV分离株H基因片段与CDV C54标准强毒株核苷酸同源性为98.4%。[结论]该研究成功分离并鉴定了CDV石河子流行株,为犬瘟热(CD)的确诊提供了依据。

隆化有座“百姓医院”

隆化镇医院的实践证明,即使在财政没有一分钱的支持下,只要坚持公立医院的公益性,依靠优质服务,提高医疗水平,也是可以走出一条摆脱以药养医,解决群众看病贵的新路。

运动,成就更好的自己

深冬的西安,早上6点多钟,天还没泛白。高学文吃过简单的早饭,背上健身包便出发了。他要去的地方是长安广场,这些年他每天都去那里健身打卡,风雨无阻。常年坚持健身,让高学文保持着健硕的体型。虽然已经68岁了,但从背影看。

姚明退役,篮板下再无“小巨人”

年龄和伤病,是运动员的天敌。它意味着体力不再,精力不济。很多运动员过了巅峰时期,要忍受更多的伤痛,付出比之前更多的努力,才能站在赛场上,但他们仍然毫无保留地拼搏厮杀,哪怕是“最后一舞”,仍执着于作为运动员的光荣和梦想。我们不仅仅见证了运动员巅峰时刻的荣耀,也亲眼目睹了老将迟暮的“黄昏之战”,那些有关热爱、有关拼搏、有关逐梦的故事,带给我们长久感动的同时,也给予了我们人生路上前行的力量。

布鲁氏菌2308ery基因启动子缺失株的构建及鉴定

目的:构建布鲁氏菌2308株ery基因启动子缺失株。方法:用PCR方法从亲本株2308上扩增ery基因启动子侧翼序列,将该片段与pMD19-T连接,亚克隆为自杀载体pGEM-7zf-Δery-sacB。将自杀载体电转化布鲁氏菌感受态细胞中经同源重组后,分别用100 mg/L氨苄和7%蔗糖筛选。对获得的基因缺失株进行RT-PCR鉴定和遗传稳定性检测。结果:成功获得ery基因启动子缺失株,2308Δery基因启动子缺失株未扩增出eryA基因。并且该缺失株在10代以内未发生回复突变。结论:成功构建2308Δery基因启动子缺失株,为研究布鲁氏菌的毒力基因及其流产机制奠定基础。

基质金属蛋白酶1体外释放试验对肺结核的诊断价值

目的探讨测定基质金属蛋白酶1(MMP-1)水平对早期结核病的诊断价值。方法获取肺结核患者(20名)与健康人(20名)外周血淋巴细胞。分别用结核杆菌全菌与外周血淋巴细胞共培养12h,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测培养上清液中MMP-1与IFN-γ浓度。结果结核组MMP-1与IFN-γ浓度明显高于健康对照组(P<0.001),检测敏感度与特异度分别为(88.9%,100%)和(85.7%,100%)。结论 MMP-1释放反应对结核病具有临床诊断价值。MMP-1与IFN-γ联合测定对早期结核病诊断具有临床意义,可用于早期结核的鉴别诊断。

手足口病患儿EV71的检测及分离鉴定

目的了解手足口病患儿感染EV71的情况,为科学防治疾病提供依据。方法采集手足口病患儿的咽拭子标本,接种于RD细胞,出现致细胞病变效应(CPE),运用RT-PCR方法,EV71引物检测样本和细胞培养物上清。结果标本直接用RT-PCR扩增,阳性率为30%(6/20),细胞培养后出现CPE的阳性率为45%(9/20),培养后经RT-PCR扩增阳性率为70%(14/20)。结论病毒分离和RT-PCR方法联合应用可以提高肠道病毒EV71的检出率,RT-PCR方法可以满足病毒流行期间同时处理大量样本的需要。

公园里的双人瑜伽

随着瑜伽的普及,双人瑜伽也越来越受人欢迎。我们在西安市清凉山公园就遇到了这样一对练习双人瑜伽的好姐妹,她们常常一起练习,彼此之间互相督促,取长补短、共同进步。

单杠上的花式炫技

公园里的单杠区是健身达人们炫技的重要场地之一,总是围满了捧场的观众,健身达人们在单杠上做着超高难度的绝技,令围观者眼花缭乱,叫好声此起彼伏。

跳起新疆舞,一展年华美

在西安兴庆宫公园东门,常年活跃着一支新疆舞舞蹈队。队员们身穿艳丽的民族舞裙,在欢快的音乐节奏中,步伐轻快地变换着各种舞姿。看着她们在舞池里载歌载舞,很难想象她们已经是平均年龄60岁的老人。新疆舞充满着热情和活力,既可以锻炼身体,又可以让人更加美丽和自信,是非常好的健身选择.

空竹,“抖”出精气神

清晨,西安丰庆公园的小广场上热闹非凡,许多空竹达人都会聚集到这里。随着一声声忽高忽低的喻喻声响起,几十只火红、艳橙的空竹在湛蓝的天空下翻飞舞动,划出一道道美丽的弧线。空竹是一项历史悠久的传统健身项目,它抖起来喻喻作响,声音十分悦耳,并且它玩法多样,具有很强的技巧性、观赏性,深受广大群众的喜爱。

泰拳,让我热气腾腾地活着

退休后的第一天,我就办了一张健身卡。辛苦熬了大半辈子,我早就满心期待退休生活了。年轻时,为了生计忙碌,整日困顿在格子间的工位里,根本无暇他事。现在孩子也长大了,可以自食其力了,我终于可以卸下人生的许多责任,好好善待自己,尽情地享受余生的每一天。

唤醒身体里的力量

我刚退休时,从头到脚都是大写的“老态”,那时我的右膝盖已经疼得不能正常上下楼了,一位经验丰富的骨科大夫告诉我,上了年龄的人,百分之八十的关节问题并不是骨头出了问题,而是肌肉不够强壮,要增加力量训练。