丝裂原活化蛋白激酶通路对成纤维细胞内游离钙的影响

为观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对离体热烫伤后成纤维细胞内钙离子的作用以及丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)通路对胞内游离钙的影响 ,将培养的人成纤维细胞进行热损伤刺激后分成 4组 :①bFGF处理组 (10ng/ml) ;②预先加入PD980 5 9(10 μmol/L)阻断剂 30min,再行bFGF(10ng/ml)刺激 ;③预先加入SB2 0 35 80 (10 μmol/L)阻断剂 30min ,再行bFGF刺激 (10ng/ml) ;④同时加入PD980 5 9(10 μmol/L)和SB2 0 35 80 (10 μmol/L) 2种阻断剂 30min,再加入bFGF(10ng/ml)。应用特异性Ca2 + 荧光指示剂Fluo 3/AM负载细胞 ,激光共聚焦显微镜检测细胞内游离钙的浓度。结果显示 ,受热刺激的成纤维细胞荧光强度较弱。加入bFGF后可促使成纤维细胞中游离Ca2 +浓度升高 ,分别预先加入PD980 5 9和SB2 0 35 80拮抗剂的成纤维细胞 ,再加入bFGF ,胞内钙离子浓度出现不同的钙振荡现象。同时加入 2种阻断剂后胞内钙离子浓度则迅速降低。表明bFGF引起热损伤后的成纤维细胞中游离Ca2 + 浓度的增加 。

棉花农杆菌介导高效转化体系

对棉花农杆菌介导法进一步探讨 ,建立了一套高效转化体系 ,使农杆菌介导法更简单化、具体化。

棉花农杆菌介导法转化机理及研究进展

在农杆菌中Ti质粒上的若干重要区域共同作用下 ,将经改造的含有目的基因的T -DNA片断导入植物基因组中 ,并得以表达。采用农杆菌介导法 ,山西省农业科学院棉花研究所已将多个外源基因导入棉花中 ,获得转化品种与品系。

离体热损伤成纤维细胞所涉及的细胞信号通路

利用已建立的成纤维细胞热损伤诱导凋亡模型观察离体培养的成纤维细胞热烫伤后信号通路的活化情况。首先将原代培养的人成纤维细胞经 5～ 6传代后 ,45℃水中孵育 10min,造成单纯热损伤刺激 ,加入 5 %小牛血清继续培养 ,分别在伤后 0、3 0、60和180min 4个时相点冻存细胞 ,运用Westernblot进行MAPKs信号通路磷酸化蛋白印迹检测 ,同时采用荧光显微镜检测热损伤成纤维细胞caspase3蛋白的表达情况。结果显示 ,经过热损伤刺激的成纤维细胞 ,c junN末端激酶 (JNK)首先开始表达 ,并在 60min达到高峰 ,能持续至 180min。细胞外信号调节激酶(ERK)的表达高峰在伤后 3 0min,随后迅速消退。损伤早期 ,成纤维细胞内caspase3阳性标记的细胞数较少 ,至伤后 60min ,caspase3的表达明显增强。研究表明 。

降低棉花试管玻璃苗的方法

棉花试管玻璃苗是一种呈半透明状，叶片脆弱易碎、且不具有栅栏组织，难以移栽成活的畸形苗。它在一年中的５～１０月时常发生，严重时可使一切工作前功尽弃。因此，降低或抑制玻璃苗的产生，是棉花组织培养的一大难题。本文用晋棉７号转豇豆胰蛋白酶抑制剂基因的胚分化试...

调温移栽地黄脱毒试管苗探讨

采用调节空间温度的方法移栽地黄脱毒试管苗，可使移栽苗成活率达到９５ ％ 以上。

豇豆胰蛋白酶抑制剂转基因棉花的获得

利用根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）介导法将豇豆胰蛋白酶抑制剂（Ｃｏｗ－ｐｅａＴｒｙｐｓｉｎＩｎｈｉｂｉｔｏｒ，ＣｐＴＩ）基因转移进入棉花（ＧｏｓｙｐｉｕｍｈｉｒｓｕｔｕｍＬ．）。棉花幼苗的下胚轴与携带有ＣｐＴＩ基因和Ｎｐｔ－Ⅱ基因的根癌农杆菌共培养，在选择培养基上诱导出了卡那霉素抗性（Ｋｍｒ）愈伤组织。选择Ｎｐｔ－Ⅱ阳性的胚性愈伤组织在胚状体诱导培养基上进行胚状体诱导，继而在分化培养基上进行植株分化，最终获得了再生棉花植株。经Ｎｐｔ－Ⅱ分析、ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ检测证明，外源ＣｐＴＩ基因和标记基因（Ｎｐｔ－Ⅱ基因）存在于转化棉株及其后代中。抗棉铃虫（Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓａｒｍｉｇｅｒａ）生物活性检测表明转基因植株后代具有明显的抗棉铃虫能力。

离体成纤维细胞热损伤模型制作的研究

目的 建立离体细胞烫伤诱导凋亡的模型 ,深入研究组织烫伤后主要修复细胞成纤维细胞的变化。 方法 利用体外细胞培养技术对含小牛血清 (体积分数为 5 %和 1 0 % )的DMEM培养液中的成纤维细胞进行不同温度 (43 ,45 ,48℃ )和不同时间 (1 0 ,30 ,40min)的处理 ,对照组细胞置于 37℃水浴 30min。采用DNA凝胶电泳、Hoeschst332 58荧光染色、透射电镜等技术对烫伤细胞进行检测并分析结果。 结果 在 43℃和 45℃水浴中 ,成纤维细胞孵育 1 0 ,30 ,40min均可出现细胞凋亡 ,以含体积分数为 5 %小牛血清的DMEM培养液、45℃水浴 1 0min一组最为明显。 48℃中水浴 30min以上 ,则出现大量的细胞坏死。对照组中无明显的细胞凋亡发生。 结论 热损伤能造成离体成纤维细胞发生凋亡。

成纤维细胞生长因子2对凋亡成纤维细胞中S100蛋白表达的影响

目的观察热损伤后成纤维细胞凋亡模型中,外用成纤维细胞生长因子2(FGF2)对凋亡细胞S100蛋白表达的影响。方法用含体积分数5％小牛血清的DMEM溶液培养已大致融合的成纤维细胞24 h,置入45℃恒温水浴锅中孵育10 min,建立热损伤细胞模型(热损伤组,3瓶),在上述基础上立即加入FGF2(FGF2组,10μg/L,3瓶)。两组细胞继续常规培养30 min后作免疫荧光双标记,利用激光扫描共聚焦显微镜观察细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)和增殖细胞核抗原(PCNA)以及S100蛋白、磷酸酪氨酸蛋白(P-tyr)、src基因产物蛋白同源的酪氨酸激酶催化功能区-2(SH2-P)表达的变化。结果热损伤组细胞可以同时表达caspase-3蛋白和PCNA两种抗体, 其灰度值分别为140±31、52±8;FGF2组细胞亦见上述两种抗体表达,灰度值分别为75±28、131± 17,PCNA表达量与热损伤组比较,差异有统计学意义(P<0．05)。同时,热损伤组成纤维细胞S100、 P-tyr蛋白、SH2-P蛋白表达阳性,FGF2组细胞S100蛋白和SH2-P的表达明显较弱(P<0．05)、P-tyr 的表达略有减弱。结论离体情况下,热损伤可诱导成纤维细胞凋亡信号的表达;S100蛋白在 FGF2对热损伤导致的凋亡成纤维细胞的增殖和抗凋亡作用中扮演重要角色。

热损伤诱导的丝裂原活化蛋白激酶对活化蛋白-1的影响及其意义

目的 观察成纤维细胞热烫伤后丝裂原活化蛋白激酶以及活化蛋白 1的表达。方法 将培养的人成纤维细胞分成 4组 :( 1)单纯热损伤刺激组 ;( 2 )热损伤刺激 +碱性成纤维细胞生长因子处理组 ( 10 μg/L) ;( 3 )预先加入PD980 5 9( 10 μmol/L) ,再行热损伤 +碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)刺激 ;( 4 )预先加入PD980 5 9+SB2 0 3 5 80 (各 10 μmol/L)阻断剂 3 0min ,再行热损伤 +碱性成纤维细胞生长因子刺激。伤后 0、3 0、60和 180min检测细胞外信号调节激酶 (ERK )和原癌基因c fos蛋白。结果 单纯热刺激的成纤维细胞ERK表达增加 ,随后消失。碱性成纤维细胞生长因子刺激ERK表达增加显著 ,时间延长。加入PD980 5 9拮抗剂 ,ERK的表达受抑制。原癌基因c fos的表达开始增加 ,随后减弱。同时阻断ERK和 p3 8MAPK两条通路 ,c fos弱阳性表达。 结论 碱性成纤维细胞生长因子引起热损伤成纤维细胞ERK表达增加 ,原癌基因c fos是MAPK信号通路下游重要的靶蛋白。