乳及乳制品三聚氰胺残留HPTLC检测方法的初步建立

以开发低成本和高通量的三聚氰胺（MA）检测方法为目的,初步建立用高效薄层色谱（HPTLC）检测乳及乳制品中三聚氰胺的方法。用高效硅胶G板,以四氢呋喃、水和冰醋酸为展开剂,氯气和碘-淀粉试剂为显色剂检测牛乳中的MA,检出限可达5~2.5 mg/L;而用一种初步尝试的浓缩展开原理,MA检出限可达1.0～0.5 mg/L水平。利用HPTLC完全可以建立一类廉价、操作简便和高检测效率的MA残留检测方法。

褪黑素对采后荔枝果实冷害及生理变化的影响

以采后“紫娘喜”荔枝果实为试材,使用0.5 mmol/L褪黑素(MT)溶液对其浸泡处理10 min,晾干后置于(4±1)℃、(85±5)%条件下冷藏30 d,研究MT处理对荔枝果实冷害及抗冷相关生理代谢的影响。结果表明,MT处理显著降低了荔枝果实冷害指数,推迟了果皮色度a*值下降;冷害指数在冷藏第30天较对照果实降低49.4%,果皮色度a^(*)值在第10~30天期间平均提高37.2%。MT处理减缓了果实膜相对电导率升高,抑制了丙二醛(MDA)、超氧阴离子(O_(2)·-)和过氧化氢(H_(2)O_(2))积累,如第30天时相对电导率、丙二醛含量、O_(2)·-生成率和H_(2)O_(2)含量较对照组分别降低29.6%,16.9%,6.9%和6.3%,从而减轻了果实氧化胁迫并使膜完整性得到维持。MT处理降低了果实多酚氧化酶(PPO)和过氧化物酶(POD)活性,同时提高了总酚、类黄酮和花色素苷含量,导致果实酶促褐变减轻。MT处理提高了果实超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)、脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)和谷胱甘肽还原酶(GR)等抗氧化酶的活性,维持了较高的抗坏血酸(AsA)和还原性谷胱甘肽(GSH)含量及AsA/脱氢抗坏血酸(DHA)和GSH/氧化型谷胱甘肽(GSSG)比值,从而增强了冷藏荔枝果实的抗氧化活性。此外,MT处理促进了冷藏期间荔枝果实LcMsrA1、LcMsrA2、LcMsrB1和LcMsrB2上调表达,进而改善了果实蛋白质氧化损伤修复能力。结论:外源MT处理可通过调节冷藏荔枝果实抗冷相关生理代谢使果实冷害得到缓解。

三聚氰胺对雌性Wistar大鼠的慢性毒性研究

三聚氰胺(melamine,MA)对小鼠的经口LD50为4550mg/(kg.bw),急性毒性属于低毒物质。为证实和客观评价其慢性毒性,以每千克饲料500、1000和2000mgMA/kg饲料的剂量对6周龄雌性Wistar大鼠进行了6个月慢性毒性试验。结果表明,各剂量组雌性Wistar大鼠肾、肝和膀胱均有不同程度地功能异常和器质性病变;血液ALT、AST、CRE和UA等生化指标均有不同程度地升高,肾、肝和膀胱黏膜均有不同程度地病理变化或损伤;每千克饲料2000mgMA/kg饲料的剂量能够抑制大鼠生长和采食,肾病理变化显著,出现结石;染毒组大鼠脾脏、骨髓等未见病变;MA对大鼠的最大无作用剂量应小于(35.7±15.4)mg/(kg.bw.d)。

芒果胶孢炭疽病菌应答菌丝机械损伤产生无性孢子的分子机制

胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)是引发芒果(Mangifera indica)炭疽病的主要病原体。室内平板培养胶孢炭疽菌不产生或产生很少分生孢子的情况时有发生,但菌丝在机械损伤后24–48小时会产生大量分生孢子。胶孢炭疽菌应答机械损伤诱导产孢的核心基因及关键代谢通路尚未见报道。基于转录组测序(RNA-seq)技术检测了芒果胶孢炭疽菌菌丝在机械损伤处理后2小时内5个时间点的基因表达变化,对差异表达基因进行GO富集和KEGG代谢通路富集分析,并对菌丝响应胁迫的基因动态表达数据进行分析。基于常微分方程ODE模型结合变量选择技术,构建了动态基因调控网络。结果表明,有417个差异表达基因参与应答胶孢炭疽菌菌丝机械损伤,分属12个聚类模块,有4条通路存在显著富集,分别是丙酮酸代谢、硫代谢、黄曲霉素合成途径和二萜合成途径。结合功能注释筛选出12个应答菌丝损伤胁迫的核心基因。研究结果为后续深入开展芒果胶孢炭疽菌产孢和致病机理研究奠定了重要基础。

芒果胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)CgFAE基因对孢子产量及菌丝生长的影响

炭疽病是芒果的重要病害之一,由胶孢炭疽菌引起。阿魏酸酯酶为细胞壁降解酶,在致病机理中起着越来越重要的作用。本研究克隆了芒果胶孢炭疽菌的一个阿魏酸酯酶基因FAE,命名为CgFAE,该基因编码一个含有539个氨基酸的蛋白,分子质量约为58.3 k D。为了进一步研究该基因的功能,根据同源重组原理,构建了CgFAE基因的敲除载体pCB1532-CgFAE,通过PEG介导的原生质体转化法将其转入到胶孢炭疽菌原生质体细胞中进行同源交换,经过对转化子进行抗性筛选和分子鉴定,获得CgFAE基因的敲除突变体ΔCgfae,并对其孢子产量和菌落生长情况进行分析,发现胶孢炭疽菌CgFAE基因的敲除突变体ΔCgfae的孢子产量低于野生型菌株,菌落生长慢于野生型菌株。以上结果表明,该基因与胶孢炭疽菌的产孢能力与菌丝生长有关。

干旱胁迫对番茄叶片蜡质合成相关非特异性脂质转运蛋白的影响

非特异性脂质转运蛋白(non-specific lipid transfer proteins, nsLTPs)是一类分子量较小的碱性蛋白质,参与胞外脂质性物质转运沉积。本研究目的在于探究nsLTPs在应对非生物胁迫时的生理功能。以Micro-Tom番茄为实验材料,花蕾期进行干旱胁迫,植株出现明显缺水症状后分别采集第1~5叶位的叶片,以同期种植的正常浇水番茄为对照。采用气相色谱-质谱联用(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)对蜡质成分进行了定性和定量分析,通过扫描电镜观察叶片表皮超微结构的差异,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)分析与脂质转运蛋白基因SlLTPG1和蜡质、角质合成相关基因SlCER6、SlGDSL1、SlGPAT4的表达量。结果表明:干旱胁迫后的番茄叶片表皮超微结构与对照组相比存在更多蜡质晶体覆盖,叶片表面细胞突起增多,褶皱减少。GC-MS和GC-FID (Gas chromatography-flame ionization detector)分析发现,番茄不同叶位间的蜡质含量存在差异,以烷烃类成份为主,干旱胁迫能够极显著地增加酯醛类化合物和烷烃类物质的增加。此外,nsLTP相关基因,蜡质合成相关基因SlCER6,SlGPAT4的表达水平均显著上升,SlGDSL1的表达水平下降,在抵御非生物胁迫过程中,本研究推测番茄非特异性脂质转运蛋白SlLTPG1能促进角质层蜡质的合成,并沉积在果皮表层,角质层结构和化学组成改变,角质层透性降低,从而有利于延缓叶片的蒸腾失水,这为提高果蔬的抗逆性和采后耐贮性具有重要借鉴意义。