栀子多糖的分离纯化及其基本性质

栀子经脱脂热水提取,Sevage 法脱蛋白质,乙醇沉淀得粗制品多糖 GPS1.经 DEAE—纤维素(DE—52)层析得 GPS2和 GPS3 2个组分.分别经 Sephadex G—200层析进一步纯化得精品GPS_4和 GPS_5.玻璃纤维纸电泳、乙酸纤维薄膜电泳和琼脂糖电泳均显示单一条带.GPS_4和 GPS_5不含蛋白质和核酸物质.用 SepbadeX G—150层析法测得 GPS_4和 GPS_5的平均分子量分别为14000和10000.体外试验表明此多糖对肉瘤 S—180和腹水肝癌细胞生长均有一定的抑制作用.

苦瓜籽核糖体失活蛋白的理化性质及生物活性

采用硫酸铵分级分离，假配基亲和层析和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－１００分子筛层析等方法，从苦瓜籽中获得核糖体失活蛋白（ＲＩＰ）．经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＰＡＧＥ、ＩＥＦ和ＰＡＳ方法分析均表明为单一蛋白着色带或单一糖蛋白着色带．根据ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１５０分子筛层析结果计算其相对分子质量为３．０×１０４，经ＩＥＦ－ＰＡＧＥ结果计算其ｐＩ为８．９～９．０．对无细胞系统中蛋白质生物合成抑制活性明显，其ＩＣ５０为５．３×１０－ １０ ｍ ｏｌ／Ｌ左右．体外生物活性试验结果表明其对人肝癌细胞、Ｖｅｒｏ、ＳＰ２／０、３Ｔ３、Ｋｂ、Ｎａｖａｎａ 等肿瘤细胞株均表现有不同程度的抑制作用．而对完整细胞人胚肺二倍体细胞却毒性极小．因此，上述实验结果为该ＲＩＰ的进一步深入研究和有可能开发成免疫毒素的高效弹头药物提供了一定的工作基础．

苦瓜籽核糖体失活蛋白的基本性质研究

采用 Affi- Gel亲和层析和 Sephacryl S- 10 0分子筛层析等方法获得苦瓜籽核糖体失活蛋白 (RIP) ,经 SDS- PAGE,PAGE,IEF和 PAS方法分析均表明为单一蛋白着色带或单一糖蛋白着色带 .根据 SDS- PAGE测得表观分子量为 30 0 0 0 ,经 IEF- PAGE结果计算其 PI为 9.0 ,对无细胞系统中蛋白质生物合成抑制活性明显 ,其 IC50 为 5.3× 10 -10 mol/ L左右 .体外生物活性试验结果表明其对人肝癌细胞 ,Vero,SP2 / 0 ,3T3,Kb,Navana,S- 180等肿瘤细胞株和麻疹病毒均表现有不同程度的抑制作用 ,而对完整人胚肺二倍体细胞却毒性极小 .

半枝莲多糖的研究 分离纯化及其基本性质

半枝莲经乙醚脱脂,热水提取,Sevage 法脱蛋白质,乙醇沉淀后得半枝莲多糖粗品.经 DEAE-纤维素(DE-52)柱层析和 Sephadex G-200凝胶过滤得半枝莲多糖精品.紫外光谱分析表明不含有核酸和蛋白质.经乙酸纤维薄膜电泳、琼脂糖电泳和 Sephadex G-200凝胶过滤法柱层析结果表明均为单一条带或者单一峰,证明此多糖精品是均一的.分析表明此多糖精品的总糖含量以半乳糖为标准为115%,以葡萄糖为标准为56%,以糖原为标准是58%.用 SephadexG-200分子筛法测得平均分子量为1×10~4道尔顿.体外实验表明半枝莲多糖对移植肉瘤 S-180细胞和腹水癌细胞均有一定的抑制作用.

熊猫豆β-D-半乳糖苷酶的基本性质研究

经硫酸铵分级分离 ,DEAE- cellulose5 2 ,CM- cellulose5 2和 Sephacryl S10 0 HR凝胶过滤层析方法从熊猫豆黄化苗中获得了一种β- D -半乳糖苷酶 ,活性收率为 8.0 % ,纯化倍数为 2 4 5 .经PAGE显示单一蛋白着色带 ,用 IEF- PAGE测定其 PI为 4 .1.SDS- PAGE显示 2条蛋白着色带 ,其相应分子量分别为 4 0 k D和 2 9k D.Sephadex G2 0 0层析法测得表观分子量为 6 8k D.以 ONPG和PNPG为底物测得该酶的表观 Km 分别为 3.0 2 mmol/ L和 0 .33mmol/ L.最适 p H为 4 .2 ,最适温度为 5 2℃ .以乳糖为底物测得表观 Km 为 4 3mmol/ L.Hg CI2 ,DTNB,NEMI,半乳糖和乳糖对酶表现出不同的抑制作用 .

马勃多糖的研究——1.分离纯化及其性质

马勃用热水提取,从提取物中除去蛋白质及核酸便可得马勃多糖粗品.此粗品与 CTAB(溴代十六烷基三甲胺)络合,再经 DEAE—纤维素和 Sephadex G—75柱层析可得白色粉末—马勃多糖精品.体外实验表明马勃多糖对移植内瘤 S—180细胞具有明显的抑制作用.

二叶葎多糖的研究——1.分离、纯化及其基本性质

二叶葎用沸水抽提,三氟乙酸—正丁醉除蛋白,乙醇沉淀得二叶葎多糖粗品.比粗品进一步通过 CTAB 和 DEAE -纤维素柱层析纯化.其主要成份用 Sephadex G—150分子筛、纸层析、醋酸纤维薄膜电泳和琼脂糖电泳均证明是均一的.用 Sephadex G—200凝胶过滤法测得分子量是79000.纯多糖糖含量以葡萄糖为标准是69%,以半乳糖为标准是156%,以糖原为标准是70.4%.糖醛酸含量是74%.体内试验表明二叶葎多糖对移植 S—130肉瘤细胞具有抑制作用.

半枝莲多糖SPS_4组分的纯化性质及分析

半枝莲经热水提取,除蛋白质,乙醇沉淀,DEAE-纤维素及Sephadex G-150柱层析分离得到一种白色粉状多糖SPS_4。经琼脂糖电泳、玻璃纤维纸电泳及醋酸纤维素薄膜,凝胶柱层析证明SPS_4为均一性多糖。经进行完全酸水解后纸层析及气相层析分析确定糖基的组成及摩尔组成比为鼠李糖:岩藻糖:阿拉伯糖:木糖:甘露糖:葡萄糖:牛乳糖=0.22:0.26:1.0:0.09:0.51:1.82:2.09。平均分子量为10000。体外实验表明,多糖SPS_4对S-180肉瘤细胞及腹水肝癌细胞均有一定的抑制作用。

植物苯丙氨酸解氨酶的研究——1.鹰嘴豆PAL的纯化及其基本性质

鹰嘴豆黄化苗苯丙氨酸解氨酶(PAL)经亲和层析等方法纯化.聚丙烯酰胺凝胶电泳和 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一蛋白带.用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得鹰嘴豆 PAL 的亚基分子量为55000.Sephadex G-200凝胶过滤法测得该酶的全酶分子量为205000.表明此植物 PAL 均由分子量相同的四个亚基构成.鹰嘴豆 PAL 具有一定的耐热性,最适温度为大约43℃.最适 PH 为9.4,酸碱稳定区域在碱侧.测得 PAL 的 K_m^(αpp)为1.8×10^(-4)M.

蓖麻β-半乳糖苷酶的纯化及其基本性质

蓖麻籽黄化苗中存在高活性β-半乳糖苷酶。经硫酸铵分级分离、DEAE-纤维素离子交換层析、Sephadex G-100、CM-Sephadex和DEAE-Sephadex层析纯化。活性收率为6.4％,纯化倍数达107倍。纯化了的酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一蛋白带,SDS-PAGE显示两条蛋白带,其相应分子量分别为3.25×10~4和2.94×10~4。用Sephadex G-200分子筛层析法测得分子量为6.7×10~4。综合上述结果推测该酶是由两个不同的亚基构成。以邻硝基苯酚-β-半乳糖苷为底物测得该酶的表观Km为5.9×10^(-3)mol/L。最适pH和最适温度分别为4.5和50℃。酸碱稳定区域在pH4.6—7.5之间。不同浓度缓冲液以及不同种类缓冲液、不同金属离子对酶活性影响均进行了讨论。

无壳葫芦籽苯丙氨酸解氨酶的纯化及其基本性质

无壳葫芦籽黄化苗中苯丙氨酸解氨酶(PAL)经硫酸铵分级分离、亲和层析纯化,PAGE、SDS—PAGE和Sephadex G—200凝胶过滤表明为单一蛋白带或单一蛋白峰。用SephadexG—200凝胶过滤法测得无壳葫芦籽PAL的全酶分子量为280 000,SDS—PAGE测得其亚基分子量为74 000,推测无壳葫芦籽PAL均由分子量相同的四个亚基构成。测得无壳葫芦籽PAL的最适pH为8.5,酸碱稳定区域在碱侧,最适温度为45℃,具有一定的耐热性,以L—苯丙氨酸为底物测得Km为2.6×10^(-5)M(pH8.8,40℃)。

植物苯丙氨酸解氨酶的研究——Ⅱ 鹰嘴豆、无壳葫芦籽苯丙氨酸解氨酶的亲和层析纯化及其部分性质研究

鹰嘴豆和无壳葫芦籽黄化苗中苯丙氨酸银氨酶(PAL)经亲和层析纯化,聚丙烯酸胺凝胶电泳和SDS—FAGE鉴定均为一条蛋白带,用SDS-PAGE测得鹰嘴豆和无壳葫芦籽PAL亚基分子量分别为55000和74000。Sephadex G—200凝胶过滤法测得鹰嘴豆和无壳葫芦籽PAL分子量分别为205 000和280 000。表明这2科植物PAL均由分子量相同的4个亚基构成。

豇豆β-半乳糖苷酶性质研究

豇豆种子子叶提取液中存在高活性的β-半乳糖苷酶。经硫酸铵分级、DEAE-纤维素(DE-52)层析分离得到有β-半乳糖苷酶活性的四种酶,分别称之为β-半乳糖苷酶A、B、C和D。这四种酶分别经Sephadex G-150分子筛层析,用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析纯度可达60％以上。这四种酶各自的最适PH、最适温度和热稳定性、分子量、Km及Ki,几种化学试剂对酶反应速度的影响均进行了讨论。

蓖麻β—半乳糖苷酶的研究

蓖麻种子黄化苗提取液中存在高活性的β—半乳糖苷酶。经硫酸铵分级分离、DEAE—纤维素(DE—52)离子交换层析分离得到具有β—半乳糖苷酶活性的2种酶,分别称为β—半乳糖苷酶Ⅰ和Ⅱ。分别经Sephadex G—150分子筛层析后用PAGE分析表明二者纯度均达到60以上。以邻硝基苯酚—β—半乳糖苷为底物,β—半乳糖苷酶Ⅰ和Ⅱ的Km分别为5.9mmol/L和2.9mmol/L。以乳糖为竞争性抑制剂,其Ki分别为150mmol/L和175mmol/L。β—乳糖苷糖Ⅰ和Ⅱ最适pH分别为4.5和3.8。酸碱稳定区域分别在pH 3.6—7.0和4.6—7.0。二者的最适温度均为50℃。用Sephadex G—200分子筛层析测得β—半乳糖苷酶Ⅰ和Ⅱ的相对分子量分别为67000和85000。不同离子强度缓冲液,不同种类缓冲液以及金属离子对酶活性的影响也进行了讨论。

红芪多糖RHG的分离纯化及化学结构

甘肃产的名贵中药材红芪（ＨｅｄｙｓａｒｕｍｐｏｌｙｂｏｔｒｙｓＨａｒｄ．Ｍａｚ）的根经热水提取，醇析、脱除蛋白质、ＤＥＡＥＳｅｐｈａｄｅｘＡ２５离子交换色谱及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ７５柱色谱分离得一水溶性多糖ＲＨＧ。用电泳及凝胶过滤法鉴定为均一组分，系由单一葡萄糖残基构成。平均分子量１４×１０４。经甲基化、高碘酸钠氧化、Ｓｍｉｔｈ降解、ＮＭＲ和ＩＲ分析以及ＫＩＩ２反应证明其化学结构是以αＤ（１→４）葡萄糖为主链。

红毛五加多糖的基本性质研究

本文从红毛五加中分离得到了三种多糖 ,并对它们的基本性质进行了研究。红毛五加经热水浸提 ,用Sevag法脱蛋白 ,经DEAE cellulose 32离子交换层析和SephacrylS 2 0 0HR凝胶层析纯化得到三个主要多糖组分 :AHP I、AHP II和AHP III。HPLC测定AHP I、AHP II和AHP III的表观分子质量分别为 7.0kD、5 9.5kD和 12 .9kD。红外光谱分析三种多糖具有多糖类物质的一般特征。经纸层析和GC结果综合分析得知 ,AHP I含有阿拉伯糖、岩藻糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖 ,其摩尔比为 1.0 0∶1.4 0∶0 .6 4∶3.13∶2 .0 9;AHP II含有鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖 ,其摩尔比为 0 .36∶1.0 0∶0 .15∶0 .2 0∶1.10 ;AHP III含有鼠李糖、阿拉伯糖、岩藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖 ,其摩尔比为 1.2 2∶1.0 0∶0 .4 0∶0 .2 8∶0 .2 6∶1.0 3。咔唑 硫酸法测得AHP II、AHP III的糖醛酸含量分别为 6 .7%和 6 .0 % ;AHP I不含糖醛酸。体内试验表明 ,红毛五加粗多糖对小鼠S180 肉瘤有明显抑制作用。

鬼臼葡聚糖的化学结构

从植物鬼臼根的沸水提取液中分离出一个水溶性多糖EPS.它是由单—葡萄糖残基构成的葡聚糖,分子量约为1.6×10~4.经酸全水解,甲基化反应,高碘酸氧化,Smith降解,KI-I_2反应,IR,~1H NMR和^(13)C NMR分析,证明其化学结构为1,4-葡萄糖残基为主链,并在6-O位有侧链的葡聚糖.

纳豆激酶活性测定方法的研究

从专属性、灵敏度及实际操作的可行性等几个方面,对TAME法和纤维蛋白平板法进行了比较研究。结果:TAME法灵敏度高,操作简便,适合作为常规的分析检测手段,而平板法虽专属性高,却操作繁琐,适宜于定性分析。结论:利用TAME法与平板法各自的优点,将两者结合起来作为纳豆激酶的活性检测方法,可达到高效灵敏、专属性强的目的。

药用真菌马勃多糖的分离纯化及结构分析

目的研究马勃多糖的分离纯化及基本性质。方法以马勃为材料，经热水浸提，用Sevag法脱蛋白，乙醇沉淀，经DEAE—sepharoseFF和Sephacryl S-300HR层析纯化制备多糖；采用Sephacryl S-300HR凝胶层析，200～360nm扫描和SDS—PAGE鉴定多糖的纯度，并测定多糖的表观分子质量；GC—MS分析单糖的组成和摩尔比；咔唑-硫酸法测定糖醛酸的含量；高碘酸氧化、Smith降解和红外光谱分析其结构。结果经分离纯化得到CGP—Ⅰ、CGP-Ⅱ、CGP-Ⅲ主要多糖组分，经凝胶层析检测显示单一对称峰；琼脂糖电泳显示单一多糖条带，未见蛋白染色条带，200～360nm扫描未见特征吸收峰。CGP—Ⅰ、CGP-Ⅱ和CGP-Ⅲ的表观分子质量分别为9．12×10^4、18．6×10^4、15．6×10^4。3种多糖均含有甘露糖、葡萄糖和半乳糖，CGP—HI还含有另外一种未知单糖，各自的摩尔比分别为1．22：11．28：3．92、1．74：26．45：0．36、1．06：9．9：3．29。CGP-Ⅱ和CGP-Ⅲ的糖醛酸含量分别为17．2％和20．5％，为酸性多糖，CGP—Ⅰ为中性多糖。3种多糖均为1→4连接，有少量的1→6连接。CGP— Ⅰ以α-和β-差向异构为主；CGP—Ⅱ、CGP—Ⅲ以β型差向异构为主，均主要以吡喃糖形式存在。结论对所纯化的马勃多糖进行了初步的性质研究与结构分析。

微生物发酵法降解山黧豆毒素的研究

为了寻找具有降解山黧豆神经毒素(ODAP)的菌株,本实验选择30种菌株,以含有已知量的ODAP的山黧豆粉提取液为培养基,采用邻苯二甲醛法检测培养前后培养基中ODAP的消耗量,筛选具有能够明显利用和消耗ODAP的菌株.实验结果表明,有2种菌株对ODAP有明显的降解和消耗作用.还探讨了这两种菌株在山黧豆培养基中的生长情况与ODAP降解情况的相关性以及酶促反应的基本动力学,从所获得的试验结果可断定被筛选出的2株菌种经发酵可产生ODAP降解酶.