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EB病毒BLLF-1基因转染小鼠T细胞淋巴瘤的研究
1
作者
邓路瑶
郭长占
+5 位作者
徐兰
贺琼
肖雨萌
李爽
孟佳子
王月丹
《现代生物医学进展》
CAS
2008年第12期2208-2210,2220,共4页
目的:研究EBV膜蛋白gp350/220的表达对共刺激分子ICOS的影响以及与T细胞淋巴瘤的关系。方法:繁殖饲养BLLF-1转基因昆明鼠以及正常昆明鼠,观察它们淋巴瘤发病率的差异。取发病的BLLF-1转基因昆明鼠脾脏淋巴细胞,用FITC标记的抗gp350/220...
目的:研究EBV膜蛋白gp350/220的表达对共刺激分子ICOS的影响以及与T细胞淋巴瘤的关系。方法:繁殖饲养BLLF-1转基因昆明鼠以及正常昆明鼠,观察它们淋巴瘤发病率的差异。取发病的BLLF-1转基因昆明鼠脾脏淋巴细胞,用FITC标记的抗gp350/220单克隆抗体进行免疫荧光染色,检测gp350/220是否在该转基因昆明鼠淋巴细胞内表达及其表达部位。对发病转基因昆明鼠组织进行免疫组化染色,并与正常昆明鼠的进行对比分析。用RT-PCR方法检测转基因小鼠共刺激分子ICOS的表达变化。结果:BLLF-1转基因昆明鼠淋巴组织病理性改变与正常昆明鼠有显著差异,免疫荧光检测到该转基因小鼠淋巴细胞表达gp350/220于胞浆和胞膜上,病理学观察发现,发病小鼠淋巴结组织有反应性增生,脾脏淋巴瘤细胞浸润,免疫组化证明为T细胞淋巴瘤,转基因小鼠脾脏、肺脏及肿瘤中ICOS表达显著升高。结论:BLLF-1基因的表达,与该转基因小鼠发生T细胞淋巴瘤有关,并引起共刺激分子ICOS表达的变化,该转基因小鼠的建立,为我们进一步研究BLLF-1基因在T细胞淋巴瘤发病中的作用提供了良好的动物模型。
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关键词
EPSTEIN-BARR病毒
BLLF-1基因
淋巴瘤
ICOS
原文传递
利用细胞筛选法从噬菌体抗体库鉴定人源HIV-1单克隆中和抗体
被引量:
3
2
作者
张娜
满来
+2 位作者
孙坚萍
孟佳子
何玉先
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第5期471-479,共9页
以细胞法从HIV-1CRF07_BC特异性噬菌体抗体库中筛选和鉴定针对病毒包膜蛋白(Envelope,Env)的人源单克隆中和抗体。将pCH064.2-Env质粒转染293T细胞,以表达Env的活细胞淘洗噬菌体抗体库;利用细胞ELISA方法筛选Env特异性噬菌体阳性克隆,...
以细胞法从HIV-1CRF07_BC特异性噬菌体抗体库中筛选和鉴定针对病毒包膜蛋白(Envelope,Env)的人源单克隆中和抗体。将pCH064.2-Env质粒转染293T细胞,以表达Env的活细胞淘洗噬菌体抗体库;利用细胞ELISA方法筛选Env特异性噬菌体阳性克隆,并测定抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)序列;以Ni+2-NTA层析柱纯化抗体Fab,SDS-PAGE分析抗体纯度;采用基于转染细胞和重组蛋白的ELISA以及流式细胞技术分析抗体的结合活性;以HIV-1假病毒系统评价抗体的中和活性。四轮淘洗使细胞特异性噬菌体得到约650倍的高度富集,细胞ELISA筛选到28个抗HIV Env的阳性克隆,序列分析发现五个具有不同VH和VL序列的抗体Fab(2801、2837、2863、2870和2920)。这些抗体与转染env的293T细胞反应,但不与重组表达的可溶性gp120蛋白反应,说明它们有可能针对依赖于Env复合物的空间构象表位。我们发现2801、2863和2870三个Fab抗体对HIV-1CRF07_BC亚型CH120.6毒株具有较强的中和活性,其IC50值分别为2.24μg/mL、0.89μg/mL和3.09μg/mL。其中,2801和2863对B亚型HIV-1毒株SF162具有较强的交叉中和作用,其IC50值分别为0.69μg/mL和3.52μg/mL。提示表达于293T细胞表面的HIV-1 Env可以有效富集和筛选噬菌体抗体库,并能成功分离和鉴定依赖于Env空间构象表位的HIV-1中和抗体。因此本研究为探讨HIV-1中和抗体的反应机制和研发艾滋病疫苗提供了新的技术平台。
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关键词
HIV-1
中和抗体
包膜蛋白
噬菌体抗体库
细胞法筛选
原文传递
SARS冠状病毒S蛋白噬菌体抗原库的构建及筛选
被引量:
1
3
作者
吴瑞平
孟佳子
何玉先
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第3期280-286,共7页
本研究旨在构建SARS冠状病毒S蛋白特异性噬菌体抗原库,并用于鉴定抗S蛋白单克隆抗体的抗原表位。首先采用PCR技术扩增出SARS冠状病毒S蛋白的全基因,以DNaseI将其随机酶切成50~500bp不同大小的DNA片段。然后将DNA片段平末端化并连接到...
本研究旨在构建SARS冠状病毒S蛋白特异性噬菌体抗原库,并用于鉴定抗S蛋白单克隆抗体的抗原表位。首先采用PCR技术扩增出SARS冠状病毒S蛋白的全基因,以DNaseI将其随机酶切成50~500bp不同大小的DNA片段。然后将DNA片段平末端化并连接到经过改造的噬菌体表达载体pComb3XSS,经电转化大肠杆菌XL1-Blue和辅助噬菌体感染获得S蛋白的特异性噬菌体抗原库。利用两个抗S蛋白单克隆中和抗体(S-M1和S-M2)对S蛋白抗原库进行富集和筛选。结果表明,我们成功构建库容量为5.7×106的S蛋白噬菌体抗原库。通过对S-M1和S-M2的有效富集和筛选,分别得到14个和15个阳性克隆,序列分析初步揭示了抗体的抗原表位。因此,S蛋白噬菌体抗原库的构建为鉴定S蛋白的抗原表位提供了重要的技术平台,对研发SARS疫苗和诊断试剂具有重要的科学意义和应用价值。
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关键词
SARS冠状病毒
S蛋白
噬菌体抗原库
单克隆抗体
抗原表位
原文传递
题名
EB病毒BLLF-1基因转染小鼠T细胞淋巴瘤的研究
1
作者
邓路瑶
郭长占
徐兰
贺琼
肖雨萌
李爽
孟佳子
王月丹
机构
北京大学医学部免疫学系
北京大学生物医学实验教学中心
出处
《现代生物医学进展》
CAS
2008年第12期2208-2210,2220,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30771995
No.30671962)
+1 种基金
国家基础科学人才培养基金(J0630853/J0108)
教育部新世纪优秀人才支持计划资助项目
文摘
目的:研究EBV膜蛋白gp350/220的表达对共刺激分子ICOS的影响以及与T细胞淋巴瘤的关系。方法:繁殖饲养BLLF-1转基因昆明鼠以及正常昆明鼠,观察它们淋巴瘤发病率的差异。取发病的BLLF-1转基因昆明鼠脾脏淋巴细胞,用FITC标记的抗gp350/220单克隆抗体进行免疫荧光染色,检测gp350/220是否在该转基因昆明鼠淋巴细胞内表达及其表达部位。对发病转基因昆明鼠组织进行免疫组化染色,并与正常昆明鼠的进行对比分析。用RT-PCR方法检测转基因小鼠共刺激分子ICOS的表达变化。结果:BLLF-1转基因昆明鼠淋巴组织病理性改变与正常昆明鼠有显著差异,免疫荧光检测到该转基因小鼠淋巴细胞表达gp350/220于胞浆和胞膜上,病理学观察发现,发病小鼠淋巴结组织有反应性增生,脾脏淋巴瘤细胞浸润,免疫组化证明为T细胞淋巴瘤,转基因小鼠脾脏、肺脏及肿瘤中ICOS表达显著升高。结论:BLLF-1基因的表达,与该转基因小鼠发生T细胞淋巴瘤有关,并引起共刺激分子ICOS表达的变化,该转基因小鼠的建立,为我们进一步研究BLLF-1基因在T细胞淋巴瘤发病中的作用提供了良好的动物模型。
关键词
EPSTEIN-BARR病毒
BLLF-1基因
淋巴瘤
ICOS
Keywords
Epstein-barrvirus
BLLF-1 gene
Lymphoma
ICOS
分类号
R-332 [医药卫生]
R733 [医药卫生—肿瘤]
原文传递
题名
利用细胞筛选法从噬菌体抗体库鉴定人源HIV-1单克隆中和抗体
被引量:
3
2
作者
张娜
满来
孙坚萍
孟佳子
何玉先
机构
温州医科大学检验医学院生命科学学院
中国医学科学院病原生物学研究所
出处
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第5期471-479,共9页
基金
国家十二五艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项(2012ZX10001-008)
国家杰出青年基金(81025009)
国家自然科学基金(81101249)
文摘
以细胞法从HIV-1CRF07_BC特异性噬菌体抗体库中筛选和鉴定针对病毒包膜蛋白(Envelope,Env)的人源单克隆中和抗体。将pCH064.2-Env质粒转染293T细胞,以表达Env的活细胞淘洗噬菌体抗体库;利用细胞ELISA方法筛选Env特异性噬菌体阳性克隆,并测定抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)序列;以Ni+2-NTA层析柱纯化抗体Fab,SDS-PAGE分析抗体纯度;采用基于转染细胞和重组蛋白的ELISA以及流式细胞技术分析抗体的结合活性;以HIV-1假病毒系统评价抗体的中和活性。四轮淘洗使细胞特异性噬菌体得到约650倍的高度富集,细胞ELISA筛选到28个抗HIV Env的阳性克隆,序列分析发现五个具有不同VH和VL序列的抗体Fab(2801、2837、2863、2870和2920)。这些抗体与转染env的293T细胞反应,但不与重组表达的可溶性gp120蛋白反应,说明它们有可能针对依赖于Env复合物的空间构象表位。我们发现2801、2863和2870三个Fab抗体对HIV-1CRF07_BC亚型CH120.6毒株具有较强的中和活性,其IC50值分别为2.24μg/mL、0.89μg/mL和3.09μg/mL。其中,2801和2863对B亚型HIV-1毒株SF162具有较强的交叉中和作用,其IC50值分别为0.69μg/mL和3.52μg/mL。提示表达于293T细胞表面的HIV-1 Env可以有效富集和筛选噬菌体抗体库,并能成功分离和鉴定依赖于Env空间构象表位的HIV-1中和抗体。因此本研究为探讨HIV-1中和抗体的反应机制和研发艾滋病疫苗提供了新的技术平台。
关键词
HIV-1
中和抗体
包膜蛋白
噬菌体抗体库
细胞法筛选
Keywords
HIV-1
Neutralizing antibody
Envelope glycoprotein
Phage display antibody library
Cell-based screening
分类号
R373.9 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
SARS冠状病毒S蛋白噬菌体抗原库的构建及筛选
被引量:
1
3
作者
吴瑞平
孟佳子
何玉先
机构
温州医学院检验医学院与生命科学学院
中国医学科学院病原生物学研究所
出处
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第3期280-286,共7页
基金
国家十二五艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项(2012ZX10001-008)
国家杰出青年基金(81025009)
文摘
本研究旨在构建SARS冠状病毒S蛋白特异性噬菌体抗原库,并用于鉴定抗S蛋白单克隆抗体的抗原表位。首先采用PCR技术扩增出SARS冠状病毒S蛋白的全基因,以DNaseI将其随机酶切成50~500bp不同大小的DNA片段。然后将DNA片段平末端化并连接到经过改造的噬菌体表达载体pComb3XSS,经电转化大肠杆菌XL1-Blue和辅助噬菌体感染获得S蛋白的特异性噬菌体抗原库。利用两个抗S蛋白单克隆中和抗体(S-M1和S-M2)对S蛋白抗原库进行富集和筛选。结果表明,我们成功构建库容量为5.7×106的S蛋白噬菌体抗原库。通过对S-M1和S-M2的有效富集和筛选,分别得到14个和15个阳性克隆,序列分析初步揭示了抗体的抗原表位。因此,S蛋白噬菌体抗原库的构建为鉴定S蛋白的抗原表位提供了重要的技术平台,对研发SARS疫苗和诊断试剂具有重要的科学意义和应用价值。
关键词
SARS冠状病毒
S蛋白
噬菌体抗原库
单克隆抗体
抗原表位
Keywords
SARS coronavirus S protein Phage antigen library Monoclonal antibody Antigenic epitope
分类号
R373.9 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
EB病毒BLLF-1基因转染小鼠T细胞淋巴瘤的研究
邓路瑶
郭长占
徐兰
贺琼
肖雨萌
李爽
孟佳子
王月丹
《现代生物医学进展》
CAS
2008
0
原文传递
2
利用细胞筛选法从噬菌体抗体库鉴定人源HIV-1单克隆中和抗体
张娜
满来
孙坚萍
孟佳子
何玉先
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
3
原文传递
3
SARS冠状病毒S蛋白噬菌体抗原库的构建及筛选
吴瑞平
孟佳子
何玉先
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
1
原文传递
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