基于P32蛋白的山羊痘病毒抗体荧光微球检测方法的建立

为建立一种山羊痘病毒(GTPV)抗体快速检测方法,试验将携带GTPV结构蛋白P32基因的重组质粒pET28a-P32转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导后获得了重组蛋白,纯化后经Western blot鉴定表明该蛋白具有良好的特异性和反应原性。以荧光微球为标记材料对P32蛋白进行标记,通过优化反应条件制备了快速检测GTPV抗体的荧光微球免疫层析试纸条,并对其性能进行评价。结果:该试纸条与山羊副流感病毒3型(CPIV3)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、羊口疮病毒(ORFV)的阳性血清均无交叉反应;阳性血清稀释至800倍仍能检出阳性,敏感性较高;批内变异系数小于10%,批间变异系数小于15%,稳定性较好;与ELISA检测方法对比的总符合率为92.5%。综上,本试验建立的荧光微球试纸条可用于GTPV抗体的快速检测和流行病学调查。

雪莲果及其鲜切产品贮藏技术的初步研究

贮藏期间雪莲果容易裂果和腐烂。鲜切雪莲果容易腐烂,褐变也是影响其货架寿命的主要因素之一。实验研究了雪莲果块根的适宜贮藏温度及温度和包装材料对鲜切雪莲果保鲜效果的影响。结果表明:5℃是雪莲果及其鲜切产品较适宜的贮藏温度,0.04～0.05mm厚复合袋包装鲜切雪莲果可显著抑制失水、褐变及腐烂等现象的出现,明显延长其货架期。

乙醇熏蒸对马铃薯绿变和α-茄碱含量的影响

研究不同浓度乙醇熏蒸处理对马铃薯绿变和α-茄碱含量的影响。结果表明:在光照条件下,马铃薯表皮绿变程度和α-茄碱含量随着贮藏时间的延长而增加;不同浓度乙醇熏蒸处理可有效控制马铃薯绿变并对α-茄碱具有降解作用,贮藏到12 d,马铃薯表皮叶绿素含量与α-茄碱含量明显低于对照,其中1 000μL/L乙醇熏蒸处理效果最佳。

超低氧处理对采后马铃薯绿变及品质变化的影响

绿变是影响马铃薯采后品质的关键因素。研究了20℃温度、80％～85％相对湿度、24h荧光灯照射条件下超低氧（ULO，0.3％±0．05％O2，CO2〈0．2％）处理3d和6d对经2～4℃贮藏3个月的马铃薯绿变的抑制作用以及对发芽指数、还原糖、淀粉及VC含量等品质指标的影响。结果表明，马铃薯块茎经超低氧3d和6d处理，可明显抑制光照引起的马铃薯绿变，并有效抑制其发芽和VC含量的下降，其中超低氧处理6d的抑制效果显著优于处理3d，贮藏12d后，马铃薯的绿变轻微，品质良好。

高二氧化碳处理对马铃薯绿变和龙葵素含量的影响

为了研究高二氧化碳处理对马铃薯绿变和龙葵素含量的影响,研究了光照贮藏期间,不同时间高二氧化碳处理后马铃薯表皮a值、叶绿素和龙葵素含量的变化。结果表明,随着贮藏时间的延长马铃薯表皮a值下降,颜色趋于绿色,高二氧化碳处理能够抑制马铃薯表皮a值的降低,贮藏期间HCO2-24处理表皮a值最高;叶绿素含量均有所升高,贮藏到12天,对照叶绿素含量达到17.11mg/kg,HCO2-12处理含量为7.10mg/kg,HCO2-48处理含量为4.80mg/kg,而HCO2-24处理含量为3.45mg/kg,从试验数据可以看出,高二氧化碳处理能够控制马铃薯绿变,延长货架期;贮藏后龙葵素含量升高,而HCO2-24处理含量有所降低,但差异不显著。

NaCl胁迫处理对采后马铃薯见光绿变的影响

为探究NaCl胁迫处理对采后马铃薯见光绿变及龙葵素生成的影响,本试验先将马铃薯块茎置于20%NaCl溶液中分别浸泡6 h和12 h,后置于光照条件下进行试验。结果表明:与见光对照相比,2个处理均显著提高了马铃薯的综合感官品质,货架期延长1倍;NaCl溶液处理较好地抑制了马铃薯表皮绿变,在同一光照时间,处理马铃薯表皮a*、叶绿素含量显著低于对照组;8天货架期后,2个处理马铃薯龙葵素含量显著低于见光对照组,8天货架期间,对照龙葵素增加了122%,而NaCl处理6 h和12 h的龙葵素含量分别增加了68.86%和91.42%。因此,20%NaCl处理可有效抑制马铃薯表皮绿变和龙葵素的产生,并且20%NaCl处理对马铃薯发芽也有明显的抑制作用。

饲料及饲料原料中霉菌毒素快速检测技术研究进展

霉菌毒素是由真菌产生的有毒代谢产物或次生代谢产物,在自然界中分布广泛,对动物和人类健康造成了极大危害。为此,本文介绍了饲料及饲料原料中常见的霉菌毒素及其对动物的危害,总结了近年来几种快速检测技术(酶联免疫吸附法、化学发光酶免疫分析法、免疫层析法、核酸适配体生物传感器)在霉菌毒素检测方面所取得的进展和存在的问题,并对霉菌毒素快速检测技术发展前景作出了展望。

玉米油中玉米赤霉烯酮的ELISA测定

用间接竞争酶联免疫分析法(ELISA法)对3种玉米油中的玉米赤霉烯酮残留进行了测定,以评价试剂盒的性能。结果表明,标准曲线线性方程y=-2.2x+0.66,相关系数r为0.9974,IC50为0.29μg/kg,线性范围为0.05-4.05μg/kg,灵敏度为0.05μg/kg,添加回收率均大于85%。该法测定玉米赤霉烯酮灵敏度高,重复性好,特异性高,适合用于检测各种玉米油中的玉米赤霉烯酮残留。

一株羊源A型产气荚膜梭菌的分离及初步鉴定

本文对山东某羊场发病死亡羊病料进行细菌分离。通过血平板、卵黄琼脂在厌氧条件分离到一株细菌,镜检为革兰氏阳性杆菌,经PCR的方法对菌株进行α、β、ε、ι四种毒素基因检测,最终确定为A型产气荚膜梭菌。本试验为该羊场产气荚膜梭菌的治疗提供实验室检测数据支持。

一株羊源无乳链球菌分离鉴定

无乳链球菌是引起羊乳房炎的重要病原微生物之一,研究从山东某规模化奶山羊场患病羊乳样中分离出1株无乳链球菌,药敏试验表明,分离株对氟苯尼考、头孢噻呋、恩诺沙星敏感,而对磷霉素、庆大霉素、硫酸卡那霉素、新霉素、多西环素、阿莫西林、环丙沙星耐药,该试验为羊场无乳链球菌性乳腺炎防控提供数据支持。

基于N蛋白单克隆抗体的小反刍兽疫病毒抗体检测胶体金试纸条的研制

本研究旨在建立一种简便、快捷、可直观检测小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)抗体的检测方法。将pET-32a-N重组质粒转化至大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,以纯化的PPRVN蛋白免疫8周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA)筛选及亚克隆,获得了抗PPRV N蛋白的单克隆抗体。将PPRV N蛋白分别作为金标抗原及检测线(T线)包被抗原、单克隆抗体作为质控线(C线)包被抗体,组装成检测PPRVN蛋白抗体的胶体金免疫层析试纸条。结果显示:成功获得1株能稳定分泌抗N蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为1F1;间接ELISA检测1F1腹水效价为1:128000;亚类鉴定结果为IgG1,轻链为kappa链。Westernblotting结果显示,1F1能与PPRV N蛋白特异性结合;间接免疫荧光(indirect immunofluorescent assay,IFA)结果显示,制备的单克隆抗体能够识别PPRV;建立的试纸条能够特异性地检测PPRV抗体,以不同批次的试纸条重复检测,结果无差异。根据122份临床血清的检测结果,PPRV抗体试纸条与ELISA试验的符合率为97.6%。本研究建立的试纸条检测方法具有良好的特异性、重复性和敏感性,可用于PPRV抗体的快速检测。

小反刍兽疫病毒Ⅱ系与Ⅳ系毒株SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR鉴别检测方法的建立

为建立小反刍兽疫病毒(PPRV)Ⅱ系与Ⅳ系毒株SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR的鉴别检测方法,针对PPRV-H基因的高变区域设计1对特异性引物,确定反应条件,分析其敏感性和特异性,并对临床样本进行验证。60℃退火、76℃收集荧光信号获得试验效果最好,熔解曲线为单一峰,Ⅱ系毒株熔解温度78.63℃,Ⅳ系毒株熔解温度80.08℃,易于区分;最低检测限为10拷贝/μL,批内、批间变异系数均小于0.5%,羊口疮病毒(ORFV)等4种病毒无扩增曲线产生;检测140份临床样本,与国家标准检测方法结果符合率100%。本研究建立的SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR检测方法可以快速、灵敏和特异地鉴别检测出PPRVⅡ系与Ⅳ系毒株,满足疫病快速诊断的需求。

鲁北地区猪用饲料及原料霉菌毒素的检测与分析

为了初步掌握鲁北地区猪用饲料及原料中霉菌毒素污染的数据资料和规律,试验采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法对滨城、博兴等9个县区94家不同规模猪场332份饲料及原料样品进行了黄曲霉毒素(AF)、呕吐毒素(DON)、玉米赤霉烯酮(ZON)、赭曲霉毒素(OTA)4种霉菌毒素的检测。结果表明:AF、DON、ZON、OTA平均值分别为0.5μg/kg、409.5μg/kg、96.2μg/kg、2.7μg/kg,证明该区域饲料及原料存在不同程度的霉菌毒素污染,其中DON、ZON的检出率和超标率较高,其检出率分别为96.99%、72.59%,超标率分别为8.43%、3.92%。

山羊痘病毒P32基因的截短表达及间接ELISA方法的建立和应用

为建立一种山羊痘病毒(GTPV)抗体快速检测方法,通过PCR技术扩增了P32蛋白优势抗原区(2-141AA)基因序列,将其连接至原核表达载体pET-28a(+)上,转化至E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导后获得了重组蛋白,纯化后经Western blot鉴定表明该蛋白具有良好的特异性和抗原反应性。以重组蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件建立了快速检测GTPV抗体的间接ELISA方法,该方法具有良好的特异性、敏感性与可重复性,为GTPV的免疫抗体检测及流行病学调查提供了一种血清学诊断方法。

羊源A型产气荚膜梭菌α毒素基因截短表达及其间接ELISA方法的建立与应用

基于GenBank登录的产气荚膜梭菌α毒素的氨基酸序列进行抗原决定簇及抗原性的分析,确定优势抗原区(101 aa~334 aa)。设计合成1对引物,以A型产气荚膜梭菌的DNA为模板,应用PCR方法扩增出702 bp大小的基因片段,克隆至表达载体pET32a(+)中进行原核表达。经亲和层析纯化的蛋白,Western blot鉴定相对分子质量约为43 kDa。以纯化的截短α毒素蛋白为包被抗原建立了间接ELISA方法,最适条件:2 mg/L重组蛋白100μL/孔、4℃过夜包被,血清样本1∶50稀释、37℃孵育40 min,HRP标记二抗1∶2500稀释、37℃孵育40 min,底物37℃显色10 min后终止反应。使用建立的方法对226份临床羊血清进行检测,阳性率为71.68%。结果表明,该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于羊群疫苗免疫后的抗体监测及流行病学调查,为试剂盒的开发奠定了基础。