Ad-CTLA-4Ig基因导入对胰十二指肠移植大鼠免疫耐受的实验研究

目的研究基因转导法导入细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4融合蛋白基因(CTLA-4Ig)对诱导大鼠胰腺移植免疫耐受的作用。方法采用链脲霉素60mg/kg尾静脉一次性注射法诱导建立Wistar大鼠型糖尿病模型。以SD大鼠为供体,糖尿病Wistar大鼠为受体,用体外低温保存状态下对供器官行腺病毒介导CTLA-4Ig基因转导制作异基因大鼠胰十二指肠移植动物模型。术后监测血糖,记录大鼠功能性存活期。术后3、10、17、28d经大鼠眶后静脉取血,应用ELISA法检测血清IL-2表达,Western blot检测人CTLA-4Ig的蛋白表达。结果对照组大鼠功能性存活期为(11±1)d,转导组功能性存活期为(33±4)d(P<0.01);对照组大鼠术后血清中未检测到人CTLA-4Ig蛋白表达,所有转导组存活病例,第10d血清中均有人CTLA-4Ig表达;转导组术后第3d、第10d血清IL-2分别为(33.710±7.803)pg/mL、(47.846±14.050)pg/mL,小于对照组(P<0.01)。结论体外低温保存状态下对供器官行腺病毒介导人CTLA-4Ig基因转导,可以延长大鼠胰十二指肠移植术后功能性存活期,诱导免疫耐受。

异基因大鼠胰十二指肠移植的体会

目的总结大鼠胰十二指肠移植经验,建立稳定的大鼠胰十二指肠移植模型。方法对119例大鼠胰十二指肠移植的资料进行回顾分析总结。结果预试验组71例,存活率为74.6%;试验组48例,存活率为93.8%.所有存活病例均于24小时内恢复正常,移植后24小时血糖为4.64±0.98mol/L。结论合理的麻醉方法,熟练的操作技巧和技术,是建立稳定的大鼠胰十二指肠移植模型的关键因素。

实体膨胀管开发及修井应用技术研究

中原油田是复杂断块油田,套管损坏对油田开发后期带来了严重影响,2005年以来研究开发了实体膨胀管补贴套管技术,在膨胀管材料、连接技术、密封技术、膨胀工艺等方面的研究取得了突破,具有修复后内通径大、密封可靠、强度高、耐腐蚀等优点,整体技术达到了国际先进水平,并在套管堵漏、封堵出水层及套管加固等方面进行了应用。截至2008年底,已经成功应用21口井,下井最大深度3450 m,补贴最长井段53 m,形成了适应深井、高温高压、高矿化度井的膨胀管补贴技术,可进一步推广应用。

硫化氢对气田钢材的腐蚀影响及防治

金属腐蚀造成的经济损失占国民经济总产值的1%～4%,每年腐蚀的钢材占我国生产总量的20%,有30%的钢材、设备、工具因腐蚀而报废。由于腐蚀造成的经济损失每年高达300亿元以上,占国民生产总值的4%。高含硫化氢气田的井况防治技术是油田勘探开发工程中的重要一环,防治技术的好坏关系到油田的产能建设和开发速度。针对气田硫化氢对钢材的伤害及影响因素、预防措施、修复技术进行了探讨。

RNAi抑制胰腺癌细胞survivin表达并诱导细胞凋亡的实验研究

目的构建RNA i表达载体,并分析其对胰腺癌细胞PANC-1 surv iv in表达的抑制作用。方法用免疫荧光技术和RT-PCR检测胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白surv iv in的表达,并把surv iv in基因克隆到T载体进行测序,构建针对surv iv in基因的干扰载体,用脂质体转染胰腺癌细胞PANC-1,RT-PCR、w estern-b lot分析干扰载体对surv iv in表达的抑制情况,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果surv iv in在胰腺癌细胞PANC-1中高表达,其基因序列与G enB ank中公布的一致,干扰载体pTZU 6+1-svv2可以有效的抑制surv iv in的表达,抑制率约为74%,并诱导了肿瘤细胞的凋亡。结论用RNA i表达载体可以有效抑制胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白surv iv in的表达并诱导胰腺癌细胞凋亡。

非均匀地应力下的套管损坏机理

通过建立非线性有限元模型,分析了不同条件下不同套管内壁临界应力的变化规律,得到了不同生产内压下的临界地应力方程。套管内壁临界应力的分布随着最小地应力的增大及临界地应力非均匀系数的减小,其变化规律由不规则形状最终趋于一缩腰椭圆形。套管岩压外载随着地应力非均匀系数的减小,其形状趋于椭圆,与最大、最小地应力的方向相反。根据中原油田的地应力资料,普通套管无法承受异常高的非均匀地应力,应开发专用于岩膏层油水井的特种套管。

穿孔素和颗粒酶B蛋白表达对胰腺移植急性排斥反应早期诊断的研究

目的研究移植胰腺局部穿孔素和颗粒酶B的蛋白表达对急性排斥反应的早期诊断和鉴别诊断的意义。方法将40只四川当地杂种长白猪随机分为3组，即对照组（n=8）、移植组（n=16）、移植＋免疫抑制剂治疗组（n=16）。移植手术为同种异体经门静脉回流、肠内引流全胰十二指肠移植。免疫抑制剂治疗组在进行同种异体胰十二指肠移植术同时应用环孢A＋骁悉＋甲强龙三联免疫抑制治疗。分别于术前1d和术后1、3、5、7d检测受者的锁骨下静脉血胰岛素、胰高血糖素、血糖水平。术后1、3、5、7d，开腹取胰腺组织进行常规病理学检查和免疫组化染色检测穿孔素和颗粒酶B的蛋白表达。结果①对照组、移植组以及移植＋免疫抑制剂组之间受者的血糖、胰岛素、胰高血糖素水平变化有统计学意义（P〈0．05）。②胰腺移植＋免疫抑制剂组与单纯胰腺移植组相比胰腺组织中穿孔素和颗粒酶B的蛋白表达及穿孔素和颗粒酶B的阳性淋巴细胞计数的差异有统计学意义（P〈0.05）。③免疫组化染色检测移植后胰腺组织中穿孔素和颗粒酶B蛋白表达。比常规病理学检查诊断排斥反应早2～4d。结论移植胰腺组织穿孔素和颗粒酶B局部蛋白表达变化早于常规病理学改变，结合常规病理学检查可以对胰腺急性排斥反应做出早期诊断和鉴别诊断。

猪同种异体胰十二指肠移植门静脉回流肠内引流模型的实验研究

目的研究猪胰十二指肠移植治疗实验性Ⅰ型糖尿病的可行性及其意义。方法选四川当地杂种长白猪46头（体重25-32kg），分为供、受体2组（n=23），进行同种异体胰十二指肠移植手术。观察术后手术并发症，术前、术中及术后1、3、5及7d检测血糖、胰岛素及胰高血糖素水平，观察移植物存活及急性排斥反应情况。结果进行猪同种异体胰十二指肠移植23例，手术中因麻醉意外死亡1例，手术成功率为95．7％。发生手术并发症2例，其中静脉血栓形成1例（4．5％），十二指肠空肠吻合口漏1例（4．5％）。在切除胰腺30min内即可见血糖升高，术后第3d开始恢复至术前水平。胰岛素和胰高血糖素在切除胰腺30min内开始下降，术后第3d开始恢复到术前水平。手术后第1d开始出现排斥反应，并逐渐加重，第9d达到高峰，但未出现血糖、胰岛素及胰高血糖素水平变化和排斥反应的临床症状。结论猪胰十二指肠移植治疗Ⅰ型糖尿病效果确实、可靠，移植术后急性排斥反应是影响术后功能的主要因素。

P-32玻璃微球与I-125粒子治疗晚期恶性肿瘤比较

目的：比较p-32玻璃微球局部注射与I-125粒子植入在治疗晚期恶性肿瘤中的特点。方法：采用常规方法，将放射性核素P-32玻璃微球（32例）及I-125粒子（57例）在B超或CT引导下，经皮穿刺导入肿瘤组织内。结果：治疗后1-6月影像学复查，肿瘤体积有不同程度缩小，I-125粒子植入的放射性药物价格是P-32玻璃微球局部注射的10-15倍。结论：放射性核素内照射治疗晚期恶性肿瘤，确实可控制肿瘤发展，缩小肿瘤，缓解症状。I-125粒子较P-32玻璃微球储存使用更方便，适用于增殖较慢的恶性肿瘤。两种方法的合理使用具有较强的临床应用价值。

雷公藤多甙在糖尿病大鼠胰腺移植中的作用研究

目的探讨雷公藤多甙(TⅡ)对同种异体大鼠胰腺移植排斥反应的影响。方法本实验应用32只胰腺移植Wistar大鼠,分为两组:对照组,TⅡ组;分别于术后每日监测血糖,ELISA检测术后3、7天血清IL-2浓度,取移植物标本行病理学检查。结果TⅡ组大鼠移植后血糖低于对照组;血清IL-2浓度对照组明显高于TⅡ组;TⅡ组移植胰腺排斥反应较对照组轻。结论雷公藤多甙能诱导一定程度的免疫耐受。

P^(16)基因在骨肉瘤中的表达

应用兔抗人Ｐ１６蛋白多克隆抗体，以ＡＢＣ免疫法检测４５例骨肉瘤中Ｐ１６蛋白的表达。结果显示Ｐ１６在骨肉瘤中的表达，Ⅱｂ期明显低于＜Ⅱｂ期（ｐ＜０．０１），Ｐ１６蛋白失表达骨肉瘤患者术后生存期明显小于蛋白表达组。

181例猪胰腺移植的体会

目的:总结猪胰腺移植的经验,进一步提高大动物模型质量。方法:回顾分析2002.3～2004.1月我院实验室行猪胰腺移植手术的科研资料。结果:以5天器官功能均正常达到实验要求作为成功的标准,胰腺移植模型预实验组40例,完成手术16对,9例存活,存活率为56.2%;胰腺移植实验组67例,完成手术32对,25例存活,存活率为78.1%;胰肾联合移植组74例,完成手术37对,其中胰腺功能良好31例,移植肾功能良好29例,移植肾及胰腺功能均良好28例,存活率为77.2%。结论:模型成功的关键:术后对动物的精心管理;合适动物麻醉方法;手术操作技巧;研究者对动物和手术的态度;合理的营养支持。

猴猪非协调性异种胰肾联合移植的实验研究

目的尝试猴猪非协调性异种胰肾联合移植,观察异种移植间的免疫反应。方法整块切取猴的胰十二指肠、右肾及脾,保留带有腹腔动脉、肠系膜上动脉、右肾动脉的腹主动脉段。切除猪的胰腺制成I型糖尿病的模型,并切除猪的右肾。以端侧吻合的方式将供体猴腹主动脉段和门静脉与猪的肾后腹主动脉段和门静脉分别对应吻合;以端端吻合的方式将供受体的右肾静脉进行吻合;供体输尿管自腹壁引出腹腔。将猴的十二指肠与猪空肠行端侧吻合。结果移植物恢复灌注后5分钟开始出现超急性排斥反应,受体于术后19h死亡。结论本实验是对异种移植研究的初探;猴→猪异种移植间的超急性排斥反应可能存在其它的机制,有待进一步研究。

我国油田套管损坏的原因探讨

近年来，我国油田套管损坏速度呈直线上升趋势，有的井不足1年时间，有的井刚完井1个月套管就坏了，给原油生产带来重大损失。套管损坏，一是套管柱设计不合理，特别是在盐岩、泥（页）岩地层，设计载荷偏小；二是不合理的注水，加速了套管的损坏；三是套管柱强度设计本来就不富余，射孔给套管带来一定的损害，加速了套管损坏；四是套管的外腐蚀使套管穿孔造成内腐蚀，腐蚀使套管更易损坏；五是油层出砂、固井质量、套管缺陷等使套管损坏。造成套管损坏的因素很多，具体到每口井必然有一些主要因素，找到主要因素才好采取防范措施。

无机械性肠道准备行结直肠癌手术15例体会

肠道准备在结直肠手术中的作用在医学界尚有争议,文献报道,不做肠道准备可以导致感染和吻合口瘘的发生率升高,多数结直肠外科医生认为常规肠道准备是减少结直肠术后并发症的首要条件[1]。近年来。

结肠直肠癌患者肠道黏膜区域的菌群分布

目的比较健康人群与结肠直肠癌(CRC)患者粪便菌群及肿瘤/瘤旁黏膜菌群的差异性,尝试寻找CRC新的防治途径。方法收集了13例CRC患者粪便、6例患者肿瘤/瘤旁黏膜和20名健康对照人群粪便,利用16SrDNA测序技术与生物信息学方法分别对粪便和黏膜的菌群组成差异进行了分析。在流式细胞仪检测粪便中的细菌总数后,采用几种较为常见的细菌培养基对粪便及黏膜中微生物进行分离鉴定,并利用乳酸脱氢酶检测试剂盒测试了其中7株细菌对3株肠癌细胞凋亡的影响。结果健康人粪便和CRC患者瘤旁黏膜中的菌群α-多样性显著高于CRC患者粪便和肿瘤黏膜中菌群α-多样性(P<0.05)。从特异性微生物来看,与健康人群相比,CRC患者粪便中的特有菌为Lactobacillaceae,而其肿瘤黏膜上特有菌是Escherichia、Enterococcus、Fusobacterium等。通过体外实验发现,分离自CRC患者肿瘤黏膜处的Bacteroidesfragilis与Fusobacterium nucleatum分别对肠道癌细胞的增殖具有显著抑制活性(P<0.0001)与促进作用(P<0.001)。结论CRC患者粪便、肿瘤黏膜及瘤旁黏膜菌群与健康人群粪便菌群差异较大,且CRC患者粪便菌群不能代表肿瘤黏膜特异性菌群。体外实验结果表明,抑制肿瘤黏膜中F.nucleatum定植与促进具有癌细胞毒性的B.fragilis定植可能是治疗CRC潜在的有效方法。

p16蛋白在骨肉瘤的表达及与预后的关系

为研究ｐ１６蛋白在骨肉瘤发生中的作用及对预后的影响，采用免疫组化方法观察４６例骨肉瘤标本中ｐ１６的表达。结果表明，ｐ１６蛋白表达阳性率为５２．２％（２４／４６），阳性率在各组织学类型及临床分期的病例中无显著性差异。在３１例有随访资料的骨肉瘤中，ｐ１６阳性表达组１５例的术后生存期较ｐ１６阴性组为长，且差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。提示ｐ１６基因变异可能在骨肉瘤发生中起一定作用。

谈城市轨道交通盾构施工上软下硬地层施工技术

上软下硬是指在隧道断面的下部岩石，上部为软土，在同一掘进面形成了极大的反差，该地层在临近山区的地方比较常见。本 文就城市轨道交通中盾构施工为例，探究上软下硬地层施工技术。

天津市自然人群大肠癌筛查实践与成效分析

随着中国的城市化、工业化、老龄化进程加快，癌症已成为危害我国居民生命和健康的主要慢性非传染性疾病，而大肠癌是我国常见的恶性肿瘤，受饮食结构和生活方式的影响，特别是在城市地区，近年来发病率明显上升。2012年天津地区首次在全市范围内开展了以社区自然人群为基础的大肠癌筛查工作。天津市总面积1．19万平方公里，市辖区13个，市辖县3个，全市常住人口为1293．87万，50～60岁人口为20．57727万。2012年，天津市卫生局决定按年龄段以三年为一周期对全市40～74岁居民开展大肠癌筛查。2012年筛查对象为60～74岁居民，2013年筛查对象为50～60岁居民，2014年筛查对象为40～50岁居民。2012年和2013年工作已按计划完成，现将2013年筛查效果做初步分析。

利用生物信息学发现SPINK1为结直肠癌MTX耐药潜在治疗靶点

为筛选结直肠癌MTX耐药的潜在靶点,运用生物信息学手段从GEO(Gene expression omnibus)收集并整理有关结直肠癌甲氨蝶呤(MTX)耐药相关数据,利用GEO2R筛选对照细胞和耐药细胞表达差异的基因,并用细胞生物学手段验证该基因是否参与MTX耐药.结果显示15个基因在MTX耐药结直肠癌细胞中差异表达,其中13个上调,2个下调;其中表达差异最显著的是SPINK1.通过细胞增殖实验、细胞毒性实验证实敲低SPINK1抑制细胞增殖,解除结直肠癌甲氨蝶呤耐药性.该研究表明SPINK1可能是结直肠癌耐药潜在的治疗靶点.利用细胞生物学方法进一步确认其功能,可为进一步实验验证提供依据.