脊髓神经干细胞对小鼠视网膜移植的研究

目的 研究原代培养的脊髓神经干细胞在小鼠视网膜的整合和分化情况。 方法 利用细胞培养和体内移植技术 ,将原代脊髓神经干细胞 (NSC)移植到不同年龄小鼠的视网膜 ,并对移植后细胞的整合及分化情况进行了免疫组织化学分析。 结果 1 移植的NSC对组织的整合能力随宿主年龄的增加而降低 ;2 移植的NSC在宿主视网膜内可以分化为星形胶质细胞、少突胶质细胞和神经元。 结论 脊髓原代NSC移植到小鼠视网膜后的整合和分化均受内外因素的调控 。

锌对人体生理功能的影响及作用机制

锌被认为是真核生物体内重要的微量元素。对锌在免疫系统、神经系统及代谢系统中的影响进行了概述，从锌的膜作用机理及核内作用机理两方面对其可能的机制做了探讨，并简单叙述了锌指蛋白的研究现状。

脊髓神经干细胞的培养和鉴定

目的 研究脊髓源性神经干细胞的培养和体外分化情况 .方法 采用细胞培养技术结合间接免疫荧光细胞化学法 .结果 1在只有 EGF存在的情况下 ,没有干细胞团的生成 ;而在只有 b FGF存在的情况下 ,有少量干细胞团生成 ;在EGF和 b FGF同时存在时 ,有大量神经干细胞团生成 . 2体外存活时间越长 ,培养中的干细胞成分越多 ,分化后成分越少 . 3随诱导分化时间的加长 ,分化的细胞类型开始出现并增多 ,干细胞比率下降 .结论 脊髓神经干细胞的存活有赖于 EGF和 b FGF的共同作用 ,体外培养 4wk以上的细胞 ,所含的前体细胞的成分较少 。

神经干细胞的研究进展

神经干细胞(Neural stem cells,NSCs)是指神经系统中处于较早发育阶段的细胞群体,它们可以通过自身的对称性或不对称性两种分裂方式进行自我复制,产生神经组织中不同发育阶段和不同分化方向的细胞,最终生成具有一定细胞数目和多种细胞类型的神经组织[1.2].本文就NSCs的发生和分化、定位、特点、影响其分化的因素以及当前对NSCs的应用做如下介绍.

锌对体外培养胚胎小鼠大脑皮层细胞的影响

锌对体外培养胚胎小鼠大脑皮层细胞的影响７１００３２西安第四军医大学神经科学研究所孟晋宏梁吉吉杨浩鞠躬关键词锌；细胞，培养的；培养基，无血清中国图书资料分类号Ｒ３８８．２５锌是真核生物体内重要的微量元素，在中枢神经系统中的分布以皮层和海马为最多。长期以...

P75^(NTR)的研究进展

在个体发育过程中,不同的神经元群体都需要神经营养因子(NTFs)来促进其存活和分化。随着对神经系统疾病认识的深入,NTFs及其相关受体的作用也越来越受到人们的关注。现在已经知道,在神经元细胞膜上存在有两大类NTFs受体,一类是能够选择性结合NTFs的高亲和力受体(HNGFR),包括TrK A、B、C,它们隶属于TrK酪氨酸激酶家族,在与配基结合方面,TrKA与神经生长因子(NGF)、TrKB与脑源性神经生长因子(BDNF)或神经营养因子4/5(NT-4/5)、TrKC与神经营养因子3(NT-3)的选择性结合。

移植研究中X-gal染色的影响因素及优化条件

目的 研究在细胞移植过程中 ,利用X gal染色定位lacZ转基因细胞时 ,消除宿主内源性 β 半乳糖苷酶 (β galactosidase ,β Gal)非特异背景的条件。 方法 分别取成年及新生大小鼠 ,侧脑室注入LacZ转基因神经干细胞C17 2后 ,于两种不同灌注条件下取脑 ,在 5个pH点 ,6个孵育时间点行x Gal染色 ,计数不同条件下海马区非特异性着色细胞数 ,得出X gal染色的最佳条件。 结果 X gal染色中非特异染色随pH增高及孵育时间缩短而减少 ,在pH为 9 5 ,孵育时间为 1h时较为理想。并与宿主的种属 ,年龄有密切关系。 结论 X gal染色必须从动物灌注、pH和孵育时间等诸方面加以优化并设立同种属同年龄的对照才可获得客观可信的结果。

人胎脊髓内源性神经营养物质的分离纯化

人胎脊髓存在神经营养物质，在以往的研究中已发现它们对脊髓神经元的存活、生长及分化有营养作用。本文采用Superdex－30、反相C18HPLC以及毛细管电泳对于4月龄和8月龄人胎脊髓的神经营养物质进行了分离纯化，活性检测采用体外培养脊髓神经元-MTT方法。分离过程中发现脊髓中有远不止一种神经营养成分可以提高脊髓神经元的活性，最终分离得到一个P1为8．08的蛋白成分，对脊髓神经元的活性有显著的促进作用。

GDNF对缺气损伤的体外培养新生大鼠背根节神经元的作用

运用体外缺气损伤的细胞模型 ,研究GDNF对损伤的新生大鼠背根节神经元( DRG)是否有保护作用。采用原代培养的方法 ,用 N1无血清培养基分离培养 DRG神经元 2 4h后 ,加入含 2 0 μg/m L GDNF的无血清培养液 ,然后液体石蜡封闭培养液 ,继续培养 4,8,1 2 ,2 4h,分别做 MTT实验检测细胞活性 OD值 ,台盼蓝染色记数 ,细胞总蛋白测定以及形态学观察突起生长状况。结果表明 :1封闭 1 2 h后 ,GDNF组的 DRG细胞存活数同对照组相比有显著升高 ( * * P <0 .0 1 ) ,其余各时间点均无显著性差异。缺气损伤 8h和 1 2 h后 ,GDNF组的 DRG细胞总蛋白较对照组显著升高 ( * * P <0 .0 1 ,* P <0 .0 5) ,其余各时间点均无显著性差异 ;2各时间点 DRG细胞活性及突起长度的变化差异均不显著。缺气损伤一定时间后 ,GDNF对新生大鼠 DRG细胞的存活数及细胞总蛋白有明显的保护作用 ,而对细胞活性及突起的生长则没有明显的促进作用。

成年C57小鼠脊髓神经干细胞的培养与鉴定

目的 从成年小鼠脊髓中培养神经干细胞 ,并对其进行鉴定和诱导分化。方法 成年C5 7小鼠 ,悬浮培养神经干细胞技术。结果 培养 1～ 2周时 ,培养液中即可出现神经干细胞克隆球。该克隆球具有很强的自我增殖能力 ,可多次传代。免疫细胞化学技术证明该克隆球表达大量的神经干细胞特征性的中间丝———巢蛋白(Nestin) ;经 1%胎牛血清诱导后可表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞特征性标志物β tubulinIII、胶质纤维酸性蛋白 (Gliafibrillaryacidicprotein ,GFAP)和RIP ,提示它们可朝神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞方向分化。 结论 本研究结果提示正常成年C5 7小鼠脊髓中含有神经干细胞 ,在体外条件下可以大量增殖 。

骨形成蛋白-2诱导脊髓神经干细胞分化的实验研究

目的:研究不同浓度的骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对脊髓源性神经干细胞(neural stem cells,NSCs)诱导分化成为神经细胞(神经元和神经胶质细胞)的影响.方法:取孕14d的胚胎小鼠脊髓,原代培养出脊髓NSCs.培养四代后,分别在碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)存在与否的不同条件下,加入不同浓度的BMP-2,观察细胞的增殖、分化情况,用免疫组织化学的方法进行鉴定,并进行统计学分析.结果:低浓度的BMP-2(1～10ng/ml)与bFGF(20ng/ml)联合作用,可促进脊髓NSCs向神经元和星形胶质细胞分化,抑制其向少突胶质细胞分化.较高浓度BMP-2(100ng/ml)可抑制脊髓NSCs的增殖甚至导致细胞死亡.结论:脊髓NSCs在低浓度BMP和bFGF联合作用下能有效地分化成具有多种特性的神经样细胞,并与脊髓具有良好的同源性,可为脊髓损伤的修复研究提供良好的细胞学基础.

豚鼠胚胎神经干细胞的分离培养、鉴定及标记

目的 从胚胎豚鼠端脑组织中分离培养神经干细胞 ,为神经干细胞移植治疗感音神经性耳聋的实验研究创造条件。方法 分离胚胎豚鼠端脑组织 ,用含碱性成纤维生长因子 (bFGF)和表皮生长因子 (EGF)无血清培养技术培养神经干细胞 ,免疫组化技术检测其巢蛋白 (Nestin)的表达及细胞分化后胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。采用荧光染料Hoechst33342标记神经干细胞。结果 从胚胎豚鼠端脑组织分离出的细胞中可获得呈集落样生长的神经干细胞团 ,并能表达Nestin和分化成神经元和神经胶质细胞 ;荧光染料的标记效率可达 96 .7% ,细胞传代 6次后荧光亮度仍无明显衰减。结论 从胚胎豚鼠端脑分离的细胞具有明显的增殖能力及多分化潜能 ,荧光染料的标记可获得较高的标记效率 ,可作为神经干细胞移植治疗感音神经性耳聋实验研究的供体细胞。

体外培养兔视网膜细胞损伤后的形态变化

目的:观察体外培养的兔视网膜细胞在受到机械损伤后的形态变化。方法:建立乳兔视网膜细胞及与Schwann Cell(SC)共培养模型,采用机械刮损方法对视网膜细胞造成损伤,相差显微镜下连续24小时观察细胞对损伤的反应。结果:刮损后30分钟胶质细胞逐渐移向损伤区,分裂增殖并填补裸区。神经元突起在损伤后6小时开始再生,其生长方向受到周围环境影响,具有“可塑性”。与SC共培养时,损伤后3小时即可发现再生突起。结论:视网膜神经元突起具有一定再生潜力,胶质增生不是再生的绝对障碍,SC对突起再生具有促进作用。眼科学报2000;16:127-130。

兔雪旺细胞对视网膜神经元突起生长的作用

目的观察在体外兔雪旺细胞（Ｓｃｈｗａｎｎｃｅｌ，ＳＣ）对视网膜神经元突起生长的作用。方法乳兔视网膜细胞分别接种在培养２周的单层ＳＣ和多聚赖氨酸（ｐｏｌｙ－Ｌ－ｌｙｓｉｎｅ）表面培养，相差显微镜下观察视网膜神经元的生长状态并在培养的２４、４８小时测量其突起的长度。结果视网膜细胞在ＳＣ表面生长活跃，体外培养２４小时，神经元突起的平均长度达到（８５±１７）μｍ，４８小时为（２８３±２７）μｍ，与无ＳＣ共同培养的对照组相比有显著差异（Ｐ＜０．０１）。结论体外ＳＣ对视网膜神经元突起的生长具有明显的支持、促进作用。