安徽省临床分离致泻性大肠埃希菌主要流行基因型及同源性分析

目的了解安徽地区临床分离致泻性大肠埃希菌(DEC)的耐药状况、基因同源性及主要基因型。方法采用微量肉汤稀释法进行药物敏感性试验,采用多位点序列分型(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型进行基因型检测和同源性分析。结果268株DEC中,57.1%为多重耐药菌,其中肠聚集性大肠埃希菌(EAEC)118株,肠毒素性大肠埃希菌(ETEC)98株,肠致病性大肠埃希菌(EPEC)47株,3种病理类型菌株对常用抗菌药物的耐药率分别为:氨苄西林83.9%、73.5%、78.7%,萘啶酸65.3%、75.5%、34.0%,头孢唑林53.4%、35.7%、34.0%,四环素61.0%、31.6%、74.5%,复方磺胺甲口恶唑63.6%、23.5%、46.8%,氨苄西林/舒巴坦28.0%、9.2%、29.8%,庆大霉素34.7%、7.1%、34.0%,氯霉素22.9%、5.1%、21.3%,环丙沙星18.6%、4.1%、14.9%;2株EAEC和1株ETEC对亚胺培南耐药。55株EAEC分为35个ST型,优势基因型是ST10(14.5%);55株ETEC分为14个ST型,优势基因型是ST48(32.7%)和ST218(16.4%);15株EPEC分为12个ST型,优势基因型是ST28(13.3%)、ST517(13.3%)和ST2088(13.3%)。微进化树分析结果显示:55株ETEC中,马鞍山市分别有5、3、2、2株菌100%同源,合肥市有5株菌100%同源;55株EAEC中,阜阳市、滁州市各有2株菌100%同源;15株EPEC中,有2组2株菌100%同源,分离自马鞍山市。50株EAEC PFGE同源性聚类分析结果为:100%同源有2株,分离自蚌埠市,其余菌株同源性均在90%以下;21株EPEC的基因同源性均在75%以下;30株ETEC、3株肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)和5株ETEC+aEAEC的基因同源性达97.6%、93.6%各2株,其余菌株同源性都在90%以下。结论本研究发现安徽省临床分离的DEC耐药情况较严重,其中EAEC的耐药率高于EPEC和ETEC,ETEC的耐药率在各致病型中最低。分子分型检测发现本地区临床分离的DEC基因型较分散,在各致病型中,ETEC的基因型相对集中。微进化树分析提示ETEC存在地区同源性感染。在分子分型技术上,MLST能区分出优势基因型和聚集性,优于PFGE分型。

2014-2019年阜阳市食品和病人分离单增李斯特菌的分子特征分析

目的比较分析阜阳市食品和病人分离单增李斯特菌的毒力基因、分子型别,建立阜阳市单增李斯特菌分子特征信息数据库,为防控单增李斯特菌病提供科学依据。方法对阜阳市2014-2019年分离自食品和病人的55株单增李斯特菌,用聚合酶链反应(PCR)检测其毒力基因prfA、plcB、hly、actA、iap、inlA;用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术进行分子分型及同源性分析;用多位点序列分型(MLST)技术进行分子分型和聚类分析。结果 55株单增李斯特菌全部携带prfA、plcB、hly、actA、iap、inlA基因;PFGE将其分为21个带型,相似度60.3%~100%;MLST将其分为14个ST型,ST9型为优势型别;3株病人分离菌株的PFGE带型和ST型互不相同,其中2株病人来源菌株分别与食品分离株具有相同PFGE带型和ST型。结论阜阳市食品和病人中分离的单增李斯特菌均携带6个毒力基因,食品分离菌株的分子型别呈现出多样性,其中存在同型别单增李斯特菌持续性污染现象,病人分离菌株具有与食品来源菌株相同的PFGE带型和ST型,提示食源性感染的风险较高。

安徽省阜阳市首例W群流行性脑脊髓膜炎 死亡病例病原学分析

目的 对安徽省阜阳市2020年1月某寄宿学校1例疑似流行性脑脊髓膜炎(流脑)死亡病例开展流行病学调查与病原学分析,了解其传播途径和传染源,为及时有效阻止疫情扩散提供科学依据。方法 依据WS 295-2019《流行性脑脊髓膜炎诊断》,采集病例血液和密切接触者咽拭子,现场接种,及时保温运送至实验室进行分离培养,同时用聚合酶链式反应方法开展种特异性鉴定,对分离出的菌株进行分群鉴定、采用K-B纸片扩散法和E-test试纸条法进行药敏试验,用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术分析其同源性。结果 从病例血液和密切接触者咽拭子中共分离出13株脑膜炎奈瑟菌,均为W群,密切接触者菌株携带率为66.67%(12/18),PFGE分型显示病例和密切接触者菌株高度相似,相似度为92.60%~100.00%。所有菌株对头孢曲松、头孢噻肟、氯霉素、利福平、美罗培南、阿奇霉素、米诺环素敏感,对青霉素、氨苄西林中介,对环丙沙星、复方新诺明、左氧氟沙星耐药。结论 密切接触者和病例均检出W群脑膜炎奈瑟菌,流行病学调查发现,本病例为阜阳市首例W群流脑病例。密切接触者病原菌携带率较高,W群流脑存在流行趋势,应加强对其监测,及时采取干预措施,同时应注意抗菌药物的合理使用。

食品交叉污染致1例霍乱的调查分析

目的:调查分析1例霍乱病例感染环节,为有效预防疫情提供依据。方法:应用现场流行病学调查和病原学分型方法,对1例霍乱病例的感染过程进行追踪溯源。结果:经病原学检测,患者确诊为霍乱(O139群);患者因进食聚餐剩余的虾而感染,供应链不变的情况下,虾及相应环境中未检出霍乱弧菌,在聚餐用甲鱼的同批次产品污染物中检出,甲鱼和虾宰杀、清洗所用的池子和清洗后放置的台面相同,且甲鱼加工在虾之前。结论:本次疫情的主要危险因素可能为带菌甲鱼通过共用物品污染虾,带菌的虾未经加工熟透即食用可至人感染;提示饮食行业应加强食品操作的规范管理,相关部门应做好水产品监管。

2021年安徽省阜阳市一起感染性腹泻暴发疫情的病原菌溯源分析

目的对2021年安徽省阜阳市某集中供餐学校发生的一起感染性腹泻暴发疫情进行病原学检测及溯源分析,为疫情处置和控制提供科学依据。方法根据流行病学特征,采集患者肛拭子、粪便、呕吐物和食堂留样食品等进行病原体检测。对分离出的细菌进行鉴定、药敏试验、毒力基因检测、脉冲场凝胶电泳(PFGE)和全基因序列分析。结果从患者和留样食品中分离出19株肠炎沙门菌,均携带毒力基因(inv A、sop E、agf A、spv R、hil A、stn、pef A)。19株肠炎沙门菌对萘啶酸均耐药,18株菌对氨苄西林、四环素、头孢噻肟、头孢他啶、氨苄西林/舒巴坦和链霉素耐药。全基因组测序的6株肠炎沙门菌均检测出7种获得性耐药基因和1个靶基因位点突变,分别为aac(6’)-Iy、aph(3’’)-Ib、aph(6)-Id、bla_(TEM-1B)、aac(6’)-Iaa、sul2、tet(A)和gyrA(p.D87Y)。19株肠炎沙门菌的PFGE带型相似度是100.00%,均为ST11型。结论引起此次感染性腹泻暴发的病原体为肠炎沙门菌,感染来源为金丝脆鸡排。分离菌株对青霉素和头孢菌素高度耐药,耐药机制与携带bla_(TEM-1B)相关。

2010年-2013年阜阳市食源性金黄色葡萄球菌生物学及流行病学特征

目的了解阜阳市食品中分离的金黄色葡萄球菌的PFGE分型、肠毒素分型及耐药性,为防控金葡菌引起的食源性致病菌提供科学依据。方法采用脉冲场电泳技术对42株金葡菌进行分子分型和聚类分析,结合肠毒素分型试验和药敏试验进行菌株生化特征分析。结果 42株食源性金葡菌有2株携带肠毒素基因,均为SEA,携带率4.8%;耐药试验显示42株金葡菌除对万古霉素均敏感外,对其余11种药物出现不同程度的耐药性;42株金葡菌的脉冲场分38类带型,相似度27.2%-100%。结论阜阳市食品中金葡菌耐药和多重耐药情况比较严重,肠毒素携带率较低,分子型别呈现多型性。建立了阜阳市食源性金葡菌的生化性状和分子图谱数据库。

阜阳市2007～2011年食源性致病菌监测结果分析

目的了解阜阳市市售主要食品中致病菌的污染状况,为有效预防食源性疾病的发生提供科学依据。方法按国标GB4789和食源性致病菌监测手册的方法,对10类食品中的沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、肠出血性大肠埃希菌O157:H7、阪崎肠杆菌、空肠弯曲菌、副溶血性弧菌和金黄色葡萄球菌进行分离与鉴定。结果2007～2011年859份食品样品中共检出致病菌114株,总检出率13.27%。10类食品中鲜奶的金黄色葡萄球菌污染率最高,达到52.50%(21/40),其次为水产品中的副溶血弧菌污染22.11%(21/95)。所有致病菌中金黄色葡萄球菌检出株数最多,阳性率为11.65%(53/455)。O157:H7检出株数最少,阳性率为0.26%(1/391)。农贸市场、超市、个体户三种不同监测点食源性致病菌的检出差异无统计学意义(χ2=5.15,P>0.05)。结论阜阳市主要市售食品中存在食源性致病菌的污染,其中鲜奶产品中金黄色葡萄球菌污染率最高。有针对性防范和控制各类食品致病菌的污染,是防止食源性疾病暴发的重要措施。

阜阳市2010～2013年流感病原学检测结果分析

目的了解流感病毒感染情况,动态观察流感病毒变异规律。方法使用RT-PCR或Real-time PCR方法对病例咽拭子标本进行流感病毒核酸检测,阳性标本再用MDCK细胞进行病毒分离培养,用红细胞凝集法和红细胞凝集抑制法鉴定病毒。结果 2010年1月～2013年12月共检测流感样病例标本2 723份,流感病毒核酸阳性359份,阳性率为13.18%。其中甲型H1N1、季节性H3、B型、A未分型的流感病毒核酸阳性分别为133份、54份、156份、16份,分别占流感病毒核酸阳性标本的37.05%、15.04%、43.45%、4.46%。5岁以下人群检出率最低,为7.69%。2012～2013年200份核酸阳性标本共分离出69株毒株,分离率为34.5%。结论 2010～2013年阜阳市流感流行以B型流感病毒和甲型H1N1病毒为优势病原,同时有季节性H3型流感病毒的存在。

阜阳市手足口病病例巢式RT-PCR诊断与结果分析

目的明确阜阳市手足口病暴发的病原体,并对RT-PCR结果进行分析。方法利用巢式RT-PCR方法,分别采用肠道通用引物、EV71特异引物和CoxA16特异引物对这起暴发中156例病人的176份病例标本进行检测。结果156例病例的176份标本中,肠道通用引物、EV71特异引物和CoxA16特异引物检测阳性率分别为73.30%、63.07%、0%。咽拭子、气管吸痰液、肛拭子肠道通用引物检测阳性率分别为75.71%、54.54%、78.57%,χ2=4.57,P>0.05;EV71特异引物检测阳性率分别为65.00%、45.45%、71.43%,χ2=3.57,P>0.05,两种引物检测的三类标本阳性率比较均无统计学意义。156例病例中,有22人采集了双份或多份标本共计50份,其中标本阳性率和病例阳性率比较,肠道通用引物检测分别为56.00%、81.82%,χ2=4.41,P<0.05;EV71特异引物检测分别为54.00%、81.82%,χ2=5.04,P<0.05,两种引物检测结果均有统计学意义。结论巢式RT-PCR技术是肠道病毒快速诊断的重要手段,阜阳市手足口病暴发的病原体为肠道病毒EV71型。多次多样本采样能够提高病例阳性诊断率。

2015-2019年安徽省致泻性大肠埃希菌分型及耐药性分析

目的了解安徽省致泻性大肠埃希菌(DEC)的菌群流行特点及耐药趋势,为安徽省DEC腹泻病的诊断和治疗提供科学依据。方法采集安徽省2015―2019年腹泻患者粪便样本,采用多重实时荧光定量PCR对细菌进行鉴定与分型,采用微量肉汤稀释法对细菌进行药敏试验。结果从6120份粪便中分离出DEC 557株,主要病原型为:非典型肠聚集性大肠埃希菌(aEAEC)191(34.29%)株,产肠毒素性大肠埃希菌(ETEC)153(27.47%)株,非典型肠致病性大肠埃希菌(aEPEC)108(19.39%)株,典型肠聚集性大肠埃希菌(tEAEC)77(13.82%)株,肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)11(1.97%)株,典型肠致病性大肠埃希菌(tEPEC)3(0.54%)株。药敏检测多重耐药255(45.78%)株;同种病理类型不同年份耐药性存在差异:aEAEC:氨苄西林/舒巴坦(AMS),萘啶酸(NAL),头孢西林(CFZ);tEAEC:AMS,CFZ,阿奇霉素(AZM);EPEC(aEPEC,tEPEC):氨苄西林(AMP),AMS,CFZ;ETEC:NAL,AZM,环丙沙星(CIP)。不同病理类型耐药性存在差异的抗生素有:AMP,AMS,四环素(TET),NAL,红霉素(ERY),氯霉素(CHL),头孢噻肟(CTX),CFZ,庆大霉素(GEN),甲氧苄啶/磺胺甲恶唑(SXT),AZM和CIP。2015―2019年,tEAEC对CFZ,EPEC对AMP,AMS和CFZ,ETEC对NAL和CIP,耐药性呈增强趋势。结论本地区DEC流行的主要型别是:aEAEC、ETEC、aEPEC和tEAEC。DEC的耐药情况较严重,常用抗生素AMP、AMS、NAL、CFZ和CIP在不同年份和不同病理类型间,耐药性差异明显,耐药性分析结果为临床合理使用抗生素,遏制抗菌药物耐药性增加提供参考。

阜阳市职业暴露人群高致病性禽流感H5N1血清流行病学研究

目的对阜阳市职业暴露人群开展高致病性禽流感H5N1抗体调查,明确是否存在隐性感染,了解该病的流行病学规律。方法于2009年5月、12月,分别采集颖上县城乡活禽市场、家禽规模养殖场、家禽散养户集中的地区、家禽屠宰加工厂等地职业暴露人群血清100份和93份,利用单放射免疫扩散溶血技术检测H5N1抗体。结果 5月份采集的100份标本中,H5N1抗体阳性3份,阳性率为3.00%;12月份采集的93份标本中,H5N1抗体阳性7份,阳性率为7.53%;两次调查总阳性率为5.18%,两个月份比较差异无统计学意义(χ2=1.16,P>0.1)。结论在禽流感职业暴露人群中,存在H5N1隐性感染,感染与季节分布无关。

3种结核病快速诊断新技术与传统方法的对比分析

目的探讨3种诊断技术对结核病及耐药结核病的应用价值。方法使用LED法、Xpert MTB/RIF、固体培养检测259例疑似结核病患者痰标本,比较各方法的阳性率、灵敏度与特异度;142份菌株使用比例法、Xpert RIF与线性探针检测利福平耐药,比较2种方法与比例法的差异。结果 259例痰标本中,固体培养、LED法、Xpert MTB阳性率分别为54.83%、44.79%、55.60%,平均时间为32.6 d、0.5 h、2.5 h;以固体培养阳性的142例为金标准,LED法、Xpert MTB阳性数分别为109例、129例,灵敏度为76.76%、90.85%,特异度为94.02%、87.18%。对142例菌株进行药敏试验,利福平耐药菌株34例,时间为28 d;以34例为金标准,Xpert RIF、线性探针检测利福平耐药符合率分别为94.12%、91.18%,时间为2.5 h、8 h。结论 3种检测技术对结核病及耐药结核病的诊断具有灵敏性高、特异性高、检测时间短等特点,在临床中有很好的应用前景与推广价值。

2016年阜阳市食源性致病菌监测结果分析

目的了解阜阳市食品中食源性致病菌污染状况,为食品安全风险评估和控制食源性疾病提供科学依据。方法按照《2016年国家食品污染和有害因素风险监测工作手册》中的标准操作程序,对市售7类食品进行金黄色葡萄球菌、沙门菌、蜡样芽胞杆菌、单核细胞增生李斯特菌、阪崎肠杆菌、副溶血性弧菌共6种致病菌检测。结果共检测样品205份,检出阳性菌株29株,总检出率为14.15%(29/205),其中单核细胞增生李斯特菌10株、蜡样芽胞杆菌9株、副溶血性弧菌6株、沙门菌2株、金黄色葡萄球菌2株。结论阜阳市售食品存在不同程度的食源性致病菌污染,主要污染菌为副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特菌、蜡样芽胞杆菌。

2015-2016年阜阳市柯萨奇病毒A16型分离株VP1区基因特征分析

目的分析阜阳市柯萨奇病毒A16型(CVA16)分离株VP1区基因特征。方法将2015-2016年阜阳市手足口病患儿CVA16核酸阳性咽拭子标本,接种RD细胞分离病毒,出现细胞病变后用荧光定量PCR鉴定,鉴定阳性标本用RT-PCR扩增VP1区基因片段并进行核苷酸序列测定。采用Mega 6.06生物软件与国内外CVA16毒株参考序列构建进化树,分析VP1区基因特征。结果 26份CVA16核酸阳性的咽拭子合格标本分离出10株CVA16毒株,阳性率为38.46%;10株病毒VP1区基因亲缘性关系分析表明:2株CVA16毒株为B1a亚型,8株为B1b亚型;B1a亚型毒株和广州2012年的CVA16分离株同源性最高,核苷酸同源性为98.0%,B1b亚型毒株和深圳2013、2014年的分离株同源性最高,核苷酸同源性为99.0%。结论 2015-2016年阜阳市分离的CVA16流行毒株株为B1a亚型、B1b亚型,以B1b亚型为主。

阜阳市120例发热伴呼吸道症候群患者细菌学诊断与结果分析

目的明确阜阳市发热伴呼吸道症候群患者细菌学病原谱。方法检测120例发热伴呼吸道患者标本,用荧光定量PCR方法,检测金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、肺炎克雷伯菌、流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌、乙型溶血性链球菌、军团菌7种病原;咽拭子标本用荧光定量PCR方法,检测肺炎支原体、肺炎衣原体病原;尿液标本用免疫胶体金方法,检测肺炎链球菌、军团菌病原。结果 120份血液标本培养全为阴性;120份痰液标本培养出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌各1株,培养阴性痰标本做核酸检测后测序,最终阳性以3例培养阳性和测序阳性为准;97份咽拭子标本,以PCR结果为最终阳性判断依据,肺炎支原体阳性率为2.06%,肺炎衣原体阴性;120份尿液标本,肺炎链球菌抗原阳性率为8.33%,军团菌为阴性。患者病原检出阳性率为24.17%。结论阜阳市发热伴呼吸道症候群患者致病菌感染主要以肺炎链球菌、铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌、肺炎支原体为主。

一起奇异变形杆菌引起食物中毒的溯源和分析

目的对一起食源性疾病暴发疫情的病原进行实验室检测,并结合流行病学追溯其感染来源。方法按照GB4789《食品卫生微生物学检验》、WS289-2008《霍乱诊断标准》和WS/T9-1996《变形杆菌食物中毒诊断标准检验及处理原则》,对本次暴发事件中剩余食品和病例生物样本进行沙门菌、志贺菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌、致泻性大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和变形杆菌的检测分离和菌株鉴定,用聚合酶链反应(PCR)方法检测其代谢调控基因(rsmA)、尿素酶基因(ureC)、金属蛋白酶基因(zapA)、溶血素基因(hpmA);用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术追溯其感染来源。结果从剩余食品和病例标本中共分离出12株奇异变形杆菌,所有菌株均携带zapA、hpmA、rsmA、ureC基因;脉冲场凝胶电泳分为4个带型,相似度27.7%~100.0%,PFGE分型显示食品中奇异变形杆菌带型不完全相同,食品株和患者株存在相同带型。结论实验室检测结合流行病学分析,奇异变形杆菌为引起本次食源性疾病暴发的病原体,污染的食品为感染来源。

阜阳市2011～2012年手足口病病原学监测结果分析

手足口病（Hand，foot and mouth disease，HFMD）是由多种肠道病毒引起的一种儿童常见传染病，主要病原是肠道病毒71型（human enterovirus 71，EV71）和柯萨奇病毒A16型（coxsackievirus A16，CoxA16），均属于小RNA病毒科肠道病毒。

一起由宋内志贺菌引起的寄宿学校细菌性痢疾暴发病原学和流行病学分析

目的对安徽省阜阳市某寄宿学校感染性腹泻暴发开展流行病学调查与病原学分析,为有效控制和处置疫情提供科学依据。方法根据病例流行病学特征对2017年9月13-15日发病病例溯源假设进行检验,采集患者和厨师粪便、肛拭子、水样和食堂食品等进行致病菌分离与检测,对可疑致病菌进行生化鉴定、毒力基因检测、药敏试验、PFGE和多位点序列分型。结果浅水井供水范围内宿舍楼的罹患率(3.41%)高于深水井(0.98%),差异有统计学意义(χ^2=17.215,P<0.001)。从患者样品中分离到16株宋内志贺菌,均携带ipaH基因且不携带set1基因,其中7株携带sen基因和ial基因。16株宋内志贺菌对氨苄西林、四环素、复方新诺明、头孢唑啉、头孢噻肟、庆大霉素、萘啶酸、链霉素高度耐药,9株宋内志贺菌对多西环素耐药。16株宋内志贺菌的PFGE带型相似度为100.0%,ST型均为ST152。结论本次细菌性痢疾暴发的病原为宋内志贺菌,浅水井水可能为感染来源。