重组酶介导等温扩增-CRISPR/Cas13a结合侧流层析技术快速检测猴痘病毒

目的基于重组酶介导的等温扩增技术(recombinase aided amplification,RAA)和规则成簇间隔短回文重复序列(cluste redregularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)-Cas13a(CRISPRassociated protein 13a)结合侧流层析技术(lateral flow assay,LFA)建立一种快速、灵敏、特异的猴痘病毒(monkeypox virus,MPXV)检测方法。方法针对MPXV的F3L段基因设计其RAA扩增引物、CRISPR RNA(crRNA)、荧光报告探针及LFA探针,对反应条件进行优化,建立RAA-CRISPR/Cas13a-LFA检测体系,评价该体系的检测灵敏度与特异性,并与实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测结果进行一致性比较,同时应用实际临床样本验证该检测体系的准确性。结果RAA-CRISPR/Cas13aLFA检测体系可以在60 min内(包括实验操作)完成检测,该体系对病毒DNA的检出限为18拷贝/反应;特异性试验表明其与水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)、单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)、EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)、柯萨奇病毒A16型(CVA16)、肠道病毒A组71型(EV-A71)、麻疹病毒(measles virus,MeV)均无交叉反应;临床样本检测结果表明,RAA-CRISPR/Cas13a-LFA与qPCR法之间的差异无统计学意义,二者具有良好的检测一致性(Kappa=0.892)。RAACRISPR/Cas13a-LFA检测体系的灵敏度和特异度分别为100.0%和83.3%,阳性预测值为96.6%,阴性预测值为100.0%。结论建立的RAA-CRISPR/Cas13a-LFA检测体系可快速、灵敏、特异地检测MPXV。

量子点探针在病原微生物检测中的应用进展

随着对纳米技术的不断研究,应用于各种生物分子检测的纳米传感器层出不穷。作为主要的纳米传感器之一,量子点具有独特的光学性质和粒子特性,将其制备为量子点探针用于病原微生物检测已经获得了广泛的应用。量子点探针作为新兴的荧光标志物,拥有其他荧光探针无法比拟的优势,如荧光信号强、光稳定性好、荧光寿命长、斯托克斯位移大等,可以实现对靶标简单、快速、灵敏、特异的检测。本文概述了量子点的基本性质和量子点探针作为检测传感器的应用基础,重点介绍了量子点探针的种类、制备方法、以及近几年来在病原微生物检测中的应用,最后总结了量子点探针作为检测传感器的应用注意事项,并展望了量子点探针在病原微生物检测领域的应用前景。